Пропуск в зону ато продлить: Как продлить пропуск в зону АТО?

Содержание

Документи для отримання перепустки в зону АТО Бухгалтерський сервіс «Iнтерактивна бухгалтерія»

Еще раз разбираемся с пропусками СБУ. Регистрацию мы проходили в прошлый раз, в этот затронем тему продления и удаления пропуска. Как можно продлить пропуск в зону АТО на 2022 год через официальный сайт в интернете.

Содержание

Продление пропуска с помощью третьих лиц
Продление в интернете
Удаление пропуска

Продление пропуска с помощью третьих лиц

Если оформление разрешения вы делали не сами, а его срок скоро закончится, нужно попросить человека, занимавшегося оформлением пропуска, зайти в аккаунт и внести вашу заявку.

При отсутствии такой возможности придется подождать окончания срока действия пропуска, зарегистрироваться и открыть новый аккаунт. Это позволит подать заявление на получение пропуска. Иногда люди, которые платили за оформление электронного разрешения, сами продлевают пропуск, не обращаясь на сайт, но это происходит очень редко.

Когда срок действия полностью вышел, пропуск удаляется из истории. Однако его не стирают из базы данных СБУ. Чтобы подать новую заявку, необходимо обязательно удалить уже устаревший пропуск.

Продление в интернете

Полезные сервисы:
Оформление страховки за 5 минут
Дешевые авиабилеты: сравнение цены от всех авиакомпаний

Продлить разрешение на посещение зоны АТО, если вы проходили оформление в интернете, возможно только с его помощью. Для этого нужно зайти на сайт, где выполняется оформление электронных пропусков. Для входа в аккаунт необходимо ввести логин. Пароль пишется только вручную. Копировать нельзя. Для подтверждения пишется проверочный код.

Логином будет служить адрес электронной почты, который был указан при первой регистрации на портале. Затем нужно нажать кнопку «Відновити». Через небольшой промежуток времени на почту будет выслано письмо, в котором подробно описано, какие необходимо выполнить действия, чтобы возобновить пароль.

Когда авторизация будет пройдена, нужно открыть раздел «История подачи заявлений». Здесь можно будет увидеть все сделанные вами заявки. Разрешается написать 5 заявлений на разных лиц.

Если вы оформляли заявку на продление пропуска, так как уже осталось меньше двух месяцев до окончания времени его действия, в графе красным цветом загорится кнопка, с надписью «Переподати».

Полезно знать! Довольно часто такая кнопка появляется не в указанный срок. Ее можно будет увидеть, когда останется две недели, а не два месяца, как было указано. Волноваться не стоит, нужно просто подождать. Она обязательно появится.

После нажатия на эту кнопку перед вами откроется страница регистрации пропуска. Если быть более точным, вы сможете увидеть раздел, в котором будет происходить корректировка написанной вами заявки. Иначе говоря, будут вноситься изменения в информацию, которую вы сообщили во время первой регистрации своего разрешения.

Оформление пропуска в зону АТО

Обычно все заполненные поля остаются без изменений, если, конечно, в этом нет большой необходимости. Убедившись в правильности всех данных, нужно отправить их для дальнейшей обработки.

Статус вашего заявления превратится «В обробцi». Вы увидите надпись с обещанием провести обработку вашего запроса за 10 дней. Никакой сложности в таких действиях не возникает. Все очень просто.

Иногда, когда вы сами пытаетесь продлить ваш электронный адрес, система может написать, что регистрация номера паспорта уже была пройдена. В этом случае нужно нажать кнопку: «Подать заявку». Откроется страница с вашими персональными данными. Кнопку «Далее» нажимать не нужно. Строка браузера заканчивается фразой «step=2». Достаточно изменить двойку на тройку и нажать «энтер». Заявка немедленно отправится в обработку.

Полезная информация! Иногда кнопка появляется на экране, но она выглядит не активированной. После нажатия на нее, появляется сообщение системы, что возникла ошибка. Причина появления такой надписи связана с перегруженностью сервиса. Придется немного подождать и затем повторить операцию. Пройдет несколько дней, и все обязательно получится.

Удаление пропуска

Чтобы в 2022 году удалить пропуск, необходимо выполнить следующие операции:

Написать заявление в письменном виде. Его нужно отправить в выбранную вами координационную группу. Текст заявления должен содержать просьбу провести удаление вашей заявки с указанием ее номера. Требуется описать причину удаления.
Совместно с заявлением подается копия паспорта, ИНН, справка переселенца (только лицам, у которых она имеется).
Написанное заявление необходимо отправлять заказным письмом, обязательно с уведомлением. Разрешается лично отнести ваше заявление в выбранную координационную группу.

Важно! Помните, что координационные группы не занимаются приемом писем, написанных в электронном виде.

Источники

Использованные источники информации при написании статьи:

https://visasam.ru/emigration/pereezdsng/prodlenie-propuska-v-ato.html

Оформление электронного пропуска в зону АТО.

Как оформить пропуск в зону АТО. Пропуск через линию размежевания

4,6/5

Всего отзывов: 49

Оставить отзыв в Google

Больше информации на нашем YouTube

Услуга доступна
по всей Украине

Киев, Винница, Днепр, Донецк, Житомир, Запорожье, Ивано-Франковск, Кировоград, Луганск, Луцк, Львов, Николаев, Одесса, Полтава, Ровно, Сумы, Тернополь, Ужгород, Харьков, Херсон, Хмельницкий, Черкассы, Чернигов, Черновцы

Также мы работаем в следующих странах:

Грузия, Казахстан, Молдова, Литва, Латвия, Эстония, Польша, Венгрия, Чехия, Словакия, Австрия, Германия, Великобритания, Франция, Люксембург, Швейцария, Швеция, США, Канада, ОАЕ, Сингапур, Сейшельские острова, Белиз и др

Обратитесь к нам сейчас и получите:

Качественную консультацию;
Индивидуальный подход;
Цена услуги,соответствующая высокому качеству оказания услуги;
Возможность оплатить удобным для Вас способом;
Конфиденциальность в работе;
Быстрое и надежное решение поставленой задачи;

Мы гарантируем высокое качество услуг за разумную цену.

Догов.

ЗАКАЗАТЬ УСЛУГУ
ЗАКАЗАТЬ КОНСУЛЬТАЦИЮ
ОБРАТНЫЙ ЗВОНОК

С начала 2015 года в связи с вооруженным конфликтом на востоке Украины въезд и выезд на/с оккупированных территорий Донецкой, Луганской областей осуществляется по пропускам. С июля того же года вместо бумажного требуется получить электронный пропуск в зону АТО. Разрешение можно оформить самостоятельно через электронный реестр Службы безопасности Украины либо, если нет времени на прохождение регистрационной процедуры, заказать услугу в юридической компании «Легал Солюшнз». Работаем с жителями Киева, других населенных пунктов Украины, зарубежными гражданами.

Как получить пропуск в зону АТО самостоятельно

В первую очередь необходимо подготовить фото (цифровое либо скан) размером не более 1МБ, которое желательно, но необязательно. Дальнейший алгоритм действий выглядит следующим образом.

Регистрация на сайте СБУ (страница «Реестр разрешений»). Для этого понадобится зарегистрировать электронную почту, создать учетную запись. Поля заполняются на украинском языке. После регистрации необходимо зайти в почту, чтобы узнать присвоенный логин и пароль. Авторизация. Входим на сайт под своим именем. Заявка. Одно лицо вправе получить разрешение не только для себя, но и для других людей (не более 10 человек). Заполняются графы «Гражданство», выбираются секторы для проезда (всего их 5, через все контрольные пункты можно проезжать, выбрав хотя бы один, но лучше выбирать несколько. Переход на вторую страницу осуществляется по кнопке «Далее», после чего заполняются графы с местом проживания, прописки, целью перемещения. Здесь же вносятся данные о детях до 16 лет, которые пересекают границу вместе с родителями (если едет один из родителей, понадобится нотариально заверенное разрешение от второго либо документ, подтверждающий отсутствие второго родителя – свидетельство о смерти, о лишении родительских прав и т.п.).

Разрешение регистрируется на протяжении 3 дней, об этом сообщается на сайте при регистрации. Однако мы рекомендуем оформлять документ за 10–30 дней до поездки.

Нужен срочный пропуск в зону АТО? Сотрудники компании «Легал Солюшнз» помогут получить его за 1 день.

Какие услуги мы предоставляем

Помимо помощи с оформлением разрешения на въезд/выезд на/с оккупированной территории:

проверим электронный пропуск, срок его действия;

внесем исправления в документ либо аннулируем его;

продлим пропуск в зону АТО;

займемся восстановлением логина, пароля.

По информации, представленной на веб-сайте Службы безопасности, начиная с 28 марта 2019 года разрешения выдаются бессрочно. Те, которые были оформлены ранее, необходимо продлить.

Чтобы заказать услугу, оставьте заявку на сайте. После того, как наш менеджер свяжется с вами, вы сможете обсудить детали, способ оплаты. Когда пропуск будет готов, немедленно сообщим вам об этом. Чтобы уточнить подробности сотрудничества, свяжитесь с нашим специалистом по телефону, в онлайн-чате либо мессенджере.

ЗАКАЗАТЬ
УСЛУГУ

Оставьте нам заявку и мы
в скором времени
свяжемся с Вами!

Обязательное поле

Также Вам может быть интересно:

Получить справку о банкротствеСправка об отсутствии банкротства – это справка, которая выдается Министерством юстиции г. Киева. Данная справка подтверждает, что ее хозяин не …
Выписка из единого государственного реестра юридических лицВыписка из Единого государственного реестра (ЕГРПОУ) – это документ, который подтверждает статус ведения предпринимательской деятельности. Выписка зам…
Получение выписки, извлечения и справки из Единого государственного реестраРано или поздно у каждого субъекта хозяйствования – физлица-предпринимателя либо компании – возникает необходимость в получении документов из Единого . ..
Получить справку о несудимостиМы прeдлагаем вам свoи услуги по oформлению справки об отсутствии судимостей в минимальные сроки.
Мы оказываем услугу «получить справку о несудимости…
Получить справку об отсутствии инфекционных заболеванийВнимание! Юридическая компания «Легал Солюшнз» работает только в легальном поле и мы НЕ ЗАНИМАЕМСЯ предоставлением сертификатов или справок, связанных…

Поделитесь информацией:

Продление электронного пропуска в зону АТО

Продление пропуска в зону АТО

Чтобы переоформить разрешение на въезд в зону АТО, необходимо открыть портал https://urp.ssu.gov.ua/. На его странице требуется подать заявление на продление действующего пропуска посещения зоны АТО.

Пропускная система в зоне АТО

Пройдет 10 дней, и будет выписано новое электронное разрешение.

Въезд по новому пропуску можно осуществлять лишь через трое суток после его получения.

Пропуск является бессрочным. Это правило вступило в силу 28 марта 2022 года. Все действительные документы, выданные до 28.03.2019, выдавались на год и сейчас их можно продлевать и получать вместо них новые.

Если до переоформления остается больше 60 дней, продление невозможно.

Продление в интернете

Оформление пропуска в зону АТО

Продление пропуска с помощью третьих лиц

Удаление пропуска

Чтобы в 2022 году удалить пропуск, необходимо выполнить следующие операции:

Написать заявление в письменном виде. Его нужно отправить в выбранную вами координационную группу. Текст заявления должен содержать просьбу провести удаление вашей заявки с указанием ее номера. Требуется описать причину удаления.
Совместно с заявлением подается копия паспорта, ИНН, справка переселенца (только лицам, у которых она имеется).
Написанное заявление необходимо отправлять заказным письмом, обязательно с уведомлением. Разрешается лично отнести ваше заявление в выбранную координационную группу.

Важно! Помните, что координационные группы не занимаются приемом писем, написанных в электронном виде.

Ошибки

Чтобы исправить в пропуске сделанную ошибку, нужно обязательно представить письменное заявление в портал СБУ.

В 2022 году «Реестр разрешений на перемещение лиц в зоне АТО» претерпел несколько изменений. В него вошли дополнительные позиции:

Появилось разрешение автоматически удалять из базы все заявления, которые не были «переподаны» заранее, пока не кончился срок электронного разрешения. Иными словами, чтобы второй раз зарегистрировать пропуск, не требуется повторная регистрация на сайте.
Список документов для оформления электронного пропуска стал намного больше. В него вошли:

Украинский паспорт.
Загранпаспорт.
Вид на ПМЖ.
ID карта.

Теперь удаление заявок и личных данных можно делать самостоятельно, не прибегая к услугам координационных центров.

Важно! Оформление нового пропуска и его переоформление происходит бесплатно.

Технологии и Наука

Новое о высоких технологиях и достижениях науки, информационных технологиях (IT), инновациях и изобретениях, событиях в природе, интересных фактах и явлениях

Срок прошел — переоформляем пропуск в АТО

Друзья, для тех кто около года назад смог оформить пропуск в зоне АТО, возможно используя подробную инструкцию в моем специальном сообщении, должны понимать, что 07.07.2016г. исполняется год с момента официального запуска сайта https://urp.ssu.gov.ua/ по оформлению электронных разрешений (пропусков) для пересечения линии разграничения в Донецкой и Луганской областях. В то же время хочу напомнить, что срок действия электронного разрешения — 1 год с момента оформления.

Как продлить пропуск в зоне АТО

Те, кто подавал заявление на сайте urp.ssu.gov.ua должны заблаговременно пройти процедуру “переоформления” электронного разрешения. Для этого необходимо зайти на сайт под своим логином и паролем — в разделе “Історія подачі заяв” воспользоваться кнопкой “Переподати”. Обратите внимание, кнопка появляется не ранее чем за 2 месяца до истечения срока действия разрешения.
Те, кто подавал заявления через КГ, КЦ могут пройти процедуру “переоформления”, обратившись к КГ, КЦ, либо после истечения срока действия разрешения самостоятельно зарегистрироваться на сайте urp.ssu.gov.ua и подать новое заявление.
Заявления и соответствующие разрешения, срок действия которых истёк, удаляются с сайта. В таком случае необходимо снова зарегистрироваться и подать новое заявление.
Процедура переоформления разрешения — это процедура получения на сайте urp. ssu.gov.ua в течении 10 суток нового электронного разрешения после подачи (переподачи) заявления. Пропуск лиц по новому разрешению возможен через 3 рабочих дня после его получения на сайте (в течении этих 3 рабочих дней информация о новом разрешении передаётся и перезаписывается в информационно-телекоммуникационную систему Государственной пограничной службы Украины для пропуска лиц через КПВВ).
Те, кто утерял свой логин и пароль, можно воспользоваться формой восстановления на главной странице сайта urp.ssu.gov.ua.
Помните! Все процедуры по оформлению и переоформлению электронного разрешения БЕСПЛАТНЫ!

53 thoughts on “ Срок прошел — переоформляем пропуск в АТО ”

Срок действия закончился 26.09.2015 а новый пропуск не дает система сделать, пишет что такая серия и номер паспорта есть в базе

Вы не единственная, Юлия, кто столкнулся с подобной проблемой недавно. Наверное система перегружена в эти дни — ведь у многих только сейчас прошел годовой срок. Говорят, что на пунктах пропуска задерживают, перепроверяют и дают новый или продлевают старый, т. е. проблема решается прямо на КПП. Правда на это уходит некоторое время (кроме очереди).

Подскажите пожалуйста, при оформлении пропуска уже не нужно указывать сектор ?

вхожу в систему за своим логином и паролем. ответ- неправильный логин или пароль,что делать? Это один вопрос. Второй вопросхочу зарегистрировать свою свекровь, ответ.что такая эл.почта есть и дальше не пропускает или пишет пройти проверку, а как ее пройти?

Для себя: смените пароль. Для свекрови: создайте новый почтовый ящик (или используйте другой, если имеете) и зарегистрируйте для свекрови новый аккаунт.

у меня проблема. :родителям делали пропуска, и нашу электронную почту взломали, а восстановить ее невозможно. Что делать?

Заведите ноавый ящик (почту) — это просто. Затем зарегистрируйтесь по новой на сайте и оформите новый пропуск. Но прежде нужно дождаться, пока пройдет срок предыдущего пропуска либо позвонить в службу поддержки и попросить, что бы удалили старый пропуск. Но дозвониться о-о-чень сложно(((

Источники:
http://ogend. ru/it/srok-proshel-pereoformlyaem-propusk-v-ato.html
http://brestovir.by/obmen-vida-na-zhitelstvo-po-sroky-deystviya/

АТО закончилась: как это повлияет на жизнь Донбасса

Виталий Червоненко
ВВС Украина

30 апреля 2018

Автор фото, UNIAN

Підпис до фото,

Военные настаивают, что ситуация с правами человека на Донбассе с переформатированием АТО не ухудшится

30 апреля на Донбассе официально завершается антитеррористическая операция, которую переформатируют в операцию Объединенных сил.

За изменением формального названия стоят не только нюансы управления силовиками, которые участвуют в боевых действиях. Это может повлиять и на повседневную жизнь многих граждан Украины на Донбассе.

Полторак: АТО завершится 30 апреля

Антитеррористическую операцию на Донбассе начал 14 апреля 2014 года и. о. президента Александр Турчинов, а завершает своим указом президент Петр Порошенко 30 апреля 2018 года.

ВВС News Украина разбиралась, что реально изменится от переформатирования АТО для украинцев.

Кто будет руководить

Еще 18 января Верховная Рада приняла закон об особенностях государственной политики по обеспечению государственного суверенитета Украины над временно оккупированными территориями в Донецкой и Луганской областях, который и дал старт переформатированию АТО.

Нестатусные добровольцы: как признать добробаты?
Полторак: в армии до сих пор есть люди, считающие Россию братом

Главная идея изменений — передать формальное командование операцией силовиков на Донбассе от СБУ, которая формально руководила АТО, Вооруженным силам Украины.

Именно военные должны управлять «мерами по обеспечению национальной безопасности и обороны, отпору и сдерживанию вооруженной агрессии РФ», которую теперь коротко называют операцией Объединенных сил.

Для этой операции на Донбассе весь личный состав, оружие и все возможные силовые подразделения подчиняют Объединенному оперативному штабу ВСУ.

Автор фото, President.gov.ua

Підпис до фото,

30 апреля Петр Порошенко официально завершает АТО

Это будет касаться Нацгвардии, СБУ, разведки, пограничной службы и управления государственной охраны.

Президент Украины Петр Порошенко еще в марте 2018 года с подачи начальника Генштаба назначил руководителем новой операции Сергея Наева.

Именно в его руках сконцентрируют руководство силовиками и координацию работы администраций на линии разграничения и на прилегающих к ней территориях.

Территории вместо АТО

До 30 апреля вся территория Донецкой и Луганской областей была зоной АТО, на которой силовики имели специальные полномочия. На ближайших к линии разграничения территориях действовали военно-гражданские администрации.

Призыв-2018: куда отправят юношей

Отныне территории самопровозглашенных «ДНР» и «ЛНР» будут иметь статус оккупированных, линию разграничения будут контролировать военные, территории около нее будут иметь специальный правовой режим.

Там должны образовать так называемые «зоны безопасности», границы которых будет определять начальник генштаба ВСУ по представлению командующего Объединенных сил.

Пока в пресс-службе Генштаба и Министерства обороны не смогли объяснить ВВС News Украина, на какие именно территории будут распространяться эти зоны.

Автор фото, Mil.gov.ua

Підпис до фото,

Сергей Наев — командующий операцией Объединенных сил

Там пообещали, что эта информация станет известна вскоре после переформатирования АТО уже в первых числах мая.

В зонах безопасности решением командующего Объединенных сил могут создаваться районы ограниченного и запрещенного доступа гражданских лиц.

Попадать туда можно будет только по специальным пропускам.

Агентство «Интерфакс» со ссылкой на источники в Миноброны сообщило, что зонами безопасности могут быть около 15 поселков в Донецкой и Луганской областях.

В законе четко прописали усиленные полномочия силовиков, которые будут действовать на территориях этих «зон безопасности». Во многом, как указывают эксперты, эти полномочия перекликаются с теми, какие имели силовики на территории зоны АТО.

Полномочия силовиков

В зонах безопасности силовики имеют право применять оружие и спецсредства, задерживать и доставлять граждан в полицию, проверять документы и в случае их отсутствия задерживать, проводить личный досмотр и досмотр транспорта.

Также прописаны полномочия ограничивать движение транспортных средств и пешеходов, входить и проникать на земельные участки, объекты недвижимости и транспортные средства, а также использовать средства связи и транспорт граждан в случае необходимости.

Многие правозащитники сравнивают такой режим со своеобразной формой военного положения и опасаются, что это может привести к ухудшению соблюдения прав местных жителей.

При этом руководитель Объединенных сил Сергей Наев заявлял, что в гуманитарной сфере их главной задачей будет улучшение условий жизни и безопасности жителей Донецкой и Луганской области.

Автор фото, Getty Images

В законе предусмотрено, что Украина не признает любые акты на временно оккупированных территориях и считает, что они не создают правовых последствий.

Хотя есть исключение, которое касается документов, подтверждающих факт рождения или смерти лица на временно оккупированных территориях в Донецкой и Луганской областях.

Правозащитник Валерия Вершинина рассказала ВВС News Украина, что с переформатированием АТО могут возникнуть определенные проблемы с социальной помощью внутренне перемещенным лицам и жителям Донбасса.

«Нас заверили в министерстве социальной политики, что изменение режима не приведет к ухудшению социального обеспечения. Хотя мы не исключаем, что людям нужно будет подавать документы на получение помощи заново», — рассказала Вершинина.

Как ездить на Донбасс

Одно из серьезных опасений жителей Донбасса в связи с переформатированием АТО — возможное изменение порядка пересечения линии разграничения.

Уже более трех лет на Донбассе действует система электронных пропусков через линию разграничения для граждан Украины, которые ездили на территорию самопровозглашенных республик.

За это время систему наладили, и на получение пропуска можно подать документы в интернете на портале государственных услуг.

Полученный электронный пропуск действителен в течение года, после чего его так же можно продлить через интернет.

Пока нет информации, что передача полномочий руководства АТО от СБУ к военным повлияет на процедуры пересечения линии разграничения.

Автор фото, UNIAN

Представители военных, с которыми мы общались, пока не смогли предоставить точную информацию по этому поводу.

Зато в пограничной службе, которая обеспечивает контроль пересечения гражданами линии разграничения, рассказали ВВС News Украина, что никаких изменений не планируют.

По словам представителя ГПСУ Олега Слободяна, из-за переформатирования АТО в системе пропусков изменений не должно быть, и ранее выданные документы будут действовать.

Похожая ситуация и с журналистами, которые для освещения ситуации в зоне АТО должны были получать полугодовую аккредитацию.

Сначала работники СМИ проходили согласование в СБУ, а затем пропуск выдавало министерство обороны.

С 25 апреля полномочия аккредитовать журналистов полностью перешли к военным. При этом ранее выданные пропуска будут действовать ограниченное время — только до 1 августа 2018 года.

Следите за нашими новостями в Twitter и Telegram

Пограничный пункт Троебортное на границе с Россией. Онлайн очереди в Троебортном

Камера обновляется примерно каждые 3–5 минут.
Обновите страницу в браузере, либо нажмите сюда.

КПП Троебортное на границе с Россией довольно часто бывает перегружен автомобилями.

Зная это вы заранее можете посмотреть в режиме реального времени, какое количество машин стоит на границе прямо сейчас. А если вы попали в огромную очередь, то можете познакомиться и пообщаться с людьми из очереди в комментариях внизу этой страницы.

автомобилем:
от Брянска по трассе М-3 до Севска, от Севска по трассе М-3 до Троебортного, от Троебортного по трассе М-3 до КПП «Троебортное».

А как на сегодняшний день можно пройти границу 17августас россии на украину

Троебортное открыта?

Добрый вечер. Скажите пожалуйста возможно ли продлить Временный ввоз на авто в ТРОЕБОРТНОМ

Здравствуйте. Я гр Укр . Нахожусь в Спб . В ближайшее время хочу поехать домой . Может найдется тот с кем по пути можно будет поехать..

Здравствуйте. Скажите кто ездил последнее время с Украины без основания въезда. Бывали ли случаи, что пропускают?
Или какое основание вы использовали для въезда?

Доброе утро! Подскажите пожалуйста, есть ли очередь на Выезд из России таможенный пункт Троебортное -Бачевск? Собираемся на Украину. Спасибо огромное!

Доброе утро. Подскажите, пожалуйста, что сейчас на пропускном пункте? Машин много? Камера показывает в течении полу-часа одну и туже картинку. Мама должна была перейти границу из Украины в Россию еще в час ночи. Не могу до нее дозвониться, телефон был в сети последний раз в 01.10, геоданные пепедавались от того же времени. Помогите пожалуйста!

Добрый вечер , кто знает, работает ли сейчас пункт пропуска Троебортное? Много машин? Как очередь?

С наступившим, народ! Есть вопрос: Хочу привезти граждан Украины до границы, на украинской стороне они поедут самостоятельно, но!.. Мне надо их высадить в нейтральной зоне, много багажа у них. У меня (водителя) нет оснований на выезд (лечение, обучение, прямая родня и пр.). Смогу ли договориться с погранцами?

Здравствуйте, скажите пожалуйста, еду с РФ домой в Украину, в миграционной карте дата выезда 29.08 но выехала только 05.09. не критично ли это?

Всем привет!
Планирую поездку через Неделю на авто с собачкой. Кто знает чипировать нужно? Тест с собой на ковид вести или там делать? Знаю что там цена выше чем у нас. Если привезу свой будет считаться легальным? не заставят пересдавать? Какая обстановка с самоизоляцией?

Тест с собой на ковид веСти. Как приведёте, пусть подходит к окошку…

Добрый день люди добрые, можно ли проехать в Украине транзитом в Молдову на авто с Российскими номерами и паспорт р-ф, любая информация для меня полезная, спасибо вам огромное.

Кто нибудь может рассказать реальную обстановку на пропускном пункте в данное время. А то камера показывает одну и туже ночную картинку.Мы сейчас с детьми хотим пересечь границу на автомобиле. Кто в курсе событий отзовитесь пожалуйста.

Из России очереди нет, в Россию есть, но для тех, у кого авто не на рос. номерах.Очень долго оформляют временный ввоз авто.Мы простояли 12 часов.Пешеходов мало,без очереди.

Здравствуйте кто подскажет есть ли на границе автомобильная парковка и какая цена за 1 сутки ?

Добрый день,подскажите пожалуйста, вот надо сьездить в Россию к родственникам,думаю ехать с семьёй ,жена и двое детей,совершенно летних, какие документы мне надо оформить? Или же может приглашение от родственников,только родственники жены.

На камере пусто, по факту муж с ребёнком уже 2,5 часа на месте стоят и выехать не могу , как всегда на РФ нп торопятся!

Измученный

Итог прохождения границы-9 часов, вы что реально издеваетесь над людьми!!!! Там же дети! Ребёнок весь изменённый приехал домой!

Добрый день,- Подскажите кто нибудь ), С Молдавии на личном Авто с номерами MD — Возможно ли въехать в Россию?,- Имею гражданство и РФ — без постоянной прописки . …. ???

Здравствуйте. В июне хочу с другом проехать в Россию на машине. Что для этого нужно?

Ужасный пункт, ехал 28 января в Россию со всеми основаниями в итоге не пропустили и в 3:29 написали мне отказ в пропуске был только один вариант проехать и это только с родителями я сказала таможеникам то что собираюсь ждать родителей чтобы пройти русскую границу в итоге меня в 3:37 выставили на дикий холод и вернуться в Украину я не мог и с 3:37 ночи я стоял до 14:20 на диком холоде и снегопаде чтобы вы понимались я не совершенно летний мне 17,скотское отношением к людям я требуют разодраться с этим! Это не нормально как мне сказали это были чиченцы и дагестанцы командировочные

Им по хер они там Боги!

здраствуйте.хотив спросыты какие документы потрибно щоб из украины поихаты в росию на своему авто?потрибно ли какоето преглашение ?

Добрый день. Кто подскажет родственник первой линии это кто? Пропустят ли сестру из Киева в Москву?

Доброго времени суток всем!!!! В июне собираемся к родственникам в Винницу. Мы граждане РФ, как обстановка на пропускном пункте, как пропускают. Заранее благодарен.Всех благ!!!

Здравствуйте, Андрей. Мы ездили в Винницкую область на похороны родственника с 28.03.2021 по 03.04.2021. Нужен целый пакет документов для пересечения границы, в том числе мед.страховку на всё время пребывания в Украине (в том числе и от ковид19), отрицательный ПЦР-тест свежестью менее 72 часов. На Российской границе сказали, что она закрыта, и россиян пускают только в исключительных случаях (у нас как раз был такой). Потребовали свидетельство о рождении жены и наше свидетельство о браке (для подтверждения родства), иначе бы не пропустили. Разумеется, загранпаспорта, нотариально оформленный вызов на Украину от родственников и копия свидетельства о смерти родственника. Пересекали границу в течение 7 часов туда и 6 часов обратно, стоя ночью на улице на морозе. Вот как-то так.

Благодарю за информацию!!! Всех благ!!!

Благодарю за информацию!!! Всех благ!!! С ув.А.

Обстановка как всегда, рабочая. …у кого есть основание, того без проблем выпускают из рф

Здравствуйте. Интересует такой вопрос мы гж Украины хотим ехать на своей машине в Россию, с двумя детьми. Основание на одного ребёнка лечение .Нужно на оба детей Основания ? Или можно только на одного ? И пропускают на машины с украинским номерами ? И тест на covid нужно ребёнку 12 полных лет ?

Гражданам Украины не нужно, не какого основания для выезда из рф

Доброго дня. Нужно продлить временный ввоз авто, го.Украины, работаю в Москве. Кто знает, можно ли без выезда из РФ? Может кто то недавно пересекал границу или планирует и может рассказать как там обстоят дела.

Здрастуйте подскажите пожалуста 4 месяца назат выезжал из Украины, я гражданин РФ приехал В РФ чтобы сделать свежие документы для получения ВНЖ в Украине. Как теперь въехать обратно? Приглашение от родителей есть, что ещё нужно пря пересечения таможни потскажите пожалуйста

Вам нужно пограничникам показать основание для выезда из рф

Добрый день, подскажите пожалйста где возможно оставить свой автомобиль ( на платную стоянку) , поближе к пункту пропуска Троебортное?

Я так понимаю) никто ничего не знает) или знают ,но молчат

Добрый день всем. Ситуация такая муж и я граждане РФ на Украине живут мои родители очень хотим съездить к ним. Есть шансы машиной проехать? Какие условия? Что сейчас для проезда надо? Пожалуйста напишите кто что знает.

Всем привет, кто что слышал о пересечки границы? Когда свободно можно будет ехать в Россию?

Люди че там слышно по поводу ввоза???? Отзовитесь

Привет всем. Кто едет на днях с троеборно или бачевска на территорию Украины? Очень нужно добраться

Люди отзовитесь

Привет. А вы на каких номерах? Тоже хотел ехать продлевать, но тут прочитал новость что всем продлят до 31 марта 2021 года. Звонил в тамжню, сказали есть такая договоренность, но пока официального документа не поступало. Жду и надеюсь, что распоряжение будет.

Ну че там слышно????

Я эту инфу не могу найти, где ты ее нашел???

Так они один раз уже продлили, у меня закончился в августе и они же по решению совета N47 автоматически продлили до 30 сентября, сейчас сижу и не знаю че делать, пипец,ты веришь что продлят еще???

пока жду, через неделю буду решать, что делать

Ну че там слышно???? Продлили?

Давай созвонимся, какой у тебя номер теска????

Да блин Молдавские, но боюсь что обратно не пустят, не знаю че делать а ввоз 30 сентября все

Кто ездил с продлением в воза на границу? Или может кто то собирается? Как там можно не выезжая из россии там заного сделать в воз? Или обратно не пустят без основания

Доброго дня. Удалось ли Вам решить проблему с продлением ввоза ? Ездили на границу? Ищу хоть какую то информацию.

Добрый день кто подскажет за какое время можно пройти границу из России в Украину .через Троебортное .пешком?кто есть на границе подскажите

Зачем пешком…можно сейчас и на машине без пешего перехода границы!

Ну хоть бы кто ответил. Аналогичная ситуация, закончился временный ввоз. Узнать бы можно крутанутся на нейтральной полосе и вернуться в Россию

Как с вами можно связаться??? Хотел бы узнать все по подробнее

Татьяна вы ездили на продление в воза??? Как все прошло?

Здравствуйте!

Подскажите, пожалуйста, может ли гражданин Украины с донецкой пропиской заехать сейчас в Россию, если он прилетел из-за границы Греции (зелёная зона)?
Нужно ли сдать тест или потребуют отсидеть карантин 14 дней на территории Украины?

Буду очень благодарна за ответ.

собираюсь сделать круг на приднестровских номерах,через троебортное,31 августа заканчивается ввоз в Россию,какие проблемы могут быть ,подскажите ,гр рф

Добрый день. Подскажите , вы съездили?

Добрый вечер, отпишитесь как съездите. 12 числа тоже заканчивается, спасибо за ранее.

Добрый день. Ездила на таможню в Троебортное. На временный ввоз. Езжайте , всё делают без проблем. Даже на нейтральную не выезжала .

Доброго дня.Как с Вами можно связаться?

Кто то съездил уже? Тоже планирую 5 сентября ехать на приднестровских номерах, как там обстановка? Кто знает?

Добрый день! Как съездили? Продлили??? Можно без основания в Россию обратно вернутся

Без основания нельзя, а еще если вы не украинец, то и на украину не пустят. Придется жить между таможнями.

Неее жить там не хочу,

Это ужасно….. Столько времени держать на улице людей, детей, пожилых людей… Стоят около 100 человек на улице уже который час. В кпп трубки никто не берет…. Там вообще все спят что ли? Где начальство, что творится, что за безобразие. Люди мёрзнут стоят. Отвратительное прохождение. С Бачевска все прошли, а в сторону российской границы все стоят. Людей за людей уже не держат. И зачем на сайте давать телефон круглосуточный, когда никто не берет трубку???????

Скажите пожалуйста как пускают граждан Украины в РФ

Добрый день Может кто ответит Я гр Украины пересекла границу 31 июля ,на автомобиле ,справка-паспорт на КОВИД ЕСТЬ .приехала к отцу в Воронежская обл нахожусь здесь уже 10 дней и получила сообщение что нужно срочно вернуться домой в Украину Какие вопросы возникнут на границе России если буду выезжать

Добрый вечер. Подскажите кто пересекал границу на машине(украинские номера) со стороны Украины в сторону России (Троебортное или через Сеньковка), пропустили ли Вас? Если пропустили напишите пожалуйста какие нужны документы и какие ограничения на въезд в РФ? Нужна ли справка Короновирус?

Лучше паспорт на три анализа перевод на английский(это вам сделает лаборатория)там где будите знавать анализ Но у меня ее на границе медслужба даже не спросила померили температуру и сказали езжайте Пограничники проверили паспорта и копии документов к кому едем ,граждан России (если к мужу копия паспорта и свид о браке, если к детям их копия свид о рождении что это ваши дети и паспорт копии гр России,если к отцу тоже свид о рождении ваше и его паспорт гр РФ) дальше заполняете документы на машину ,проверяют и едите Удачи

Здравствуйте! Я гражданка РФ надо заехать в Украину . У меня больной отец 78 лет мне надо его забрать ,выписки от врача нет , но есть приглашение от сына на Украину до 16 октября этого года пойдет ли это приглашение .? Я читала в комментариях что мужчин не пускают в Украину , а женщин? И еще страховку на ковер-19 надо переводить на украинский и заверять у нотариуса

Добрый день, подскажите, если на несовершеннолетнего ребенка есть основание на лечение, то мне, как матери, какие с собой надо иметь документы?

Добрый день! Подскажите, пожалуйста, я гражданка России, сейчас в России нахожусь. Муж — гражданин Украины, находится в Украине. Я на основании свидетельства о браке смогу выехать из РФ и въехать в Украину? ВНЖ в Украине нет пока. Нужно что-то дополнительно: страховка от ковид, тесты на корону? Как сейчас с выездом/въездом? В Украине сажают в обсервацию, если следую по месту прописки принимающей стороны?? Звонила в погранслужбу в Брянске — телефоны вечно заняты!

Добрый вечер! Вы в итоге решились ехать? Аналогичная ситуация, не пойму, выпустят из России или нет. Спасибо!

Здравствуйте. Ищу попутчика в ближайшее время для пересечения Харьков — Белгород или Бачевск-Троебортное. Могу довезти до границы .

Бачевск-Троебортное

Вопрос, может ли гражданин Украины в ближайшее время пересечь границу? В РФ хочет приехать на Пмж, какие документы надо и что он должен сделать?

Добрый День. Мы граждане Германии.
Планируем отпуск в Россию.
Хотим ехать на машине, через Украину транзитом в Россию.
Пропустят ли нас на границе.
Какие документы нужны?

Для граждан РФ, планирующих посетить Украину, перед началом поездки рекомендую сначала ознакомиться с Распоряжением Правительства РФ от 27 марта 2020г. № 763-р с изменениями и дополнениями от 16,29 апреля, 29 мая, 6 июня 2020 г. И запастись необходимыми документами + копиями, если не хотите с границы вернуться домой.

Пропустят ли меня с Украины в РФ? На границе Украины по звонку ответили да, а какие условия со стороны РФ?

Здравствуйте! Ищу попутчика в ближайшее время для пожилой мамы для пересечения границы Бачевск-Троебортное. Мама в Конотопе Сумской области. Варианты разные, вы можете с ней поехать из Конотопа на границу на такси или на своём транспорте забрать. Нам самое важное, чтобы ей кто-то помог пересечь границу. 80 лет, ходит с палкой, минимум багажа, гражданка Украины с основаниями для въезда в РФ. Встречаем в Троебортном.

Здравствуйте Светлана . Если Вам еще надо как можно с Вами связаться ?

Добрый день! Подскажите пожалуйста, т к дозвониться не реально совсем…. Планируем ехать в РФ я с мужем и грудным ребёнком к моей маме в Воронеж из Киева, не будет проблем у моего мужа с въездом? А тут так стращают, что мол вас пропустят а мужа нет. Загран паспорта у всех троих. Заранее спасибо!

Подскажите, пожалуйста, при въезде в РФ с супругой нужен ли перевод украинского свидетельства о браке на русский язык? и каковы требования в связи с Covid-19?

Здраствуйте подскажите пожалуста я как гражданин украини могу пройти пешим переходом с росии? За ранее спасибо за ответ)

Можете

Добрый день! Подскажите пожалуйста открыли ли границу России (Троебортное) для пересечения на автомобиле со стороны Украины? И какие новые правила для пересечения границы России? Спасибо

Открыли. Ехала 9 июля еще. Почти никого на границе. Правила зависят от того гражданином какой страны являетесь

Добрый день! Подскажите пожалуйста, кто ехал маршрутом Москва — Кишинев? Как проходят эту таможню? Говорят всех высаживают на таможне. Для чего? До Кишинева доезжает автобус или нет? Ситуация совсем не понятна.. Спасибо всем за ответ!

Привет) Ребята, нужна информационная помощь! Какое расстояние в буферной зоне от Троебортное до Бачевск. У меня такая ситуация, мы граждане Украины ( я, дочь, внук 6 лет, внучка 5 лет ) на следующей неделе будем пешком пересекать границу. Выезжаем с Москвы. Это связано с переездом. Будет примерно 30 сумок!!! Тележку в помощь уже купили) . Подскажите, в какое время суток лучше быть на первом КПП, чтобы быстрее пройти? Какое расстояние между КПП? И ещё вопрос, нас со стороны Украины будет встречать машина. Может ли водитель заехать в нейтральную зону, чтобы помочь нам с багажом? Заранее, спасибо за ответ)

Расстояние где-то 1 км по-моему, в том году проходили пешком, точнее не скажу. Заехать на нейтральную територрию не давали. Была на границе сейчас 10 июля, в районе 5 вечера. Людей очень мало и их вообще сейчас мало.

Всем здравствуйте. Телефон реально не берут, есть ли какие ещё конатакты?
И может кто нибудь знает, есть ли шанс въехать в Украину в июле как сезонный работник в Европе с трудовым договором справкой о короне? Был бы признателен за отклик

Добрый день. Подскажите пропускают ли Граждан Украины на своем авто в Россию ?Нужно ли будет сидеть на самоизоляции и какие нужны документы ?!Очень нужно !Спасибо!

Добрый день всем!!! Подскажите пожалуйста открыт ли пропускной пункт и можно ли из России с семьей выехать в Украину.Заранее благодарен! Всех благ!!!

Я выезжала из Украины вчера и заранее спрашивала про въезд. Гражданка РФ. Во время карантина гражданин РФ может покинуть границу России однократно по трем причинам: вызов на работу в стратегически важном объекте(энергетическом, ядерном и тд), при ВНЖ, по уходу за близким родственником(справка из медучреждения о неоюходимости ухода и доказат-ва родства). Всё. Больше ничего не прокатывает. Совсем. Украина пускает граждан РФ с обязательным установлением Дий по отслеживанию. Но до украинской границы через российскую не пробраться.

Ольга, скажите, пожалуйста, а по возвращению в РФ Вам надо будет сидеть карантин 14 дней? И возможно, ли выехать без мед.справки? Родителям 70 лет? Спасибо

Тем кто въезжает в РФ с 15го июля не надо карантин сидеть, надо пцр за максимум три дня до въезда сделанный или в течении трех суток после въезда. Медсправку не спрашивали.

Добрый день, тоже интересует можно ли сейчас гражданину Украины въехать в РФ к близким родственникам? какие новости по пересечению границы? пускают?

Здравствуйте! Подскажите пожалуйста! Украинцы могут вьехать в РФ или нет? очень нужно. может номер подскажет кто! Спасибо тем кто ответит

Здравствуйте! Подскажите пожалуйса можна ли вьехать в РФ?

Когда откроют границы?

Говорят что там уже работает

Всем привет!!! Люди

подскажите пожалуйста как можно дозвониться ?звоню по этому номеру +7 (483) 267-17-88 не берут трубку

Здравствуйте! Подскажите пожалуйста как мне быть.
У меня парень гр украины, в россии у него ничего нету ни рвп, ни официального брака, ни родственников.
Я гр РФ беременная от него.
Когда мы вместе выезжали с украины нас обоих выпустили,но на границе рф меня пропустили а его развернули обратно.
Я боюсь что так и буду рожать без него.
Подскажите может какие варианты есть какие нибудь чтобы его пропустили?

Можно ли выехать из РФ чтобы вывезти отца из Украины на лечение в Рф

Кто подскажет как оформить россиянину страховку от ковид19 для поездки в Украину?

Выезд запрещён!!!
Я гражданин РФ, из Брянска мне не далеко, решил поехать к сестре,
оформил вызов рабочий
страховку от ковид
приехал и мне сказали что только если с той стороны подадут доки в пограничную службу и меня внесут в списки тех кто так необходим, тогда вместят а так даже не стали смотреть на мои документы
Я поехал обратно (

Сегодня знакомый прошёл границу с укр паспортом и сел на карантин При нем проехала машина на номерах рф страховка+справка что родители болеют

А ваш знакомый украинец? И въезжал на территорию РФ?

Знакомый Украина, въезжал на Украину

Спасибо за ответ! И удачи в следующий раз

Какая страховка от ковид? Кто ее требует?

Евгений, кто не дал въехать Укр? Фамилия сестры такая же? Возраст? Приглашение было? Спасибо

Добрый день,а как насчёт въезда в РФ?

Здравствуйте. Нам с женой нужно в Украину из России. Хотим к родителям в гости. Мы оба уже давно граждани России. Нас выпустит Российская старого? И пустит ли Украинская.

Извините, никто не отвечает?. А так нужна информация!

Доброго вечера всем. Подскажите пожалуйста, возможно ли на личном транспорте проехать транзитом через Украину в Молдавию? На каких условиях? (мед страховка, какие либо иные документы и т. п.) или если есть информация, может быть через другие посты Сеньковка или Новые Яриловичи. Большое спасибо за ответы.

Здравствуйте! Подскажите кто знает или сталкивался с подобной ситуацией. Может кто-то пересекал границу гражданин Украины с видом на жительство в РФ на легкомоторных автомобиле, который зарегистрирован на ВНЖ РФ? На сколько дней пропускаю автомобиль? Очень много вопросов. Всем кто ответит- спасибо большое! Выезжать надо через неделю.

Поправочка — объяснили все, что написано в предыдущем комментарии, не на КПП, а в Погранслужбе Брянской области (туда и обращайтесь), но сотрудник КПП внимательно выслушал и переадресовал куда надо. В любом случае спасибо!
Дополню коммент: по состоянию на 20.06.2020 выезд из Украины свободный.
При следовании из Киева в Москву работают КПП \»Троебортное — Бачевск\» и \»Сеньковка — Новые Юрковичи\»

Здравствуйте, может вы знаете, могу ли я (гражданка Украины) проехать в Россию просто так, не указывая причину?

Ну вообще-то пока границы закрыты, исключения смотрите в Распоряжении Правительства 635-р от 16.03.2020 и в свежих дополнениях к нему — Распоряжение №1511-р. В целом, для простых смертных самая распространенная возможность въехать — наличие близких родственников — супругов, детей, родителей (к ним можно ехать и не для ухода, а просто так, но нужно подтвердить родство).

Слава богам, на этом КПП работают приятные и адекватные люди, которые все объяснили по поводу въезда в РФ из Украины. Спрашивала насчет въезда своей мамы, гражданки Украины для ухода за ее мамой (моей бабушкой), гражданкой РФ. Для тех, кому актуально: нужны доки, подтверждающие родство (свидетельство о рождении, удостоверения личности обеих (от того, к кому едут — копия), при смене фамилий — копии свидетельств о браке. Если цель — уход за больным человеком, то еще копия справки из мед. учреждения (можно фото справки, но распечатать его на бумаге). Но подсказали, что можно въехать и просто по близкому родству, не для ухода, в частности моя мама (гражданка Украины, повторяю) может въехать ко мне, дочери, гражданке РФ, нужны аналогичные документы о родстве.
Сотруднику — большое спасибо!

Подскажите, пожалуйста,пускают ли через КПП Бачевск-Троебортное украинцев в Россию?

Здравствуйте Ален вы не в курсе пропускают украинцев в Россию

ВСе урааа открыли бачевск и троебортное!

Можно узнать более подробную информацию?

Можно поподробнее информацию!? Когда, для кого, на чем пересекать можно, какие условия и так далее!!!

Открыли для кого? Въезд или выезд? Где конкретика??

У меня есть два гражданства, Украины и РФ. Пустят ли меня в РФ на автомобиле с украинскими номерами если я являюсь собственником. Но есть нюанс, я 27 марта выехал из РФ по паспорту Украины, при пересечении паспорт РФ не предъявлял. Т.е. получается что я как гражданин РФ из страны не выезжал.

Добрый вечер!
Подскажите, пропускают ли сейчас с Украины в РФ?

День добрый. Вопрос к тем, кто недавно провозил домашних питомцев из России в Украину: какие требуются документы? Как проходится досмотр? Необходимо ли наличие теста титров антител бешенства (не прививки)?

Добрый день Так же обеспокоен этим вопросом Украина входит в число стран для въезда в которую необходим тест на титр антител к вирусу бешенства. Но вот насколько это все проверяется на границе? Хотя без этого теста могут не выписать ветеринарный сертификат

Добрый день С ноября 2019 необходимо определение антител к вирусу бешенства, которые делают 10-14 во Владимире и Москве

Добрый день, едила в октябре возила щенков родителям, привиты должны быть по возрасту, после прививки от бешенства должен пройти месяц. Необходимо в вет больнице получить \»ветеринарное свидетельство\»его печатают из программы, он без голограм и всяких водных знаков. Мне в ветеринарке сказали,что необходимо еще получить \»ветеринарный сертификат\» (он печатается на бланках строгой отчетности, заполняется на русском и английском языках в Россельхознадзоре (это еще + нервы и $). На таможне РФ на сказали, что достаточно было бы Вет Свидетельства, зря вы потратились, а на украинской границе ветеринар, сказала, что ей мой сертификат не походит совсем, ей нужно свидетельство.!!! И она на меня, если сотрудники таможни скажут, составит акт и вернет обратно в РФ. и ей все равно, что сертификат на ранг выше чем свидетельство, и что щенкам 3 месяца и мы проехали почти 1000км. Мне сотрудники таможни никаких вопросов не задавали и мы поехали дальше)

Всем привет! Подскажите кто выезжал с РФ (гражданство РФ) по вид на жительству в Украину? Нужно только сама посвидка по постоянное проживание в Украине или еще какие документы? Спасибо большое!

Здравствуйте! Подскажите, без проблем ли можно въехать в Украину гражданину Украины с видом на жительство в России? Спасибо!

Здравствуйте! Скажите кто знает может ли въехать в рф отец ребёнка гр Украины , ребёнку 1,8 гражданин России у папы есть копия свидетельства о рождении и установлении отцовства

Добрый день. подскажите кто может знает , я гражданин Украины, живу сейчас в России с сыном,(сын тоже гражданин Украины), хочу отправить сына с моим другом в Украину. Это возможно с чужим человеком отправить? достаточно разрешения(доверенность) одного из родителей? и вообще что нужно?

‭8 (483) 267-16-98‬
Номер актуальный Троебортное

Здравствуйте, я гражданка Украины, но сейчас нахожусь в России, хочу вернуться но у меня много вещей. Подскажите пожалуйста, могу ли я пересечь Русскую границу на русской машине, а на нейтралке пересесть в украинскую и на ней пересечь украинскую, чтобы мне вручную не переносить все вещи? И ещё вопрос, кто знает актуальный номер пограничной службы Троеборное? (На +7 483 267 17 88 не берут трубку)

Скажите пожалуйста , можно ли въехать в Украину гражданам РФ на личном транспорте , или может кто знает когда можно будет ? Спасибо.

Кто знает пропускают уже в РФ? Подскажите пожалуйста!!!

Здравствуйте! Вам никто не ответил? Пропускают ли ?

Добрый день Подскажите пожалуйста как обстоят дела на таможне Возможен ли въезд в Российскую Федерацию

Привет всем! Вопрос к тем, кто пересекал границу во время карантина! Очень сильно интересует обстановка и требования при прохождении обеих границ сейчас, во время карантина ? Делают ли тест на коронавирус при вьезде в Украину и заставляют ли проходить 14 -ти дневную самоизоцяцию по прибытию ? Спасибо ! И всем счастливых дорог!

Добрый день! Имею вид на жительство в Украине , проживаю там же . Сейчас нахожусь в России, могу ли я вернутся домой???

Можете. Граждан Украины и людей с видом на жительство пропускают

Добрый день. Конечно можете, имея украинскую посвитку, только в Украине вас посадят на карантин

Алексей я тоже хочу узнать работает или не говорят на машине можно проехать

Здравствуйте, скажите кто небудь граница Троебортное открыта?

Открыта

Открыта,но правила проезда какие?

Пропускной режим в зоне АТО – последние новости LB.ua

Материалы по теме

23 февраля 2022, 18:12

Из-за обстрелов ГСЧС сворачивает пункты оказания помощи населению на четырех КПВВ
Работу пунктов Государственной службы Украины по чрезвычайным ситуациям для оказания помощи населению, размещенным в пределах контрольно-пропускных пунктов въезда/выезда на линии разграничения…
18 февраля 2022, 13:06

Оккупанты в течение часа 13 раз открывали огонь на Донбассе
По состоянию на 11. 00 18 февраля, со стороны вооруженных формирований Российской Федерации были зафиксированы 33 нарушения режима
прекращения огня. 22 раза оккупанты применили запрещенное…
11 февраля 2022, 17:07

Премьер Литвы побывала на линии разграничения в Луганской области
Находящаяся с визитом в Украине премьер-министр Литовской Республики Ингрида Шимоните побывала на линии разграничения в Луганской
области. Она ознакомилась с работой КПВВ «Станица…
09 февраля 2022, 19:26

Оккупанты на Донбассе озвучили новое требование для открытия КПВВ
Оккупационные власти в отдельных районах Донецкой и Луганской областей озвучили новое требование к украинской стороне — хотят прямых контактов санитарных врачей ОРДЛО и Украины.
Об…
02 февраля 2022, 10:45

Оккупанты обстреляли КПВВ «Гнутово»
Около 8:30 сегодня, 2 февраля, российско-оккупационные войска произвели обстрел контрольного пункта въезда-выезда «Гнутово» в
Донецкой области.

Как сообщает пресс-служба ГПСУ,…
09 декабря 2021, 12:36

Пьяный житель Донецкой области на Chevrolet пытался прорваться через блокпост, нацгвардейцы применили оружие
В Донецкой области для задержания правонарушителя, совершившего прорыв через блокпост, военный наряд Национальной гвардии из состава
Объединенных сил вынужден был применить огнестрельное…
20 ноября 2021, 11:27

Оккупанты блокируют большинство гуманитарных дорожных коридоров, – МВД
Работа всех КПВВ на линии разграничения на Донбассе начинается ежедневно с 08:00 и длится до 16:00, но движение по большинству гуманитарных
дорожных коридоров заблокировано со стороны…
18 сентября 2021, 18:44

США призвали Россию продлить мандат миссии ОБСЕ на границе с Украиной
Соединенные Штаты выразили «глубокое сожаление» из-за решения России заблокировать продление
мандата наблюдательной миссии ОБСЕ на российских пунктах пропуска «Гуково» и…
13 сентября 2021, 16:57

Полиция разоблачила схему с поддельными COVID-тестами для жителей ОРДЛО
Киберполиция прекратила схему сбыта справок с отрицательным результатом на COVID-19 для пересечения линии разграничения с
временно оккупированными территориями Донецкой и Луганской…
25 августа 2021, 20:04

Швейцария передала Украине 1,5 млн экспресс-тестов на COVID-19
Швейцария предоставила Украине в качестве гуманитарной помощи 1,5 млн тестов на коронавирусную инфекцию COVID-19 для
использования на контрольных пунктах въезда-выезда на линии разграничения…
28 июля 2021, 22:33

Украина запускает автобусы между КПВВ и линией разграничения на Донбассе и в Крыму
Минреинтеграции запускает бесплатные автобусы между КПВВ и линией разграничения с оккупированными территориями Донбасса и Крыма. Воспользоваться
ними смогут граждане, которые пересекают…
24 июля 2021, 11:15

Вступил в силу закон об отмене штрафов для жителей ОРДЛО за нарушение порядка въезда-выезда
Закон об отмене штрафов для жителей ОРДЛО за нарушение порядка
въезда-выезда вступил в силу в субботу, 24 июля.
Законодательный акт, принятый Верховной Радой 29 июня 2021 года, опубликован…
12 июля 2021, 13:01

Оккупанты полностью блокируют работу пяти КПВВ на Донбассе
Оккупанты на Донбассе продолжают блокировать работу контрольных пунктов въезда-выезда на линии разграничения.
С украинской стороны открыты все семь КПВВ, однако полноценно работает…
30 июня 2021, 17:49

Оккупанты в ОРДЛО распространяют фейки о «жестком карантине» в Украине
Оккупанты на Донбассе сегодня вызвали очередь напротив пропускного пункта «Станица Луганская», распространяя фейки о жестком карантине на подконтрольной правительству Украины территории…
29 июня 2021, 19:55

Рада отменила штрафы для жителей ОРДЛО за нарушение порядка въезда-выезда
Верховная Рада освободила граждан Украины, проживающих на временно оккупированных территориях, от административной ответственности на время действия карантина, объявленного в связи…
14 июня 2021, 12:34

Минобразования попросило Госпогранслужбу не наказывать поступающих из ОРДЛО за нарушение порядка въезда
Министерство образования и науки Украины осудило действия оккупационных властей неподконтрольных Украине территорий, которые создают препятствия для
лиц, которые хотят учиться в учебных…
09 июня 2021, 19:46

Кравчук призвал освободить из ОРДЛО четырех тяжелобольных украинцев
Во время сегодняшних консультаций ТКГ в формате видеоконференции глава украинской делегации Леонид Кравчук призвал
освободить четырех удерживаемых оккупационными властями ОРДЛО тяжелобольных…
09 июня 2021, 18:43

Боевики ограничили выезд детей старше 14 лет без паспортов, нарушая права на образование и свободу передвижения, — Денисова
Оккупационные власти так называемой «ДНР» ограничила выезд детей старше 14 лет на подконтрольную украинскому правительству территорию.
Об этом сообщила уполномоченный Верховной Рады…
19 мая 2021, 19:47

Заседание ТКГ: стороны подтвердили гарантии безопасности для открытия КПВВ
Во время общего заседания Трехсторонней контактной группы по урегулированию на Донбассе в формате видеоконференции 19 мая стороны
подтвердили взаимные гарантии безопасности для разблокирования…
18 мая 2021, 16:57

Премьер Эстонии посетила пропускной пункт «Станица Луганская»
Сегодня, 18 мая, премьер-министр Эстонии Кая Каллас и вице-премьер-министр Украины Алексей Резников находятся с визитом на Луганщине.
Об этом сообщила пресс-служба…
16 апреля 2021, 10:56

В ОРДЛО доставили 18 тонн гуманитарного груза для помощи при COVID-19

Согласно распоряжению командующего операции Объединенных сил, возобновлена доставка гуманитарных грузов на временно оккупированные территории Донбасса. 15 апреля на временно оккупированные…
14 апреля 2021, 13:20

Оккупанты дистанционно минируют дорожный коридор в КПВВ «Майорское»
Российско-оккупационные войска перешли к существенному обострению ситуации в сфере безопасности в пределах гуманитарных дорожных коридоров.
Об этом сообщает пресс-служба Государственной…
07 апреля 2021, 14:33

Бесплатное тестирование на COVID-19 на КПВВ прошли более 10 тыс. человек с начала года
В течение января-марта 2021 года бесплатное тестирование на COVID-19 на контрольно-пропускных пунктах въезда/выезда в
Донецкой, Луганской и Херсонской областях прошли 10 090…
22 марта 2021, 19:59

Бесплатное тестирование на COVID-19 на КПВВ прошли почти 6 тыс. граждан, — Резников
Начиная с января на контрольно-пропускных пунктах въезда/выезда в Донецкой и Луганской областях услугой бесплатного тестирования
на коронавирусную болезнь воспользовались 5794 граждан…
24 февраля 2021, 09:36

Украина предоставила автобусы для перевозки граждан через линию разграничения, но оккупанты их не пускают
По инициативе главы украинской делегации в Трехсторонней контактной группе по Донбассу Леонида Кравчука, начиная с 24 февраля Украина предоставила автобусы-челноки для перевозки граждан…

Транспорт молекул между ядром и цитозолем — Молекулярная биология клетки

Ядерная оболочка окружает ДНК и определяет ядерный компартмент . Эта оболочка состоит из двух концентрических мембран, пронизанных комплексами ядерных пор (). Хотя внутренняя и внешняя ядерные мембраны непрерывны, они сохраняют различные белковые составы. Внутренняя ядерная мембрана содержит специфические белки, которые действуют как сайты связывания хроматина и белковой сети 9 клеток.0003 ядерная пластинка , обеспечивающая структурную поддержку этой мембраны. Внутренняя мембрана окружена внешней ядерной мембраной, которая является продолжением мембраны ЭПР. Подобно мембране ЭПР, которая будет описана далее в этой главе, внешняя ядерная мембрана усеяна рибосомами, участвующими в синтезе белка. Белки, образующиеся на этих рибосомах, транспортируются в пространство между внутренней и внешней ядерными мембранами ( перинуклеарное пространство), которое продолжается в просвет ЭПР (см. Рис. 1).

Рисунок 12-9

Ядерная оболочка. Двойная мембранная оболочка пронизана комплексами ядерных пор и переходит в эндоплазматический ретикулум. Рибосомы, которые в норме связаны с цитозольной поверхностью мембраны ЭР и внешней ядерной мембраной, представляют собой (подробнее…)

Двунаправленный обмен происходит непрерывно между цитозолем и ядром. Многие белки, функционирующие в ядре, включая гистоны, ДНК- и РНК-полимеразы, регуляторные белки генов и белки процессинга РНК, избирательно импортируются в ядерный компартмент из цитозоля, где они производятся. В то же время тРНК и мРНК синтезируются в ядерном компартменте, а затем экспортируются в цитозоль. Как и процесс импорта, процесс экспорта является избирательным; мРНК, например, экспортируются только после того, как они должным образом модифицированы реакциями процессинга РНК в ядре. В некоторых случаях транспортный процесс сложен: например, рибосомные белки образуются в цитозоле, импортируются в ядро, где они собираются вместе с новообразованной рибосомной РНК в частицы, а затем снова экспортируются в цитозоль как часть рибосомного белка. подразделение. Каждый из этих шагов требует селективного транспорта через ядерную оболочку.

Комплексы ядерных пор перфорируют ядерную оболочку

Ядерная оболочка всех эукариот перфорирована крупными сложными структурами, известными как комплексов ядерных пор . В клетках животных каждый комплекс имеет расчетную молекулярную массу около 125 миллионов и, как полагают, состоит из более чем 50 различных белков, называемых нуклеопоринами, которые расположены с поразительной октагональной симметрией.

Рисунок 12-10

Расположение комплексов ядерных пор в ядерной оболочке. (A) Небольшая область ядерной оболочки. В поперечном сечении комплекс ядерных пор, по-видимому, имеет четыре структурных строительных блока: столбчатые субъединицы, которые образуют основную часть стенки поры; (подробнее…)

В целом, чем активнее ядро транскрипционно, тем больше поровых комплексов содержит его оболочка. Ядерная оболочка типичной клетки млекопитающих содержит 3000–4000 комплексов пор. Если клетка синтезирует ДНК, ей необходимо импортировать около 10 ⁶ молекул гистонов из цитозоля каждые 3 минуты, чтобы упаковать новообразованную ДНК в хроматин, а это означает, что в среднем каждый комплекс пор должен транспортировать около 100 молекул гистонов. в минуту. Если клетка быстро растет, каждому комплексу также необходимо транспортировать около 6 вновь собранных больших и малых рибосомных субъединиц в минуту из ядра, где они образуются, в цитозоль, где они используются. И это лишь очень малая часть всего трафика, проходящего через поровые комплексы.

Каждый комплекс пор содержит один или несколько открытых водных каналов, через которые могут пассивно диффундировать небольшие водорастворимые молекулы. Эффективный размер этих каналов был определен путем введения меченых водорастворимых молекул разного размера в цитозоль и последующего измерения скорости их диффузии в ядро. Небольшие молекулы (5000 дальтон и менее) диффундируют внутрь настолько быстро, что ядерную оболочку можно считать свободно проницаемой для них. Белку массой 17 000 дальтон требуется 2 минуты, чтобы уравновеситься между цитозолем и ядром, в то время как белки массой более 60 000 дальтон едва ли вообще могут проникнуть в ядро. Количественный анализ таких данных позволяет предположить, что комплекс ядерных пор содержит путь для свободной диффузии, эквивалентный заполненному водой цилиндрическому каналу около 9нм в диаметре и 15 нм в длину; такой канал занимал бы лишь малую часть всего объема порового комплекса ().

Рисунок 12-11

Возможные пути свободной диффузии через комплекс ядерных пор. На этом рисунке показана гипотетическая диафрагма (серая) , вставленная в пору, чтобы ограничить размер открытого канала до 9 нм, размер пор оценивается на основе измерений диффузии. Девять нанометров (подробнее…)

Поскольку многие клеточные белки слишком велики, чтобы проходить путем диффузии через комплексы ядерных пор, ядерная оболочка позволяет ядерному компартменту и цитозолю поддерживать различные белковые комплементы. Зрелые цитозольные рибосомы, например, имеют диаметр около 30 нм и поэтому не могут диффундировать через 9нм каналы; их исключение из ядра гарантирует, что синтез белка ограничивается цитозолем. Но как ядро экспортирует новообразованные рибосомные субъединицы или импортирует большие молекулы, такие как ДНК- и РНК-полимеразы, молекулярные массы субъединиц которых составляют 100 000–200 000 дальтон? Как мы обсудим далее, эти и многие другие молекулы белков и РНК связываются со специфическими рецепторными белками, которые активно переносят их через комплексы ядерных пор.

Сигналы ядерной локализации направляют ядерные белки в ядро

Когда белки экспериментально извлекаются из ядра и повторно вводятся в цитозоль (например, через экспериментально индуцированные перфорации в плазматической мембране), даже очень большие белки эффективно реаккумулируются в ядре. Селективность этого процесса ядерного импорта заключается в сигналах ядерной локализации (NLSs) , которые присутствуют только в ядерных белках. Сигналы были точно определены в многочисленных ядерных белках с использованием технологии рекомбинантной ДНК (14). Как упоминалось ранее, они могут быть либо сигнальными последовательностями, либо сигнальными патчами. Во многих ядерных белках они состоят из одной или двух коротких последовательностей, богатых положительно заряженными аминокислотами лизином и аргинином (см. табл. 12.3, стр. 667), причем точная последовательность различается для разных ядерных белков. Другие ядерные белки содержат разные сигналы, некоторые из которых еще не охарактеризованы.

Рисунок 12-12

Функция сигнала ядерной локализации. Иммунофлюоресцентные микрофотографии, показывающие клеточное расположение Т-антигена вируса SV40, содержащего или не содержащего короткий пептид, который служит сигналом ядерной локализации. (A) Нормальный белок Т-антигена содержит (подробнее…)

Сигналы, охарактеризованные до сих пор, могут быть расположены почти в любом месте аминокислотной последовательности и, как считается, образуют петли или пятна на поверхности белка. Многие функционируют даже будучи связанными в виде коротких пептидов с боковыми цепями лизина на поверхности цитозольного белка, что позволяет предположить, что точное расположение сигнала в аминокислотной последовательности ядерного белка не имеет значения.

Транспорт ядерных белков через комплексы ядерных пор можно непосредственно визуализировать, покрывая частицы золота сигналом ядерной локализации, вводя частицы в цитозоль и затем следя за их судьбой с помощью электронной микроскопии (). Исследования с различными размерами золотых шариков показывают, что отверстие может расширяться примерно до 26 нм в диаметре в процессе транспортировки. Структура в центре комплекса ядерных пор, по-видимому, функционирует как плотно прилегающая диафрагма, которая открывается ровно настолько, чтобы пропускать транспортные субстраты (см. ). Молекулярная основа механизма ворот остается загадкой.

Рисунок 12-13

Визуализация активного импорта через ядерные поры. Эта серия электронных микрофотографий показывает коллоидные золотые сферы (стрелки) , покрытые пептидами, содержащими сигналы ядерной локализации, поступающие в ядро посредством комплексов ядерных пор. Частицы золота (подробнее…)

Механизм транспорта макромолекул через комплексы ядерных пор принципиально отличается от механизмов транспорта белков через мембраны других органелл, так как он происходит через большую водную пору, а не через белок транспортер, охватывающий один или несколько липидных бислоев. По этой причине ядерные белки могут транспортироваться через комплекс пор, пока они находятся в полностью свернутой конформации. Точно так же новообразованная субъединица рибосомы транспортируется из ядра в виде собранной частицы. Напротив, белки должны быть экстенсивно развернуты во время их транспорта в большинство других органелл, как мы обсудим позже. Однако в электронном микроскопе очень большие частицы, пересекающие поры, кажутся суженными, когда они протискиваются через комплекс ядерной поры, что указывает на то, что по крайней мере некоторые из них должны претерпевать реструктуризацию во время транспорта. Это было наиболее тщательно изучено для экспорта некоторых очень больших мРНК, как обсуждалось в главе 6 (см.).

Рецепторы импорта ядер связывают сигналы ядерной локализации и нуклеопорины

Чтобы инициировать импорт ядер, большинство сигналов ядерной локализации должны распознаваться рецепторами импорта ядер , которые кодируются семейством родственных генов. Каждый член семейства кодирует рецепторный белок, который специализируется на транспорте группы ядерных белков, имеющих сходные по структуре сигналы ядерной локализации (4).

Рисунок 12-14

Реципиенты импорта ядерных материалов. (A) Многие ядерные рецепторы импорта связываются как с нуклеопоринами, так и с сигналом ядерной локализации грузовых белков, которые они транспортируют. Грузовые белки 1, 2 и 3 в этом примере содержат разные сигналы ядерной локализации, (подробнее…)

Рецепторы импорта представляют собой растворимые цитозольные белки, которые связываются как с сигналом ядерной локализации на транспортируемом белке, так и с нуклеопоринами, некоторые из которых образуют щупальцеподобные фибриллы, которые простираются в цитозоль от края комплексов ядерных пор. Фибриллы и многие другие нуклеопорины содержат большое количество коротких аминокислотных повторов, содержащих фенилаланин и глицин, и поэтому называются FG-повторами (по однобуквенному коду аминокислот, обсуждаемому в главе 5). FG-повторы служат сайтами связывания для рецепторов импорта. Считается, что они выстилают путь через комплексы ядерных пор, принимаемый импортными рецепторами и связанными с ними грузовыми белками. Эти белковые комплексы перемещаются по пути, многократно связываясь, диссоциируя, а затем повторно связываясь с соседними повторяющимися последовательностями. Оказавшись в ядре, импортные рецепторы отделяются от своего груза и возвращаются в цитозоль.

Ядерные рецепторы импорта не всегда напрямую связываются с ядерными белками. Иногда используются дополнительные адапторные белки, которые соединяют рецепторы импорта и сигналы ядерной локализации на белках, подлежащих транспортировке. Удивительно, но адапторные белки структурно родственны ядерным рецепторам импорта, указывая на общее эволюционное происхождение. Комбинированное использование импортных рецепторов и адаптеров позволяет клетке распознавать широкий репертуар сигналов ядерной локализации, которые отображаются на ядерных белках.

Ядерный экспорт работает так же, как ядерный импорт, но в обратном порядке

Ядерный экспорт больших молекул, таких как новые рибосомные субъединицы и молекулы РНК, также происходит через комплексы ядерных пор и зависит от избирательной транспортной системы. Транспортная система опирается на сигналы ядерного экспорта макромолекул, которые должны быть экспортированы, а также на комплементарные рецепторы ядерного экспорта . Эти рецепторы связывают как экспортный сигнал, так и нуклеопорины, чтобы направлять их груз через комплекс пор в цитозоль.

Ядерные рецепторы экспорта структурно родственны ядерным рецепторам импорта, и они кодируются одним и тем же семейством генов ядерных транспортных рецепторов или кариоферинов. У дрожжей имеется 14 генов, кодирующих членов этого семейства; в клетках животных их число значительно больше. Только по их аминокислотной последовательности часто невозможно отличить, работает ли конкретный член семейства как ядерный импортный или ядерный экспортный рецептор. Поэтому неудивительно, что транспортные системы импорта и экспорта работают сходным образом, но в противоположных направлениях: рецепторы импорта связывают свои грузовые молекулы в цитозоле, высвобождают их в ядре, а затем экспортируют в цитозоль для повторного использования. , тогда как экспортные рецепторы функционируют наоборот.

Если золотые сферы, подобные тем, которые использовались в экспериментах, показанных в, покрыты малыми молекулами РНК (тРНК или рибосомной 5S РНК) и введены в ядро культивируемой клетки, они быстро транспортируются через комплексы ядерных пор в цитозоль. Используя два размера золотых частиц, одна из которых покрыта РНК и введена в ядро, а другая покрыта сигналами ядерной локализации и введена в цитозоль, можно показать, что единый комплекс пор проводит движение в обоих направлениях. Как комплекс пор координирует двунаправленный поток макромолекул, чтобы избежать скопления и лобовых столкновений, неизвестно.

ГТФаза Ran обеспечивает направленный транспорт через комплексы ядерных пор

Импорт ядерных белков через комплекс пор приводит к концентрации специфических белков в ядре, тем самым повышая порядок в клетке, которая должна потреблять энергию (обсуждается в главе 2). Считается, что энергия обеспечивается гидролизом GTP мономерной GTPase Ran. Ran находится как в цитозоле, так и в ядре, и он необходим как для систем ядерного импорта, так и для экспортных систем.

Как и другие GTPases, Ran представляет собой молекулярный переключатель, который может существовать в двух конформационных состояниях, в зависимости от того, связана ли GDP или GTP (обсуждается в главе 3). Преобразование между двумя состояниями запускается двумя специфическими для Ran регуляторными белками: цитозольным белком , активирующим GTPase (GAP) , который запускает гидролиз GTP и, таким образом, превращает Ran-GTP в Ran-GDP, и ядерным фактором обмена гуанина (GEF). ) , который способствует обмену GDP на GTP и, таким образом, преобразует Ran-GDP в Ran-GTP. Потому что Ran-GAP расположен в цитозоле, а Ran-GEF расположен в ядре, цитозоль в основном содержит Ran-GDP, а ядро в основном содержит Ran-GTP ().

Рисунок 12-15

Компартментализация Ran-GDP и Ran-GTP. Локализация Ran-GDP в цитозоле и Ran-GTP в ядре обусловлена локализацией двух регуляторных белков Ran: Ran GTPase-activating protein (Ran-GAP) расположен в цитозоле и Ran (подробнее…)

Этот градиент двух конформационных форм Ran управляет ядерным транспортом в соответствующем направлении (1). Стыковка ядерных рецепторов импорта с FG-повторами на цитозольной стороне комплекса ядерной поры, например, происходит только тогда, когда эти рецепторы загружены соответствующим грузом. Затем рецепторы импорта со своим связанным грузом перемещаются по дорожкам, выровненным последовательностями FG-повторов, пока не достигают ядерной стороны порового комплекса, где связывание Ran-GTP заставляет рецепторы импорта высвобождать свой груз (14). Способствуя зависимой от груза загрузке рецепторов импорта на треке FG-repeat в цитозоле и зависимому от Ran-GTP высвобождению груза в ядре, ядерная локализация Ran-GTP навязывает направленность.

Рисунок 12-16

Модель того, как гидролиз GTP с помощью Ran обеспечивает направленность ядерного транспорта. Движение через комплекс пор загруженных ядерных транспортных рецепторов может происходить за счет управляемой диффузии вдоль FG-повторов, отображаемых нуклеопоринами. Дифференциал (подробнее…)

Рисунок 12-17

Модель того, как связывание Ran-GTP может заставить ядерные рецепторы импорта высвобождать свой груз. (A) Ядерные транспортные рецепторы состоят из повторяющихся α-спиральных мотивов, которые укладываются либо в большие арки, либо в улиткообразные спирали, в зависимости (далее…)

Выгрузив свой груз в ядре, пустой рецептор импорта со связанным Ran-GTP транспортируется обратно через комплекс пор в цитозоль. Там два цитозольных белка, Ran Binding Protein и Ran-GAP, взаимодействуют, чтобы преобразовать Ran-GTP в Ran-GDP. Ran-связывающий белок сначала вытесняет Ran-GTP из рецептора импорта, что позволяет Ran-GAP запускать Ran для гидролиза связанного с ним GTP. Затем Ran-GDP отделяется от Ran-связывающего белка и повторно импортируется в ядро, тем самым завершая цикл.

Ядерный экспорт происходит по сходному механизму, за исключением того, что Ran-GTP в ядре способствует связыванию груза с экспортным рецептором и связыванию загруженного рецептора с ядерной стороной порового комплекса. Попав в цитозоль, Ran встречает Ran-GAP и Ran Binding Protein и гидролизует связанный с ним GTP. Экспортный рецептор затем высвобождает как свой груз, так и Ran-GDP в цитозоле и диссоциирует от порового комплекса, а свободные экспортные рецепторы возвращаются в ядро для завершения цикла (see).

Транспорт между ядром и цитозолем можно регулировать, контролируя доступ к транспортному механизму

Некоторые белки, например те, которые связывают новообразованные мРНК в ядре, содержат сигналы как ядерной локализации, так и ядерного экспорта. Эти белки постоянно перемещаются между ядром и цитозолем. Стационарная локализация таких челночных белков определяется относительной скоростью их импорта и экспорта. Если скорость импорта превышает скорость экспорта, белок будет располагаться преимущественно в ядре. Наоборот, если скорость экспорта превышает скорость импорта, белок будет находиться преимущественно в цитозоле. Таким образом, изменение скорости импорта, экспорта или того и другого может изменить местоположение белка.

Некоторые челночные белки непрерывно перемещаются в ядро и из него. Однако в других случаях перевозки строго контролируются. Как обсуждалось в главе 7, активность некоторых белков, регулирующих гены, контролируется путем удержания их вне ядерного компартмента до тех пор, пока они там не потребуются. Во многих случаях этот контроль зависит от регуляции ядерной локализации и экспортных сигналов; они могут быть включены или выключены, часто путем фосфорилирования соседних аминокислот (14).

Рисунок 12-18

Контроль развития эмбрионов мух с помощью ядерного транспорта. Регуляторный белок дорсального гена экспрессируется равномерно во всем этом раннем эмбрионе дрозофилы , что показано на поперечном сечении. Он активен только в клетках на вентральной стороне (внизу) из (подробнее. ..)

Рисунок 12-19

Контроль импорта ядер во время активации Т-клеток. Ядерный фактор активированных Т-клеток (NF-AT) представляет собой белок, регулирующий гены, который в покоящихся Т-клетках находится в цитозоле в фосфорилированном состоянии. Когда Т-клетки активируются, внутриклеточные (далее…)

Другие белки, регулирующие гены, связаны с ингибиторными цитозольными белками, которые либо закрепляют их в цитозоле (путем взаимодействия с цитоскелетом или со специфическими органеллами), либо маскируют сигналы их ядерной локализации, так что они не могут взаимодействовать с ядерными рецепторами импорта. Когда клетка получает соответствующий стимул, регуляторный белок гена высвобождается из своего цитозольного якоря или маски и транспортируется в ядро. Одним из важных примеров является латентный ген регуляторного белка, который контролирует экспрессию белков, участвующих в метаболизме холестерина. Белок производится и хранится в неактивной форме в виде трансмембранного белка в ER. Лишенная холестерина клетка активирует специфические протеазы, которые расщепляют белок, высвобождая его цитозольный домен. Затем этот домен импортируется в ядро, где активирует транскрипцию генов, необходимых для импорта и синтеза холестерина.

Аналогичным образом клетки контролируют экспорт РНК из ядра. РНК-мессенджеры связываются с белками, которые загружаются на РНК по мере продолжения транскрипции и сплайсинга. Эти белки содержат сигналы ядерного экспорта, которые распознаются экспортными рецепторами, направляющими РНК из ядра через комплексы ядерных пор. При попадании в цитозоль белки, покрывающие РНК, отрываются и быстро возвращаются в ядро. Другие РНК, такие как snRNAs и tRNAs, экспортируются различными наборами ядерных экспортных рецепторов.

Неполностью процессированные пре-мРНК активно удерживаются в ядре, прикрепляясь к механизму ядерной транскрипции и сплайсинга, который высвобождает молекулу РНК только после завершения процессинга. Генетические исследования дрожжей показывают, что мутантная пре-мРНК, которая не может должным образом взаимодействовать с механизмом сплайсинга, неправильно экспортируется в виде несплайсированной молекулы.

Ядерная оболочка разбирается во время митоза

Ядерная пластинка представляет собой сеть взаимосвязанных белковых субъединиц, называемых ядерными пластинками. Ламины представляют собой особый класс белков промежуточных филаментов (обсуждаемых в главе 16), которые полимеризуются в двумерную решетку (10). Ядерная пластинка придает форму и стабильность ядерной оболочке, к которой она прикрепляется путем прикрепления как к комплексам ядерных пор, так и к интегральным мембранным белкам внутренней ядерной мембраны. Пластинка взаимодействует также непосредственно с хроматином, который сам взаимодействует с интегральными мембранными белками внутренней ядерной мембраны. Вместе с ламиной эти мембранные белки обеспечивают структурные связи между ДНК и ядерной оболочкой.

Рисунок 12-20

Ядерная пластинка. Электронная микрофотография части ядерной пластинки ооцита Xenopus , полученного путем лиофилизации и металлического затенения. Пластинка образована регулярной решеткой специализированных промежуточных филаментов. (Любезно предоставлено Ueli Aebi.) (подробнее…)

Когда ядро распадается во время митоза, ядерная пластинка деполимеризуется. Разборка, по крайней мере частично, является следствием прямого фосфорилирования ядерных ламинов циклин-зависимой киназой, активируемой в начале митоза (обсуждается в главе 17). При этом белки внутренней ядерной мембраны фосфорилируются, а комплексы ядерных пор разбираются и диспергируются в цитозоле. Белки мембраны ядерной оболочки, больше не связанные с поровыми комплексами, ламиной или хроматином, диффундируют по всей мембране ER. Вместе эти события разрушают барьеры, которые в норме разделяют ядро и цитозоль, и эти ядерные белки, не связанные с мембранами или хромосомами, полностью смешиваются с цитозолем делящейся клетки.

Рисунок 12-21

Разрушение и восстановление ядерной оболочки во время митоза. Считается, что фосфорилирование ламинов запускает разборку ядерной пластинки, что, в свою очередь, вызывает разрушение ядерной оболочки. Дефосфорилирование ламинов (подробнее…)

Позже в митозе (в поздней анафазе) ядерная оболочка восстанавливается на поверхности хромосом, поскольку белки внутренней ядерной мембраны и дефосфорилированные ламины вновь связываются с хроматином. Мембраны ER оборачиваются вокруг групп хромосом и продолжают сливаться до тех пор, пока не образуется герметичная ядерная оболочка. Во время этого процесса комплексы ядерных пор также пересобираются и начинают активно реимпортировать белки, которые содержат сигналы ядерной локализации. Поскольку ядерная оболочка изначально плотно прилегает к поверхности хромосом, новообразованное ядро исключает все белки, кроме тех, которые изначально связаны с митотической хромосомой, и тех, которые избирательно импортируются через комплексы ядерных пор. Таким образом, все другие крупные белки не попадают в только что собранное ядро.

Сигналы ядерной локализации не отщепляются после транспортировки в ядро. Вероятно, это связано с тем, что ядерные белки необходимо многократно импортировать, один раз после каждого клеточного деления. Напротив, как только белковая молекула была импортирована в любую из других мембранных органелл, она передается из поколения в поколение внутри этого компартмента и никогда не нуждается в повторной транспортировке; сигнальная последовательность на этих молекулах часто удаляется после транслокации белка.

Резюме

Ядерная оболочка состоит из внутренней и внешней ядерной мембраны. Наружная мембрана является продолжением мембраны ЭПР, а пространство между ней и внутренней мембраной является продолжением просвета ЭПР. Молекулы РНК, образующиеся в ядре, и собирающиеся там рибосомные субъединицы экспортируются в цитозоль, а все белки, функционирующие в ядре, синтезируются в цитозоле и затем импортируются. Обширный поток материалов между ядром и цитозолем происходит через комплексы ядерных пор, которые обеспечивают прямой проход через ядерную оболочку.

Белки, содержащие сигналы ядерной локализации, активно транспортируются внутрь через комплексы ядерных пор, в то время как молекулы РНК и новообразованные субъединицы рибосом содержат сигналы ядерного экспорта, направляющие их активный транспорт наружу через комплексы пор. Некоторые белки, включая ядерные рецепторы импорта и экспорта, постоянно перемещаются между цитозолем и ядром. GTPase Ran обеспечивает направленность ядерного транспорта. Транспорт ядерных белков и молекул РНК через поровые комплексы можно регулировать, лишая эти молекулы доступа к транспортному механизму. Поскольку сигналы ядерной локализации не удаляются, ядерные белки могут повторно импортироваться, что требуется каждый раз, когда ядро собирается повторно после митоза.

Взрывная волна

Ядерные взрывы производят как немедленные, так и отсроченные разрушительные последствия. Взрывная волна, тепловое излучение и мгновенное ионизирующее излучение вызывают значительные разрушения в течение нескольких секунд или минут после ядерного взрыва. Отсроченные последствия, такие как выпадение радиоактивных осадков и другие возможные воздействия на окружающую среду, наносят ущерб в течение продолжительного периода времени от нескольких часов до нескольких лет. Каждый из этих эффектов рассчитывается от точки детонации.

Эпицентр

Термин «эпицентр» относится к точке на поверхности земли непосредственно ниже (или выше) точки детонации. Для взрыва над (или под) водой соответствующую точку обычно называют «нулевой поверхностью». Термин «поверхностный ноль» или «поверхностный нуль» также обычно используется для наземных и подземных взрывов. В некоторых публикациях наземный (или поверхностный) ноль называют «гипоцентром» взрыва.

Эффекты взрыва

Большинство повреждений наносится взрывным взрывом. Ударная волна воздуха распространяется наружу, вызывая внезапные изменения давления воздуха, которые могут раздавить предметы, и сильный ветер, который может сбить предметы. Как правило, большие здания разрушаются изменением атмосферного давления, а люди и объекты, такие как деревья и столбы, разрушаются ветром.

Величина эффекта взрыва связана с высотой взрыва над уровнем земли. Для любого заданного расстояния от центра взрыва существует оптимальная высота взрыва, при которой происходит наибольшее изменение давления воздуха, называемое избыточным давлением, и чем больше расстояние, тем больше оптимальная высота взрыва. В результате взрыв на поверхности создает наибольшее избыточное давление на очень близких расстояниях, но меньшее избыточное давление, чем воздушный взрыв на несколько больших расстояниях.

Когда ядерное оружие взрывается на поверхности Земли или вблизи нее, взрыв вырывает большой кратер. Часть материала, который использовался в кратере, откладывается на краю кратера; остальное уносится в воздух и возвращается на Землю в виде радиоактивных осадков. Взрыв, который происходит дальше от поверхности Земли, чем радиус огненного шара, не создает кратера и не производит незначительных немедленных осадков. По большей части ядерный взрыв убивает людей косвенным путем, а не прямым давлением.

Эффекты теплового излучения

Приблизительно 35 процентов энергии ядерного взрыва приходится на интенсивный выброс теплового излучения, т. е. тепла. Эффекты аналогичны эффекту двухсекундной вспышки огромного солнечного фонаря. Поскольку тепловое излучение распространяется примерно со скоростью света, вспышка света и тепла предшествует взрывной волне на несколько секунд, точно так же, как молния видна раньше, чем слышен гром.

Видимый свет вызывает слепоту у людей, смотрящих в направлении взрыва. Внезапная слепота может длиться несколько минут, после чего наступает полное выздоровление. Если вспышка сфокусирована через хрусталик глаза, это приведет к необратимому ожогу сетчатки. В Хиросиме и Нагасаки было много случаев ослепления, но только один случай ожога сетчатки среди выживших. С другой стороны, любой человек, ослепший во время вождения автомобиля, может легко нанести необратимую травму себе и другим.

Ожоги кожи возникают в результате более интенсивного света и поэтому возникают ближе к точке взрыва. Ожоги первой, второй и третьей степени могут возникнуть на расстоянии пяти миль от места взрыва и более. Ожоги третьей степени более 24 процентов тела или ожоги второй степени более 30 процентов тела приведут к серьезному шоку и, вероятно, приведут к летальному исходу, если не будет оказана своевременная специализированная медицинская помощь. Во всех Соединенных Штатах есть помещения для лечения 1000 или 2000 случаев тяжелых ожогов. Одно ядерное оружие может произвести более 10 000 ядер.

Тепловое излучение ядерного взрыва может непосредственно воспламенить материалы для растопки. Как правило, горючие материалы за пределами дома, такие как листья или газеты, не окружены достаточным количеством горючих материалов, чтобы вызвать самоподдерживающийся огонь. Пожары с большей вероятностью распространения вызваны тепловым излучением, проходящим через окна и воспламеняющим кровати и мягкую мебель внутри домов. Другой возможный источник пожаров, который может быть более разрушительным в городских районах, является косвенным. Повреждение взрывом складов, водонагревателей, печей, электрических цепей или газопроводов может привести к возгоранию там, где много топлива.

Прямое воздействие ядерного излучения

Прямое излучение возникает во время взрыва. Он может быть очень интенсивным, но его диапазон ограничен. Для крупного ядерного оружия дальность интенсивного прямого излучения меньше дальности летального действия взрывной волны и теплового излучения. Однако в случае оружия меньшего размера прямое излучение может быть смертельным с наибольшей дальностью действия. Прямая радиация нанесла существенный ущерб жителям Хиросимы и Нагасаки. Реакция человека на ионизирующее излучение является предметом большой научной неопределенности и острых споров. Кажется вероятным, что даже малые дозы радиации наносят некоторый вред.

Fallout

Выпадение радиации происходит от частиц, которые становятся радиоактивными в результате взрыва и впоследствии распространяются на различные расстояния от места взрыва. В то время как любой ядерный взрыв в атмосфере производит некоторые осадки, осадки намного больше, если взрыв происходит на поверхности, или, по крайней мере, достаточно низко, чтобы огненный шар коснулся земли. Значительную опасность представляют частицы, поднятые с земли и облученные ядерным взрывом. Радиоактивные частицы, поднявшиеся на небольшое расстояние (те, что находятся в «стволе» знакомого грибовидного облака), в течение нескольких минут упадут обратно на землю, приземлившись близко к центру взрыва. Такие частицы вряд ли станут причиной многих смертей, потому что они упадут в районы, где уже погибло большинство людей. Однако радиоактивность усложнит усилия по спасению или возможной реконструкции. Радиоактивные частицы, которые поднимутся выше, будут унесены ветром на некоторое расстояние, прежде чем вернуться на Землю, и, следовательно, площадь и интенсивность выпадения осадков сильно зависят от местных погодных условий. Большая часть материала просто уносится по ветру длинным шлейфом. Дождь также может оказать существенное влияние на способы осаждения радиации от меньшего оружия, поскольку дождь уносит загрязненные частицы на землю. Области, получающие такие загрязненные осадки, станут «горячими точками» с большей интенсивностью радиации, чем их окрестности.

Страница 2 из 24

Радиационные чрезвычайные ситуации | Ready.gov

Подготовьтесь сейчас

Оставайтесь в безопасности во время

Будьте в безопасности после

Сопутствующий контент

Существуют различные типы радиационных чрезвычайных ситуаций, которые различаются по степени ущерба, который они причиняют, и вреда, который они наносят населению. Некоторые примеры радиационных чрезвычайных ситуаций включают: ядерный взрыв (взрыв), аварию на атомной электростанции, транспортную аварию, связанную с перевозкой радиоактивных материалов, или профессиональное облучение, например, в медицинских или исследовательских учреждениях. Хотя степень повреждения будет разной, меры по защите от радиации одни и те же. Вы можете обезопасить свою семью, если будете знать, что делать, и будете готовы в случае возникновения инцидента. Выполните следующие простые шаги:

Лучший способ обезопасить себя в любой радиационной ситуации — проникнуть внутрь, оставаться внутри и следить за обновлениями . Размещение материала между вами и радиацией обеспечивает защиту, пока вы настраиваетесь на инструкции спасателей.

Изображение

КАК ОСТАВАТЬСЯ В БЕЗОПАСНОСТИ В СЛУЧАЕ РАДИАЦИОННОЙ АВАРИЙНОЙ СИТУАЦИИ

Подготовьтесь НЕМЕДЛЕННО

Как и в любой чрезвычайной ситуации, вам нужна достоверная информация, достаточное количество материалов и план защиты себя и своей семьи во время радиационных и ядерных чрезвычайных ситуаций.

Есть несколько способов получать экстренные оповещения. Загрузите приложение FEMA App и получайте оповещения в режиме реального времени от Национальной метеорологической службы для пяти точек по всей стране. Подпишитесь на оповещения сообщества в вашем районе от местного агентства по управлению чрезвычайными ситуациями, чтобы получать своевременную и конкретную информацию для вашего региона. Имейте радиостанцию с батарейным питанием или ручную заводную радиостанцию , которая будет продолжать работать в случае отказа других форм связи.
Соберите комплект аварийного снабжения . Включите запасную сменную одежду для каждого члена семьи, мешок для мусора для зараженной одежды, а также запечатанные продукты, воду и лекарства.
Составьте Семейный план связи в чрезвычайных ситуациях . Решите, где ваша семья будет встречаться, если вы не можете встретиться дома. Определите контактное лицо за пределами штата, которому вы можете сообщить о своем местонахождении и безопасности. Составьте план с друзьями или семьей, чтобы определить безопасные места для проживания, если вам нужно эвакуироваться. Ознакомьтесь со школьными, рабочими планами и планами учреждений по уходу в отношении пребывания внутри/укрытия на месте и эвакуации.

Оставайтесь в безопасности ВО ВРЕМЯ

Во время любой радиационной аварийной ситуации соблюдайте принципы радиационной защиты: время, расстояние и экранирование. Ограничьте время воздействия радиации, держитесь как можно дальше от радиоактивного источника и защитите себя от радиации, зайдя вглубь прочного здания.

Если экстренная ситуация снаружи, Проберитесь внутрь. Оставаться внутри. Оставайтесь с нами .

ВНУТРИ: Если вас предупредили о возможности радиационной опасности, немедленно войдите внутрь 902:35 ближайшее здание и отойдите от окон. Поставьте как можно больше стен между вами и внешним миром, чтобы защитить вас от радиации снаружи.

Изображение

ЯДЕРНЫЕ ВЗРЫВЫ: Ядерные взрывы являются наиболее опасными радиационными аварийными ситуациями. Он создает большой, смертельный взрыв. Если он взорвется на земле, взрыв может засосать материал в воздух и создать опасные, похожие на песок радиоактивные частицы, называемые радиоактивными осадками.

За ядерный взрыв, если есть предупреждение, укрыться от взрыва за всем, что может обеспечить защиту. Если вы находитесь на улице, лягте лицом вниз, чтобы защитить открытые участки кожи от жары и летящих обломков. После прохождения ударной волны как можно быстрее войдите в ближайшее здание.

ВНУТРИ: После взрыва у вас будет 10 или более минут, чтобы найти подходящее укрытие, прежде чем прибудут радиоактивные осадки. Если в течение нескольких минут после взрыва можно безопасно добраться до многоэтажного дома или подвала, немедленно отправляйтесь туда. Самые безопасные здания имеют кирпичные или бетонные стены. Подземные гаражи и метро также могут обеспечить хорошее укрытие.

Оставайтесь в наиболее защищенном месте (подвал или центр большого здания) в течение первых 24 часов, если только не угрожает непосредственная опасность (например, пожар, утечка газа, обрушение здания или серьезная травма) или информация от властей что покидать безопасно. Уровни радиации быстро снижаются, становясь значительно менее опасными, в течение первых 24 часов.

ОСТАВАЙТЕСЬ ВНУТРИ: Укрывайтесь, если не указано иное. Если возможно, выключите вентиляторы, кондиционеры и обогреватели с принудительной вентиляцией, подающие воздух снаружи. Закройте окна и двери. Закройте заслонки камина. Если вам приказано оставаться внутри во время радиационной аварийной ситуации, домашние и служебные животные также должны находиться внутри. Укрытие обычно длится не менее 24 часов.

ОСТАВАЙТЕСЬ В СИТУАЦИИ: следуйте инструкциям сотрудников службы экстренной помощи. Если вам советуют эвакуироваться, выслушайте информацию о маршрутах, убежищах и процедурах. Если вы эвакуировались, не возвращайтесь, пока местные власти не сообщат вам, что это безопасно.

Будьте в безопасности ПОСЛЕ

Если вы находились на улице во время радиоактивного выброса или считаете, что на вашем теле есть радиоактивный материал, удалите его с помощью простых шагов.

Изображение

Снимите внешний слой загрязненной одежды, чтобы удалить радиоактивный материал с тела. Снятие внешнего слоя одежды может удалить до 90% радиоактивного материала. Будьте очень осторожны при снятии одежды, чтобы предотвратить рассыпание радиоактивной пыли. По возможности не прикасайтесь руками к глазам, носу и рту.
Приведите себя в порядок. Если возможно, примите душ или вымойтесь с мылом и водой, чтобы удалить любые радиоактивные частицы с кожи или волос, которые не были покрыты. Если вы не можете умыться, используйте салфетку или чистую влажную ткань, чтобы вытереть кожу или волосы, которые не были покрыты. Не используйте для очистки кожи бытовые чистящие салфетки. Дезинфицирующее средство для рук не защищает от радиоактивного материала. Следуйте рекомендациям CDC по обеззараживанию себя и других.
Очистите всех домашних животных, которые были снаружи после поступления радиоактивной пыли. Аккуратно почистите шерсть вашего питомца, чтобы удалить все радиоактивные частицы, и вымойте питомца водой с мылом, если это возможно.
Оберегайте от обезвоживания и кормления: Безопасно есть и пить пищу, которая находилась внутри здания. Безопасно есть пищу в запечатанных контейнерах, которые находились снаружи, если вы вытираете контейнер влажным полотенцем или тканью перед использованием. Запечатайте эти полотенца или чистящие салфетки в полиэтиленовый пакет и поместите их подальше от людей и домашних животных. Незапечатанные продукты извне могут быть заражены радиоактивным материалом. Не употребляйте в пищу продукты из вашего сада, а также продукты или жидкости, которые находились на открытом воздухе и не были закрыты, пока власти не сообщат вам, что это безопасно.
Позаботьтесь о себе и других: Если вы больны или получили травму, выслушайте инструкции о том, как и где получить медицинскую помощь. Если вы находитесь в государственном приюте, немедленно сообщите об этом персоналу этого учреждения, чтобы они могли позвонить в местную больницу или клинику. Если вам требуется неотложная медицинская помощь, позвоните по номеру 9-1-1.
Угроза радиационной или ядерной аварии может вызывать стресс, а выживание в такой ситуации может быть травмирующим опытом. Позаботьтесь о себе и поговорите с кем-нибудь, если вы расстроены. Следуйте рекомендациям CDC по управлению стрессом во время травматического события.

Сопутствующий контент

Информационный лист о ядерном взрыве (PDF)
Безопасность при ядерной детонации: продукты питания, питьевая вода и медицина (PDF)
PrepTalks: Брук Баддемайер «Спасение жизней после ядерного взрыва». | FEMA.gov
Центры по контролю за заболеваниями (CDC): Радиационные чрезвычайные ситуации
Агентство по охране окружающей среды США (EPA): Защита себя от радиации

КОНВЕНЦИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ОБЪЕДИНЕННЫХ НАЦИЙ ПО МОРСКОМУ ПРАВУ

КОНВЕНЦИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ОБЪЕДИНЕННЫХ НАЦИЙ ПО МОРСКОМУ ПРАВУ

ЧАСТЬ II

ТЕРРИТОРИАЛЬНОЕ МОРЕ И ПРИЛЕГАЮЩАЯ ЗОНА

РАЗДЕЛ 1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Статья 2

Правовой статус территориального моря, воздушного пространства

над территориальным морем и его дном и недрами

1. Суверенитет прибрежного государства распространяется за пределы его сухопутной территории и внутренних вод, а в случае государства-архипелага — его архипелажных вод на прилегающий морской пояс, именуемый территориальным морем.

2. Этот суверенитет распространяется на воздушное пространство над территориальным морем, а также на его дно и недра.

3. Суверенитет над территориальным морем осуществляется в соответствии с настоящей Конвенцией и другими нормами международного права.

РАЗДЕЛ 2. ГРАНИЦЫ ТЕРРИТОРИАЛЬНОГО МОРЯ
Статья 3
Ширина территориального моря
Каждое государство имеет право устанавливать ширину своего территориального моря до предела, не превышающего 12 морских миль, отмеряемых от исходных линий, определяемых в соответствии с настоящей Конвенцией.
Статья4
Внешняя граница территориального моря
Внешней границей территориального моря является линия, каждая точка которой находится на расстоянии от ближайшей точки исходной линии, равном ширине территориального моря.
Статья5
Нормальный базовый уровень
Если иное не предусмотрено настоящей Конвенцией, обычной исходной линией для измерения ширины территориального моря является линия отлива вдоль берега, отмеченная на крупномасштабных картах, официально признанных прибрежным государством.
Статья 6
Рифы
В случае островов, расположенных на атоллах, или островов, окаймляющих рифы, исходной линией для измерения ширины территориального моря является обращенная к морю линия отлива рифа, обозначенная соответствующим символом на картах, официально признанных прибрежными Состояние.
Статья 7
Прямые базовые линии
1. В местах, где береговая линия глубоко изрезана и врезана, или если вдоль берега в непосредственной близости от него имеется полоса островов, для проведения исходной линии, от которой определяется ширина, может применяться метод прямых исходных линий, соединяющих соответствующие точки. территориального моря.
2. В тех случаях, когда из-за наличия дельты и других природных условий береговая линия крайне неустойчива, соответствующие точки могут быть выбраны вдоль самой дальней в сторону моря части линии наибольшего отлива и, несмотря на последующую регрессию линии наибольшего отлива, прямые исходные линии остаются в силе до тех пор, пока прибрежное государство не изменит их в соответствии с настоящей Конвенцией.
3. Проведение прямых исходных линий не должно сколько-нибудь заметно отклоняться от общего направления побережья, а морские районы, лежащие в пределах этих линий, должны быть достаточно тесно связаны с сушей, чтобы на них распространялся режим внутренних вод.
4. Прямые исходные линии не должны быть проведены к и от отливных возвышенностей, если только на них не были построены маяки или подобные сооружения, которые постоянно находятся над уровнем моря, или за исключением случаев, когда проведение исходных линий до и от таких возвышений получило общее международное признание.
5. В тех случаях, когда метод прямых исходных условий применим в соответствии с пунктом 1, при определении конкретных исходных условий могут учитываться экономические интересы, характерные для соответствующего региона, реальность и важность которых ясно подтверждается длительным использованием.
6. Система прямых исходных линий не может применяться государством таким образом, чтобы отрезать территориальное море другого государства от открытого моря или исключительной экономической зоны.
Статья8
Внутренние воды
1. За исключением случаев, предусмотренных в Части IV, воды, находящиеся со стороны берега от исходной линии территориального моря, составляют часть внутренних вод Государства.
2. В тех случаях, когда установление прямой исходной линии в соответствии с методом, изложенным в статье 7, приводит к включению в качестве внутренних вод районов, которые ранее не считались таковыми, существует право мирного прохода, предусмотренное настоящей Конвенцией. в тех водах.
Статья 9
Устья рек
Если река впадает непосредственно в море, исходной линией должна быть прямая линия, проходящая через устье реки между точками линии межени ее берегов.
Артикул 10
Отсеки
1. Настоящая статья касается только заливов, берега которых принадлежат одному государству.
2. Для целей настоящей Конвенции залив представляет собой хорошо заметную впадину, проникновение которой настолько пропорционально ширине ее устья, что вмещает воды, не имеющие выхода к морю, и представляет собой нечто большее, чем просто изгиб берега. Однако углубление не должно рассматриваться как залив, если его площадь не равна или больше площади полукруга, диаметр которого представляет собой линию, проведенную через устье этого углубления.
3. Для целей измерения площадью углубления считается площадь, расположенная между отметкой отлива вокруг берега углубления и линией, соединяющей отметку отлива у ее естественных входов. Если из-за наличия островов углубление имеет более одного устья, полукруг должен быть нарисован на линии, длина которой равна сумме длин линий, пересекающих разные устья. Острова внутри углубления должны быть включены, как если бы они были частью акватории углубления.
4. Если расстояние между отметками отлива естественных точек входа в бухту не превышает 24 морских миль, между этими двумя отметками отлива может быть проведена линия смыкания, и заключенные в них воды считаются внутренние воды.
5. Если расстояние между отметками отлива естественных точек входа в залив превышает 24 морские мили, в заливе проводится прямая исходная линия в 24 морских мили таким образом, чтобы охватить максимальную площадь воды. это возможно с линией такой длины.
6. Вышеизложенные положения не применяются к так называемым «историческим» заливам или в любом случае, когда применяется система прямых исходных линий, предусмотренная в статье 7.
Статья 11
Порты
В целях определения границ территориального моря наиболее удаленные постоянные портовые сооружения, которые составляют неотъемлемую часть системы портов, считаются частью побережья. Морские сооружения и искусственные острова не считаются постоянными портовыми сооружениями.
Статья 12
Рейды
Рейды, которые обычно используются для погрузки, разгрузки и постановки судов на якорь и которые в противном случае находились бы полностью или частично за пределами внешней границы территориального моря, включаются в территориальное море.
Статья 13
Отливные возвышенности
1. Возвышение во время отлива – это естественно образованный участок суши, который окружен водой и находится над водой во время отлива, но затопляется во время прилива. Если возвышение отлива расположено полностью или частично на расстоянии, не превышающем ширины территориального моря от материка или острова, линия отлива на этом возвышении может использоваться в качестве исходной линии для измерения ширины территориального моря. море.
2. Если отливная возвышенность полностью расположена на расстоянии, превышающем ширину территориального моря от материка или острова, она не имеет собственного территориального моря.
Статья 14
Комбинация методов определения базовых уровней
Прибрежное государство может в свою очередь определять исходные линии любым из методов, предусмотренных в предыдущих статьях, с учетом различных условий.
Артикул 15
Делимитация территориального моря между государствами
с противоположными или смежными берегами
Если побережья двух государств расположены напротив друг друга или примыкают друг к другу, ни одно из двух государств не имеет права, при отсутствии соглашения между ними об ином, расширять свое территориальное море за срединную линию, каждая точка которой равноудалена от ближайших точек. на исходных линиях, от которых отмеряется ширина территориальных вод каждого из двух государств. Вышеупомянутое положение, однако, не применяется, когда в силу исторического права или других особых обстоятельств необходимо разграничить территориальные воды двух государств таким образом, который им не соответствует.
Статья 16
Карты и списки географических координат
1. Исходные линии для измерения ширины территориального моря, определенные в соответствии со статьями 7, 9 и 10, или вытекающие из них границы, а также линии делимитации, проведенные в соответствии со статьями 12 и 15, должны быть показаны на картах морских судов. весы или весы, достаточные для определения их положения. В качестве альтернативы можно заменить список географических координат точек с указанием геодезических данных.
2. Прибрежное государство должным образом опубликовывает такие карты или перечни географических координат и сдает на хранение копию каждой такой карты или перечня Генеральному секретарю Организации Объединенных Наций.

РАЗДЕЛ 3. МИРНЫЙ ПРОХОД В ТЕРРИТОРИАЛЬНОМ МОРЕ

ПОДРАЗДЕЛ А. ПРАВИЛА, ПРИМЕНЯЕМЫЕ КО ВСЕМУ СУДНУ
Статья 17
Право мирного прохода
При условии соблюдения настоящей Конвенции суда всех государств, как прибрежных, так и не имеющих выхода к морю, пользуются правом мирного прохода через территориальное море.
Статья 18
Значение перехода
1. Под проходом понимается плавание через территориальное море с целью:
а) пересечения этого моря без захода во внутренние воды или стоянки на рейде или в портовом сооружении вне внутренних вод; или
(b) при следовании во внутренние воды или из них или заходе на такой рейд или портовое сооружение.
2. Проход должен быть непрерывным и быстрым. Тем не менее, проход включает остановку и постановку на якорь, но только в той мере, в какой они связаны с обычным плаванием или необходимы в связи с форс-мажорными обстоятельствами или бедствием, или с целью оказания помощи людям, судам или самолетам, находящимся в опасности или терпящим бедствие.
Статья 19
Значение мирного прохода
1. Проход является мирным, пока он не наносит ущерба миру, хорошему порядку или безопасности прибрежного государства. Такой проход осуществляется в соответствии с настоящей Конвенцией и другими нормами международного права.
2. Проход иностранного судна считается наносящим ущерб миру, порядку или безопасности прибрежного государства, если в территориальном море оно осуществляет любую из следующих действий:
(a) любую угрозу силой или ее применение против суверенитета, территориальной целостности или политической независимости прибрежного государства или любым другим образом в нарушение принципов международного права, воплощенных в Уставе Организации Объединенных Наций;
(b) любые упражнения или тренировки с оружием любого вида;
(c) любое действие, направленное на сбор информации в ущерб обороне или безопасности прибрежного государства;
(d) любой акт пропаганды, направленный на защиту или безопасность прибрежного государства;
(e) запуск, посадка или посадка на борт любого воздушного судна;
(f) запуск, посадка или взятие на борт любого военного устройства;
(g) погрузка или разгрузка любого товара, валюты или лица вопреки таможенным, фискальным, иммиграционным или санитарным законам и правилам прибрежного государства;
(h) любой акт преднамеренного и серьезного загрязнения, противоречащий настоящей Конвенции;
(i) любая рыболовная деятельность;
(j) проведение исследований или изыскательских работ;
(k) любое действие, направленное на создание помех любым системам связи или любым другим средствам или сооружениям прибрежного государства;
(l) любая другая деятельность, не имеющая прямого отношения к проходу.
Артикул 20
Подводные лодки и другие подводные аппараты
В территориальном море подводные лодки и другие подводные аппараты обязаны плавать в надводном положении и нести свой флаг.
Статья 21
Законы и правила прибрежного государства, касающиеся мирного прохода
1. Прибрежное государство может принимать законы и правила в соответствии с положениями настоящей Конвенции и другими нормами международного права, касающиеся мирного прохода через территориальное море, в отношении всех или любого из следующего:
(a ) безопасность мореплавания и регулирование морского движения;
(b) защита навигационных средств и сооружений и других средств или установок;
(c) защита кабелей и трубопроводов;
(d) сохранение живых ресурсов моря;
(е) предотвращение нарушения законов и правил рыболовства прибрежного государства;
(f) сохранение окружающей среды прибрежного государства и предотвращение, сокращение и контроль ее загрязнения;
(ж) морские научные исследования и гидрографические съемки;
(h) предотвращение нарушений таможенных, фискальных, иммиграционных или санитарных законов и правил прибрежного государства.
2. Такие законы и правила не применяются к проектированию, строительству, комплектованию или оборудованию иностранных судов, если они не приводят в действие общепринятые международные правила или стандарты.
3. Прибрежное государство должным образом опубликовывает все такие законы и правила.
4. Иностранные суда, осуществляющие право мирного прохода через территориальное море, должны соблюдать все такие законы и правила и все общепринятые международные правила, касающиеся предотвращения столкновений на море.
Статья 22
Морские пути и схемы разделения движения в территориальном море
1. Прибрежное государство может, когда это необходимо с учетом безопасности мореплавания, потребовать от иностранных судов, осуществляющих право мирного прохода через его территориальное море, использовать такие морские пути и схемы разделения движения, которые оно может определить или предписать для регулирования судоходства. проход кораблей.
2. В частности, танкеры, суда с атомными двигателями и суда, перевозящие ядерные или другие опасные по своей природе или ядовитые вещества или материалы, могут быть обязаны ограничивать свой проход такими морскими путями.
3. При обозначении морских коридоров и предписании схем разделения движения в соответствии с настоящей статьей прибрежное государство принимает во внимание:
а) рекомендации компетентной международной организации;
(b) любые каналы, обычно используемые для международного судоходства;
(c) особые характеристики конкретных судов и каналов; и
(d) плотность движения.
4. Прибрежное государство должно четко указывать такие морские пути и схемы разделения движения на картах, которые должным образом публикуются.
Статья 23
Иностранные атомоходы и суда с ядерными установками
или другие опасные или ядовитые вещества
Иностранные атомоходы и суда, перевозящие ядерные или иные по своей природе опасные или вредные вещества, при осуществлении права мирного прохода через территориальное море должны иметь документы и соблюдать специальные меры предосторожности, установленные для таких судов международными договорами.
Артикул24
Обязанности прибрежного государства
1. Прибрежное государство не должно препятствовать мирному проходу иностранных судов через территориальное море, кроме как в соответствии с настоящей Конвенцией. В частности, при применении настоящей Конвенции или любых законов или правил, принятых в соответствии с настоящей Конвенцией, прибрежное государство не должно:
невинный проход; или
(b) дискриминировать по форме или фактически суда любого государства или суда, перевозящие грузы в, из или от имени любого государства.
2. Прибрежное государство должно надлежащим образом оповещать о любой известной ему опасности для судоходства в пределах его территориального моря.
Артикул 25
Права на защиту прибрежного государства
1. Прибрежное государство может принять необходимые меры в своем территориальном море для предотвращения немирного прохода.
2. В случае следования судов во внутренние воды или захода в портовое средство за пределами внутренних вод прибрежное государство также имеет право принимать необходимые меры для предотвращения любого нарушения условий, при которых допускается допуск этих судов во внутренние воды. воды или такой вызов подлежит.
3. Прибрежное государство может без какой-либо дискриминации по форме или по факту среди иностранных судов временно приостановить в определенных районах своего территориального моря мирный проход иностранных судов, если такая приостановка необходима для защиты его безопасности, включая учения с оружием. Такая приостановка вступает в силу только после ее надлежащего опубликования.
Артикул 26
Сборы, которые могут взиматься с иностранных судов
1. Никакие сборы не могут взиматься с иностранных судов только по причине их прохода через территориальное море.
2. Сборы могут взиматься с иностранного судна, проходящего через территориальное море, в виде платы только за конкретные услуги, оказанные судну. Эти сборы взимаются без дискриминации.

ПОДРАЗДЕЛ B. ПРАВИЛА, ПРИМЕНЯЕМЫЕ К
ТОРГОВЫЕ И ПРАВИТЕЛЬСТВЕННЫЕ СУДА
ЭКСПЛУАТИРУЕМЫЙ ДЛЯ КОММЕРЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙ
Артикул 27
Уголовная юрисдикция на борту иностранного судна
1. Уголовная юрисдикция прибрежного государства не должна осуществляться на борту иностранного судна, проходящего через территориальное море, для ареста любого лица или проведения какого-либо расследования в связи с любым преступлением, совершенным на борту судна во время его прохода, за исключением случаев, когда следующие случаи:
(a) если последствия преступления распространяются на прибрежное государство;
(b) если преступление направлено на нарушение спокойствия страны или порядка в территориальном море;
(c) если помощь местных властей запрошена капитаном судна или дипломатическим агентом или консульским должностным лицом государства флага; или
(d), если такие меры необходимы для пресечения незаконного оборота наркотических средств или психотропных веществ.
2. Вышеизложенные положения не затрагивают права прибрежного государства предпринимать какие-либо меры, предусмотренные его законодательством, в целях ареста или расследования на борту иностранного судна, проходящего через территориальное море после выхода из внутренних вод.
3. В случаях, предусмотренных в пунктах 1 и 2, прибрежное государство, если об этом просит капитан, уведомляет дипломатического агента или консульское должностное лицо государства флага, прежде чем предпринимать какие-либо шаги, и содействует установлению контакта между таким агентом или должностным лицом и экипаж корабля. В экстренных случаях это уведомление может быть передано во время принятия мер.
4. При рассмотрении вопроса о том, следует ли произвести арест и каким образом, местные власти должны должным образом учитывать интересы судоходства.
5. За исключением случаев, предусмотренных в Части XII, или в отношении нарушений законов и правил, принятых в соответствии с Частью V, прибрежное государство не может предпринимать какие-либо шаги на борту иностранного судна, проходящего через территориальное море, для ареста любого лица или совершения любое расследование в связи с каким-либо преступлением, совершенным до входа судна в территориальное море, если судно, следующее из иностранного порта, только проходит через территориальное море, не заходя во внутренние воды.
Статья 28
Гражданская юрисдикция в отношении иностранных судов
1. Прибрежное государство не должно останавливать или отклонять иностранное судно, проходящее через территориальное море, с целью осуществления гражданской юрисдикции в отношении лица, находящегося на борту судна.
2. Прибрежное государство не может налагать взыскание на судно или арестовывать его в целях любого гражданского судопроизводства, кроме как в отношении обязательств или обязательств, принятых или принятых на себя самим судном в ходе или с целью его плавания через воды прибрежного государства.
3. Параграф 2 не затрагивает права прибрежного государства в соответствии со своим законодательством налагать взыскание или арестовывать в целях любого гражданского судопроизводства иностранное судно, находящееся в территориальном море или проходящее через территориальное море после выхода из внутренних вод.

ПОДРАЗДЕЛ C. ПРАВИЛА, ПРИМЕНЯЕМЫЕ К
ВОЕННЫЕ КОРАБЛИ И ДРУГИЕ ПРАВИТЕЛЬСТВЕННЫЕ КОРАБЛИ
ДЛЯ НЕКОММЕРЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙ
Артикул 29
Определение военных кораблей
Для целей настоящей Конвенции «военный корабль» означает судно, принадлежащее вооруженным силам государства, имеющее внешние знаки, отличающие такие суда его национальной принадлежности, под командованием офицера, должным образом уполномоченного правительством государства и чье имя фигурирует в соответствующем служебном списке или его эквиваленте и укомплектован экипажем, находящимся в регулярных вооруженных силах.
Артикул30
Несоблюдение военными кораблями законов и правил
прибрежного государства
. Если какое-либо военное судно не соблюдает законы и правила прибрежного государства, касающиеся прохода через территориальное море, и игнорирует любой обращенный к нему запрос об их соблюдении, прибрежное государство может потребовать от него немедленно покинуть территориальное море.
Артикул 31
Ответственность государства флага за ущерб, причиненный военным кораблем
или другое государственное судно, эксплуатируемое в некоммерческих целях
Государство флага несет международную ответственность за любые потери или ущерб прибрежному государству в результате несоблюдения военным кораблем или другим правительственным судном, эксплуатируемым в некоммерческих целях, законов и правил прибрежного государства, касающихся прохода через территориальную моря или с положениями настоящей Конвенции или других норм международного права.
Артикул 32
Иммунитет военных кораблей и других правительственных кораблей
эксплуатируется в некоммерческих целях
За такими исключениями, которые содержатся в подразделе А и в статьях 30 и 31, ничто в настоящей Конвенции не затрагивает иммунитетов военных кораблей и других государственных судов, эксплуатируемых в некоммерческих целях.

РАЗДЕЛ 4. ПРИГРАНИЧНАЯ ЗОНА
Артикул 33
Прилегающая зона
1. В зоне, примыкающей к его территориальному морю, определяемой как прилежащая зона, прибрежное государство может осуществлять контроль, необходимый для:
или территориальное море;
(b) наказывать за нарушение вышеуказанных законов и правил, совершенное на его территории или в территориальном море.
2. Прилежащая зона не может выходить за пределы 24 морских миль от исходных линий, от которых отмеряется ширина территориального моря.

Конвенция Организации Объединенных Наций по морскому праву – Часть II
Часть III
полноэкранная версия
Вернуться на главную страницу
Путь прерибосом через комплекс ядерных пор, выявленный с помощью электронной томографии
Введение
Комплекс ядерных пор (NPC) образует большой канал через ядерную оболочку и обеспечивает обмен макромолекулами между ядром и цитоплазмой. Он действует как селективный транслокационный барьер для ядерно-цитоплазматического транспорта большого разнообразия грузов, от белков и белковых комплексов до рибонуклеопротеиновых (РНП) частиц, включая матричные (м)РНП и пре-рибосомы ^1,2 . Рецепторы ядерного транспорта (импортины и экспортины), которые специфически связывают сигналы ядерного транспорта на грузах, преодолевают этот транслокационный барьер, взаимодействуя с нуклеопоринами (Nups), компонентами NPC. Структура NPC была определена со средним разрешением у нескольких видов с помощью интегративных подходов ³ . Центральный домен, называемый доменом внутреннего кольца, выстилает поры в ядерной оболочке. Это внутреннее кольцо окружено двумя внешними кольцами: одно на цитоплазматической стороне, из которого некоторые Nups выступают в цитозоль, а другое на нуклеоплазматической стороне, которое закрепляет корзинкообразную структуру. Транслокационный барьер в NPC состоит из Nups, которые содержат внутренне неупорядоченные домены, богатые фенилаланиновыми и глициновыми (FG) повторами, и занимают центральный канал NPC. Эти домены, богатые FG, могут собираться в сеть in vitro за счет взаимодействия между их гидрофобными повторами FG. Такая сетка была предложена для формирования ситовидного гидрогеля в центральном канале, тем самым создавая барьер проницаемости НПК 9.0027 4 . Альтернативно, хотя и не исключительно, некоторые FG-содержащие Nups (FG-Nups) могут действовать как полимерные щетки и фильтровать вход в пору путем энтропийного исключения ⁵ . Точная организация центрального канала до сих пор ускользала от структурных исследований, но плотная структура, называемая центральным транспортером, была обнаружена с помощью электронной микроскопии ^6,7 . Подробная структура NPC вместе с косвенными биохимическими данными также побудили некоторых авторов предположить, что в дополнение к центральному каналу NPC может также направлять грузы через вторичные периферические каналы 9.0027 8,9 .
Прямое наблюдение пути, по которому нативные частицы РНП проходят через NPC, было невозможно из-за сложности обнаружения таких комплексов в NPC в нанометровом масштабе. Наш текущий взгляд на транспорт мРНП через NPC в значительной степени основан на наблюдении гигантских кольцевых мРНП Бальбиани ^10,11 . Изображения из учебника показывают, как прохождение через центр NPC требует полного ремоделирования этих mRNP, чей необычно большой размер (~ 50 нм) намного превышает ширину центрального канала NPC, которая в настоящее время оценивается в ~ 25–30 нм. Однако эта модель может быть неприменима к большинству мРНП или прерибосомным частицам, размер которых остается ниже этого порога ¹² . Совсем недавно mRNP с флуоресцентной меткой отслеживали с помощью живой микроскопии в различных клеточных системах, чтобы определить как траекторию, так и время пребывания этих грузов в NPC ^13,14 . В то время как эти публикации выявили траектории mRNP вверх и вниз по течению от NPC, пространственное разрешение исследований флуоресцентной микроскопии в живых клетках остается слишком ограниченным, чтобы определить путь этих грузов внутри NPC. Кроме того, наблюдать мРНП с помощью этих методов до сих пор было возможно только с искусственными мРНК, содержащими большие массивы шпилечных меток (последовательности MS2 или PP7) в их 3′-UTR для рекрутирования множества флуоресцентных белков, которые могут влиять на их поведение ^13,14 .
Здесь мы сообщаем о прямом наблюдении частиц нативного РНП, перемещающихся через НПС в дрожжах, с нанометровым разрешением с помощью электронной томографии. Мы идентифицируем эти частицы как пре-рибосомы, анализируем их распределение в NPC и предлагаем модель их траектории во время транслокации. Кроме того, применяя вероятностную модель организации очередей, мы определяем время, затрачиваемое этими частицами на пересечение NPC.
Результаты
Электронная томография выявляет частицы РНП в НПК
Предыдущие оценки времени, необходимого частицам RNP для пересечения NPC, составляли от 10 до нескольких сотен миллисекунд ¹⁴ . Чтобы наблюдать такие переходные явления с помощью электронной микроскопии, мы заморозили клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae штамма дикого типа NOY505 с помощью замораживания под высоким давлением, которое доводит образцы до минусовой температуры менее чем за 10 мс ¹⁵ . Затем замороженные клетки заливали смолой методом замораживания и проводили электронную томографию ультратонких срезов толщиной 80 нм. Срезы клеток выбирали таким образом, чтобы ядерная оболочка была срезана перпендикулярно, т. е. отображала четко очерченные внешнюю и внутреннюю ядерные мембраны (рис. 1а). На полученных томограммах в ядрышке, а также в нуклеоплазме были видны многочисленные электронно-плотные частицы, напоминающие рибосомы (видимые в цитоплазме в виде черных точек) (рис. 1б). Поры в ядерной мембране, образованные НПК, были четко идентифицированы, но в большинстве случаев они не содержали явного груза (рис. 1в). Однако внутри этих пор или в непосредственной близости от них (на расстоянии не более ±40 нм с каждой стороны от срединной плоскости НПК) можно было различить крупные частицы, по-видимому, проходящие или взаимодействующие с НПК (рис. 1г, д). Эти частицы были видны с помощью электронной томографии (рис. 1c–e), но не с помощью обычной просвечивающей электронной микроскопии (рис. 1f–h). Мы систематически наблюдали 566 НПК и обнаружили крупные частицы в 5,3% из них (таблица 1). Из этих 30 NPC 83% ( n = 25) содержали одну частицу (как на рис. 1d), тогда как 17% ( n = 5) имели две частицы, выстроившиеся в пору (рис. 1e). Чтобы проверить воспроизводимость этой степени заполнения NPC, мы выполнили электронную томографию штамма OGP103, штамма с таким же генетическим фоном, что и NOY505. После наблюдения за 252 НПК мы обнаружили одинаковую долю НПК, занятых частицей (5,6%, n = 14), включая два НПК, содержащих две частицы (таблица 1). Мы объединили результаты двух штаммов, чтобы повысить их статистическую значимость. Мы подсчитали, что 34% из 818 подсчитанных НПК контактировали с ядрышком, а 66% прилегали к нуклеоплазме. 44 НПК, содержащих одну или две частицы, имели одинаковое распределение: 36 % контактировали с ядрышком и 64 % — с нуклеоплазмой. Это свидетельствует о том, что ядерно-цитоплазматическая транслокация этих крупных грузов равномерно осуществляется НПК в ядерной оболочке независимо от их положения относительно ядрышка или нуклеоплазмы.
Рис. 1
Электронная томография выявляет крупные грузы в НПС. a Замороженные под высоким давлением дрожжевые клетки, визуализированные с помощью обычной просвечивающей электронной микроскопии. Vac: вакуоль, Cyt: цитоплазма, NuP: нуклеоплазма, NuL: ядрышко (черная линия), тело полюса веретена SPB и комплекс ядерной поры NPC. Масштабная линейка: 200 нм. b Фрагмент электронной томограммы, показывающий ту же область, что и в ( a ). Ядерные электронно-плотные частицы обнаруживаются в серповидном ядрышке (синяя рамка) и нуклеоплазме (черная рамка), а рибосомы видны в цитоплазме (желтая рамка). Масштабная линейка: 200 нм. c – e Подборка электронно-томографических изображений, на которых видны НПК, содержащие одну или две крупные частицы (зеленые стрелки). f – g Эти частицы не видны при обычной просвечивающей электронной микроскопии. Пунктирные линии очерчивают ядерную оболочку. Масштабная линейка: 50 нм
Полноразмерное изображение
Таблица 1 Количественная оценка НПК, содержащих крупные электронно-плотные частицы
Полноразмерная таблица
Частицы РНП, наблюдаемые в НПК, в основном представляют собой пре-рибосомы
Двухконтрастный метод окрашивания ультратонких срезов уранилацетатом и цитратом свинца, который мы использовали для электронной томографии, преимущественно метит фосфатные группы в нуклеиновых кислотах ^16,17 ; следовательно, электронно-плотные частицы в нуклеоплазме и крупные частицы, наблюдаемые в НПК, вероятно, соответствуют частицам РНП, таким как мРНП или пре-рибосомы. Частицы, обнаруженные в НПК, имели глобулярную форму со средним размером 19,7 ± 1,6 нм × 18,4 ± 1,0 нм × 19.0,5 ± 1,8 нм ( n = 51), как определено с помощью ограничивающих 3D-рамок. Их размер и шаровидная форма вместе с прочной меткой уранилацетатом и цитратом свинца позволяют предположить, что эти частицы были пре-рибосомами. Изолированные мРНП, напротив, образуют палочковидные частицы диаметром 5–7 нм и переменной длины ¹² . Чтобы проверить гипотезу о том, что эти частицы были пре-рибосомами, мы сравнили их с настоящими пре-рибосомными частицами, захваченными в ядре мутантных штаммов дрожжей, имеющих условный дефект ядерного экспорта. Штамм MNY8 несет чувствительный к лептомицину B (LMB) аллель ( T539C ) гена, кодирующего экспортин Crm1 ¹⁸ . Ранее мы и другие сообщали, что частицы пре-40S и пре-60S сохраняются в ядре клеток MNY8 при инкубации с LMB ^19,20,21 . Если в нуклеоплазме клеток NOY505 дикого типа (рис. 2а) содержалось 75 ± 4 частиц/мкм ² ( n = 14 клеток), то это число увеличилось до 181 ± 11 частиц/мкм ² ( n = 9 клеток) в нуклеоплазме клеток MNY8 (рис. 2b) после инкубации с LMB (см. количественную оценку на рис. 2f). Диаметр и форма этих предполагаемых прерибосомных частиц были очень похожи на диаметр и форму крупных частиц, наблюдаемых в NPC (таблица 2). Для более специфического ингибирования прерибосомного ядерного экспорта мы использовали чувствительный к температуре мутант Ген NMD3 ( nmd3-2 ), который кодирует адаптер для Crm1 в предшественниках 60S субъединицы ²². Мутант nmd3-2 накапливал почти вдвое больше электронно-плотных частиц в нуклеоплазме при рестриктивной температуре (рис. 2в; 143 ± 8 частиц/мкм ² , n = 9 клеток), чем при пермиссивной температуре (74 ± 8 частиц/мкм ² , n = 11 клеток). Мы выполнили усреднение субтомограмм для этих электронно-плотных частиц, которые, как ожидается, будут преимущественно частицами до 60S. Консенсусная трехмерная структура этих частиц была создана с разрешением 75 Å (дополнительная фигура 1a). Эта карта средней плотности показала уплощенную сферическую форму, аналогичную карте электронной плотности поздней субъединицы дрожжей до 60S, сгенерированной с аналогичным разрешением (дополнительная фигура 1a). Кроме того, обе карты плотности соответствовали атомной структуре поздней пре-60S-субъединицы дрожжей в одной и той же ориентации с помощью жестких — стыковка кузова. Атомная структура частицы до 40S не заполнила карту плотности так полностью, как структура до 60S (дополнительная фигура 1b), хотя следует отметить, что при этом разрешении большая и малая субъединицы имеют одинаковые размеры. во многих направлениях и не могут быть однозначно различимы ²³ . Эти данные подтверждают предположение, что большинство нуклеоплазматических частиц, наблюдаемых в ядре штамма nmd3-2 при рестриктивной температуре, являются добросовестными пре-60S частицами. Затем мы измерили эти частицы и обнаружили, что их размер и округлость были очень сопоставимы с размерами крупных частиц, наблюдаемых в NPC в клетках дикого типа (таблица 2). Важно отметить, что мы могли легко обнаружить такие глобулярные электронно-плотные частицы в ядре штамма, несущего термочувствительный аллель 9. 0003 RPB1 ( rpb1-1 ), ген, кодирующий самую большую субъединицу РНК-полимеразы II (рис. 2d). Синтез мРНК сильно снижен при рестриктивной температуре у этого мутанта ²⁴, что мы подтвердили с помощью флуоресцентной гибридизации in situ с зондом поли-dT (данные не показаны). Частицы, обнаруженные в этом штамме при 37 °C, были очень сопоставимы по размеру и округлости с частицами, обнаруженными в штаммах NOY505, MNY8 и nmd3-2 (таблица 2). Мы насчитали плотность 68 ± 17 частиц/мкм ² ( n = 9 клеток), что близко к плотности, определенной для клеток дикого типа или мутантов rrn3-8 и nmd3-2 при 30 °C (рис. 2f и доп. Таблица 1). Эти результаты показывают, что эти частицы RNP в первую очередь не полагаются на РНК-полимеразу II для своего синтеза, что согласуется с тем, что они являются пре-рибосомами.
Рис. 2
Идентификация частиц в НПК как пре-рибосом. Томографические срезы замороженных под высоким давлением и лиофилизированных штаммов дрожжей: ( a ) NOY505 (wild-type), ( b ) MNY8 ( crm1 ^T539C ) treated with LMB, ( c ) nmd3-2 ^ts at 37 °С, ( d ) rpb1-1 ^ts при 37 °C и ( e ) rn3-8 ^ts при 37 °C На вставке к каждому изображению показано увеличение области нуклеоплазмы, обведенной белой рамкой. Ядрышко обведено пунктирной линией и лучше видно на обычных ПЭМ-изображениях этих участков (не показаны). В нуклеоплазме клеток дикого типа наблюдаются электронно-плотные частицы, подобные обнаруженным в НПК (белые кружки). Они сильно накапливаются при инактивации Nmd3 и Crm1, а их количество падает при инактивации транскрипции РНК-полимеразы I ( rrn3 mutant), что убедительно подтверждает их соответствие пре-рибосомам. Точно так же на уровни этих частиц не влияет инактивация РНК-полимеразы II (мутант rpb1 ). Масштабная линейка: 500 нм. f Количественное определение плотности нуклеоплазматических электронно-плотных частиц в мутантных штаммах по сравнению с клетками NOY505 дикого типа. На блочной диаграмме показаны медиана (линия внутри прямоугольника), среднее значение (пунктирная линия внутри прямоугольника) и квартили. Усы шапки соответствуют максимальному и минимальному значениям. Статистическую значимость результатов оценивали с помощью одностороннего теста ANOVA. Исходные данные предоставляются в виде файла исходных данных
Полноразмерное изображение
Таблица 2 Морфологическое сравнение частиц РНП, обнаруженных в НПК с рибосомами и прерибосомными частицами
Полная таблица
эти частицы требовали рибосомного биогенеза при наблюдении за термочувствительным мутантом гена RRN3 , который кодирует специфичный для РНК-полимеразы I транскрипционный фактор ²⁵ . Выраженный дефект синтеза рРНК при рестриктивных температурах ранее наблюдался у термочувствительных rn3-8 мутант ^26,27 . Как и ожидалось, если транскрипция РНК pol I дефектна ²⁸ , ядрышко фрагментируется и отделяется от ядерной оболочки у этого мутанта при рестриктивной температуре (рис. 2e, черные пунктирные линии). Плотность рибосом в цитоплазме у мутанта rrn3-8 , измеренная в зоне 250–300 нм вокруг ядерной оболочки, снижалась с 851 ± 152 рибосом/мкм ² ( n = 20 клеток) при пермиссивном температура до 487 ± 115 рибосом/мкм ² ( n = 17 клеток) при рестриктивной температуре, что свидетельствует о сильном дефекте производства рибосом (дополнительная таблица 1). Аналогично плотность электронно-плотных глобулярных частиц в нуклеоплазме у мутанта rrn3-8 при 37 °С (47 ± 13 частиц/мкм ² , n = 8 клеток) была значительно ниже, чем при 30 °С. C (73 ± 13 частиц/мкм ², n = 10 клеток) (дополнительная таблица 1). В этих условиях сильно сниженного биогенеза рибосом число частиц, транслоцирующихся через НПК, упало с 6,2 частиц/100 НПК в клетках NOY505 дикого типа (35 частиц в 566 НПК, подсчитанных в 105 клетках) до 1,8 частиц/100 НПК (4 частицы). в 218 NPC насчитываются в 57 ячейках) в rn3-8 штамм при непермиссивной температуре. Мы не видели примера двух частиц на NPC в rrn3-8 ячеек при рестриктивной температуре. Из этого и других структурных и функциональных данных, описанных выше, мы заключаем, что подавляющее большинство частиц, обнаруженных с помощью электронной томографии в НПК, были прерибосомными частицами.
Предрибосомное распределение показывает путь через NPC
Из-за отсутствия окрашивания масса NPC не была видна на томограммах. Чтобы визуализировать положение пре-рибосом в NPC, мы наложили наши данные на модель NPC дрожжей, недавно установленную крио-ЭМ 9.0027 7 . Мы проверили, что наибольшее расстояние между загнутыми краями ядерной оболочки на этих субтомограммах равно 100 ± 5 нм, что сравнимо с аналогичным измерением, выполненным у дрожжей ^6,29,30 . Кроме того, ширина ядерной оболочки на этих субтомограммах была оценена в 31 ± 3 нм, что соответствует ширине ядерной оболочки, установленной ранее с помощью криоэлектронной микроскопии ⁶ . Комбинация этих двух мер подтвердила, что плоскость сечения на этих субтомограммах была ортогональна ядерной оболочке и содержала центральную ось NPC. На основании этого вывода каждой частице, обнаруженной в НПК, были приписаны координаты путем измерения ее расстояния от центральной оси ( X ) и от срединной плоскости ( Y ) NPC, последняя определяется изогнутыми краями ядерной оболочки (дополнительный рисунок 2). Для 3D-рендеринга структура дрожжей NPC ⁷ была расположена на субтомограммах таким образом, что цитоплазматическое кольцо было прикреплено к внешней ядерной мембране, а ядерное кольцо — к внутренней ядерной мембране (рис. 3). На рисунке 3а показана репрезентативная галерея прерибосомных частиц, расположенных в разных местах на пути к цитоплазме.
Рис. 3
3D-рендеринг пре-рибосомных частиц в NPC. a Модель NPC дрожжей была присоединена к субтомограммам, показывающим пре-рибосомные частицы в различных областях NPC в клетках NOY505 или OGP103. В галерее отображаются томографические разрезы и соответствующие им 3D-модели. Предрибосомные частицы сегментированы синим цветом, ядерная оболочка — зеленым, а модель NPC — красным. b Пример NPC, содержащего две прерибосомные частицы. c В клетках nmd3-2 ^ts при 37 °C большинство прерибосомных частиц было обнаружено в ядерном кольце или ниже. Черные линии указывают на ядерную оболочку. Масштабная линейка: 100 нм
Полноразмерное изображение
Как показано на рис. 4a–c, 51 частица, расположенная в НПК клеток NOY505 или OGP103, была обнаружена в ядерном кольце ( Y = −21,5 ± 5,8 нм; S. D. ), внутреннее кольцо ( Y = 1,2 ± 6,1 нм) и цитоплазматическое кольцо ( Y = 25,1 ± 6,8 нм). Поразительно, но все частицы располагались внутри центрального транспортера NPC (рис. 4а, в). В ядерном и внутреннем кольцах пре-рибосомы располагались очень близко к центральной оси NPC: центр тяжести пре-рибосом был удален на 0,6 ± 0,3 нм (SD) и 0,7 ± 0,6 нм от центральной оси NPC соответственно. Учитывая, что средний диаметр субъединицы пре-60S составляет ~25 нм, мы оцениваем, что частицы исследуют цилиндрическое пространство диаметром ~26–28 нм. В цитоплазматическом кольце, напротив, прерибосомные частицы смещены на 5,4 ± 3,7 нм от центральной оси NPC. Таким образом, распределение частиц определяет два компартмента внутри центрального транспортера: узкий канал в ядерном и внутреннем кольцах и более широкое коническое пространство на цитоплазматической стороне (рис. 4d). Их внеосевое положение указывает на то, что частицы, выходящие из центрального канала, вероятно, связанные с ядерными транспортными факторами, взаимодействуют с асимметричными Nups, расположенными на цитоплазматической стороне NPC. Интересно, что мы заметили одну или две дополнительные удлиненные плотности, прикрепленные к некоторым прерибосомным частицам на цитоплазматической стороне NPC (рис. 4e). В случае НПК, состоящих из двух частиц, мы наблюдали эти дополнительные плотности только на частицах, расположенных на цитоплазматической стороне. Их не наблюдали ни на частицах в нуклеоплазме, ни на зрелых рибосомах в цитоплазме, независимо от порога уровня серого (дополнительная фигура 3), что указывает на то, что они не были артефактами томографической реконструкции. Из-за их особой ориентации и локализации мы предполагаем, что эти плотности могут быть связаны с протяженными структурами, образованными цитоплазматическими Nups, которые взаимодействуют с транспортируемыми пре-рибосомными частицами.
Рис. 4
Путь пре-рибосом через NPC. a Положения пре-рибосом в NPCs в клетках дикого типа (WT) и пре-60S ядерных экспортно-дефектных мутантах nmd3-2 . Точки представляют собой центр тяжести частиц относительно сечения срединной плоскости ( X ) и центральной оси ( Y ) NPC. Распределение было отражено вдоль оси Y для представления. b Распределение прерибосомных частиц в ядерном, внутреннем и цитоплазматическом кольцах у дикого типа и нмд3-2 клеток. c На центральный переносчик накладывали распределение пре-рибосомальных частиц, как в и , и пре-60S (синие) или пре-40S (розовые) частицы в том же масштабе. Центральный транспортер достаточно велик, чтобы вмещать пре-рибосомы независимо от их ориентации. Путь частиц ограничен каналом диаметром 25–30 нм в центре ядерного и внутреннего колец. d Оценивался объем пространства, изучаемого прерибосомными частицами, в ядерном, внутреннем и цитоплазматическом кольцах НПК. Для диаметра центрального канала мы учитывали самый длинный размер прерибосомной частицы, т.е. 28 нм для пре-40S частицы ⁶⁵ . e Репрезентативная трехмерная реконструкция пре-рибосомы в цитоплазматическом кольце, показывающая дополнительные плотности, направленные в сторону NPC, почти перпендикулярно центральной оси (черная стрелка). В этом примере сегментация была выполнена с помощью изоповерхности с отсечкой уровня серого 1 σ , но дополнительная плотность все еще обнаруживается с отсечкой 3 σ ( σ : стандартное отклонение распределения уровня серого ). Исходные данные для и и b предоставлены в виде файла исходных данных
Полноразмерное изображение
Центральный переносчик образует барьер проницаемости
В клетках NOY505 или OGP103 доля частиц в НПК была выше во внутреннем кольце (49%), чем в ядерном кольце (18%) или цитоплазматическом кольце (33%) (рис. 4b). Эта более высокая доля частиц во внутреннем кольце была еще более выраженной, если ограничить анализ НПК, содержащими одну частицу: 15% были обнаружены на ядерной стороне, 64% во внутреннем кольце и 21% на цитоплазматической стороне (Манн- Уитни U -критерий, p < 0,0006 для сравнения ядра с внутренним кольцом и внутреннего кольца с цитоплазмой). Более высокая доля частиц во внутреннем кольце не может быть объяснена просто более длинным путем или большим объемом пространства, занимаемого частицами в этой зоне, по сравнению с ядерным и цитоплазматическим кольцами (рис. 4d). Когда две частицы присутствовали в одном и том же NPC (7 NPC), они были обнаружены по обе стороны от внутреннего кольца (рис. 3b), за исключением одного случая, когда одна из двух частиц присутствовала во внутреннем кольце. Это говорит о том, что ядро центрального канала не может одновременно вмещать две частицы. Такое распределение прерибосомных частиц подтверждает гипотезу о том, что частицы, перемещающиеся через NPC, проводят больше времени во внутреннем кольце, чем в ядерном или цитоплазматическом кольцах. Распределение было совсем другим в nmd3-2 мутант при непермиссивной температуре, когда рекрутирование Crm1 к пре-60S частицам дефектно (рис. 3в и 4а, б). Ожидается, что в качестве экспортина частиц pre-60S Crm1 будет взаимодействовать с FG Nups и тем самым снизить энергию, необходимую для пересечения барьера, образованного FG Nups в NPC. Поразительно, но наибольшая доля (64%) частиц, связанных с НПК, у мутанта nmd3-2 при 37 °C была обнаружена в ядерной зоне, на расстоянии 30–50 нм от ядерной оболочки, за пределами центрального транспортера в пространство, занимаемое ядерной корзиной (рис. 4б). Большинство этих частиц не выстраивались на центральной оси NPC. Несколько NPC демонстрировали две пре-рибосомы в ядерной зоне (см. пример на рис. 3c), что не наблюдается в клетках дикого типа. Некоторые частицы были обнаружены внутри центрального транспортера или на цитоплазматической стороне и могут соответствовать пре-40S частицам. Эти данные указывают на то, что Crm1 необходим для входа в центральный транспортер, но не для введения в ядерную корзину. Мы заключаем, что барьер проницаемости, преодолеваемый Crm1, начинается с ядерной стороны центрального транспортера.
Оценка времени пребывания пре-рибосом в NPC
Сверхбыстрое замораживание клеток происходит за <10 мс ¹⁵ . Этот масштаб времени меньше, чем время перемещения крупных частиц RNP, как показано анализом экспорта ядер mRNP в живых клетках у дрожжей ³¹ . Следовательно, доля НПК, содержащих предрибосомную частицу, на томограммах должна отражать реальную долю (в среднем) занятых НПК в любой момент времени у экспоненциально растущих дрожжей. Следуя этому предположению, мы провели вероятностный анализ томограмм, чтобы сделать вывод о времени пребывания пре-рибосом в НПК. Мы смоделировали ядерный экспорт прерибосомных частиц в соответствии с моделью организации очереди сети Джексона 9.0027 32 . Эта вероятностная модель широко используется для описания и оптимизации сетей в различных областях, таких как телекоммуникации, транспорт или здравоохранение. Здесь NPC были аппроксимированы сетью параллельных узлов, каждый из которых характеризуется временем обработки (временем ожидания) и очередью экспортируемых грузов (рис. 5а). В равновесии вероятность того, что NPC занят грузом, зависит от потока грузов, общего количества NPC и времени пребывания. Синтез рибосом у S. cerevisiae ранее оценивалась в 2000 рибосом/мин во время фазы экспоненциального роста ³³ , что предполагает экспорт 4000 субъединиц/мин из ядра. Мы сделали приближение, что поток пре-рибосом постоянен на протяжении всего клеточного цикла. Ранее было обнаружено, что количество NPC на ядро варьирует от ~80 в фазе G1 до ~120 в фазе S и ~140 в митозе ³⁴ . Учитывая, что экспоненциально растущие дрожжевые клетки в основном находятся в фазах G1 и S ³⁵ , мы рассмотрели в среднем 110 NPC на клетку. Связывание равновесного занятия со временем пребывания также требует предположения, что поток прерибосомных частиц однонаправлен от ядра к цитоплазме и что все прерибосомные частицы (пре-40S и пре-60S) ведут себя одинаково при пересечении NPC. Применяя эти допущения, наилучшее соответствие модели организации очередей сети Джексона для коэффициента заполнения NPC 5,4%, измеренного на томограммах, было получено при времени пребывания 89мс (рис. 5b). В этих условиях модель очередей также предсказывала, что только небольшая часть NPC (0,3%) должна иметь очередь и что эти очереди не должны содержать более одной частицы. Таким образом, согласно этой модели, пре-рибосомы вряд ли будут конкурировать друг с другом за проникновение в NPC. NPC, в которых мы наблюдали две частицы одновременно в канале поры, могут отражать остаточную очередь, предсказанную моделью. Чтобы проверить надежность этого прогнозируемого времени пребывания, мы рассмотрели влияние возможных неточностей в измерении занятости NPC, сделанных на основе томограмм (рис. 5c). Когда коэффициент заполнения NPC варьировался от 0,04 до 0,07 (т.е. ~25% отклонение от измеренного значения 0,054), время задержки варьировалось от 65 до 115 мс. Точно так же, варьируя среднее количество NPC от 9От 0 до 130 на ячейку время задержки изменялось на 75–110 мс. Принимая во внимание ошибку этих двух параметров вместе, расчетное время задержки оставалось между 55 и 140 мс. Таким образом, мы с достаточной уверенностью заключаем, что транслокация прерибосомных частиц через NPC занимает в среднем ~90 ± 50 мс.
Рис. 5
Определение времени пребывания пре-рибосом в НПК вероятностным методом. a Ядерный экспорт пре-рибосом моделировали в соответствии с сетью очередей Джексона. Каждый NPC характеризуется очередью и временем пребывания. Мы предполагаем, что пре-рибосомы направляются к НПК с равной вероятностью, что подтверждается равномерным распределением пре-рибосом среди ядрышковых и нуклеоплазматических НПК. b Исходя из среднего значения 110 NPC на клетку и потока 4000 прерибосомных частиц/мин, наилучшее соответствие модели экспериментальным данным (5,4% занятых NPC) получено для времени пребывания 89 мс . Значения, предсказанные моделью Джексона, соответствуют NPC без частиц, содержащих одну частицу или занятых одной частицей с одной частицей в очереди. c Надежность этого расчетного времени пребывания была проверена с учетом комбинированных ошибок среднего количества NPC (110 ± 20) и наблюдаемой степени занятости NPC (5,4 ± 1,5%). Серый многоугольник ограничивает область, определяемую этими значениями. Время пребывания в этой области колеблется от 55 до 140 мс
Изображение полного размера
Обсуждение
В этом исследовании мы смогли обнаружить одиночные нативные частицы РНП глобулярной формы в пути в NPC с помощью электронной томографии. Анализ распределения этих частиц относительно структуры NPC сообщает нам о топологии их пути через NPC и позволяет нам определить несколько этапов на пути к цитоплазме (рис. 6). Мы идентифицировали эти частицы как прерибосомы на основании их морфологического сходства с частицами, которые накапливаются в нуклеоплазме crm1 и мутантных штаммов nmd3 , дефектных по прерибосомному ядерному экспорту, а также потому, что количество этих частиц в НПК упало на 70–80% у мутантного штамма rrn3 , у которого РНК-полимераза I транскрипция неполноценна. Кроме того, большая часть этих частиц накапливается при входе в ядро NPC при потере функции Nmd3, адаптора экспортина Crm1 на пре-60S частицах. Мы не можем исключить, что некоторые из частиц являются мРНП; однако средний кажущийся диаметр (~ 20 нм), однородный размер и глобулярная форма частиц не соответствуют палочковидной структуре, наблюдаемой для очищенных мРНП в дрожжах ¹² , и недавно предложенный для изучения мРНП человека с помощью анализов обнаружения лигирования ³⁶ . Кроме того, эксперименты по отслеживанию одиночных mRNP в клетках человека показали, что mRNP раскручиваются во время их прохождения через NPC ³⁷ . Напротив, высокоупорядоченная структура пре-рибосом перед их ядерным экспортом, как показано с помощью криоэлектронной микроскопии отдельных частиц ^38,39 , указывает на то, что прерибосомы пересекают NPC в компактной конформации, что согласуется с нашими наблюдениями.
Рис. 6
Модель транслокации прерибосомных частиц через NPC. Представлена пре-60S рибосомная частица, пересекающая NPC. После кратковременного взаимодействия с ядерной корзиной прерибосомы быстро переносятся к центральному транспортеру, составляющему основной барьер проницаемости. Путь частиц ограничивается узким каналом вдоль центральной оси, когда они пересекают ядерное и внутреннее кольца. Прерибосомы проводят больше времени во внутреннем кольце, чем в ядерном или цитоплазматическом кольцах, возможно, из-за высокой плотности FG Nups во внутреннем кольце (особенно Nsp1/Nup49). /Nup57), который обеспечивает множественные контактные площадки для пре-рибосом. Мы предполагаем, что экстракция из этого узкого канала на выходе из внутреннего кольца включает взаимодействие с асимметричными Nups, обнаруженными в цитоплазматическом кольце, подобно комплексу Nup82. Тогда разборка ядерных транспортных факторов делает перенос необратимым. Этот путь согласуется с потребностью комплексов Nsp1 и Nup82 в пре-рибосомной транслокации. NPC и пре-рибосома нарисованы в одном масштабе. КТ центральный транспортер. Моделирование частицы pre-60S основано на структуре PDB 5h5P [https://www.rcsb.org/structure/5h5P])
Изображение в натуральную величину
Наши данные показывают, что пре-рибосомы выходят из ядра одинаково часто через все NPC, независимо от их близости к ядрышку, предполагая, что ни один из NPC не специализируется на экспорте пре-рибосом. Отсутствие белков Mlp1 и Mpl2 в ядерной корзине ядрышковых NPC ^40,41 или появление поздних стадий ядерного созревания прерибосом в нуклеоплазме привели к предположению, что некоторые NPC могут специфически вмешиваться в прерибосомные процессы. ядерный транспорт. Наши наблюдения скорее побуждают нас предположить, что пре-рибосомные частицы диффундируют вокруг нуклеоплазмы и ядрышка перед ядерным экспортом, как это также предполагается для мРНП ⁴¹ . Этот вывод подтверждается теорией диффузионного транспорта по узким каналам ⁴² : из-за малой площади, занимаемой НПК в ядерной оболочке, и большого объема ядра частица, вероятно, исследует большую часть ядра путем диффузии до того, как он достигнет NPC и покинет ядро, независимо от места его синтеза. Случайность выходного NPC может быть дополнительно усилена конкуренцией с другими грузами за связывание NPC и вход, что может заставить пре-рибосому попробовать несколько NPC, прежде чем найти путь выхода. Хотя используемая здесь модель очередей предсказывает, что пре-рибосомные частицы вряд ли будут конкурировать друг с другом на этом этапе, она не исключает конкуренции со многими другими грузами, экспортируемыми из ядра.
Было предложено пройти через NPC как через центральный канал, так и через периферийные каналы ^9,29 . Структура центрального канала NPC остается плохо определенной и наблюдается при крио-ЭМ реконструкции в виде плотной структуры, называемой центральным транспортером ^6,9 . Мы обнаружили, что все прерибосомные частицы, обнаруженные в НПК штаммов дикого типа, локализованы в центральном транспортере. Распределение частиц показывает, что они следуют по каналу шириной 25–30 нм в центре центрального переносчика, на уровне ядерного и внутреннего колец. Выход этого узкого канала происходит на стыке внутреннего и цитоплазматического кольца, где пространство, занимаемое частицами, быстро увеличивается. Важно отметить, что в то время как каркасы цитоплазматического и ядерного колец демонстрируют высокую степень симметрии, асимметрия пространства, занимаемого частицами, указывает на то, что FG-Nups, обнаруженные на двух сторонах NPC, принимают разные организации. В соответствии с наблюдаемым здесь центральным маршрутом прерибосом, прохождение как пре-40S, так и пре-60S частиц, как известно, сильно зависит от мутаций в Nsp1p, основном компоненте центрального канала, тогда как он гораздо менее чувствителен к мутациям. в ядрах, образующих комплекс Y, организующий периферию внутреннего кольца ^43,44 . В отличие от пре-рибосомных частиц, экспорт мРНП в дрожжах недостаточен у мутантов Y комплекса и не подвержен влиянию большинства мутаций в Nsp1p ^43,45 . Это говорит о том, что пре-рибосомы и мРНП проходят через NPC разными путями. В соответствии с этим отслеживание флуоресцентных одиночных mRNP привело к заключению, что они взаимодействуют преимущественно с периферией NPC ⁸ . Иммуно-ЭМ исследования Dbp5 и Gle1, однако, скорее показали, что большинство мРНП следуют центральному пути через NPC 9.0027 29 . Таким образом, вопрос о пути прохождения мРНП через NPC остается открытым. Гигантские кольцевые mRNP Balbiani в клетках Chironomus действительно следуют центральной оси NPC во время их экспорта из ядра ^10,11 . Точно так же исследования ядерного импорта крупных грузов в клетки многоклеточных животных с помощью электронной микроскопии, включая вирусы ⁴⁶ и покрытые белком частицы золота ^47,48, также показали, что эти частицы проходят через центральную ось NPC. Этот осевой путь перемещения больших грузов может быть в первую очередь объяснен топологическими ограничениями, налагаемыми их громоздкими структурами, что также может иметь место для пре-рибосом.
Наши данные указывают на отдельные этапы экспорта пре-рибосом из ядра. Ожидаемое взаимодействие с ядерной корзиной оказывается очень кратковременным в условиях дикого типа, поскольку мы заметили только пре-рибосомы, накапливающиеся в области ядерной корзины у мутанта nmd3-2 . Этот шаг может не требовать Crm1, но может включать другие пре-рибосомные факторы ядерного экспорта, такие как Mex67/Mtr2. Во-вторых, передача грузов центральному транспортеру требует преодоления жесткого энергетического барьера, который в этом случае в первую очередь опосредуется Crm1. Попадая в центральный канал, частицы находят наиболее энергетически выгодную зону во внутреннем кольце, о чем свидетельствует более длительное время пребывания грузов в этой зоне. Это можно объяснить высокой плотностью контактов с FG Nups, особенно с комплексом Nsp1. Выход из центрального канала может затем включать высокоаффинные взаимодействия с асимметричными Nups, расположенными на цитоплазматическом кольце, такими как Nup159., что вытеснило бы частицы из центрального канала. В этом случае перенос в цитоплазматическое кольцо станет необратимым за счет диссоциации транспортных факторов. В соответствии с этой моделью, ядерный экспорт пре-рибосом нуждается в комплексе Nup82 ⁴³, который закреплен на цитоплазматическом кольце и включает Nup82, Nup159, Dyn2 и Nsp1 ⁴⁹. Этот комплекс обеспечивает сайты связывания для транспортных факторов и формирует платформу для финальных стадий экспорта мРНП ^50,51 . Человеческий гомолог Nup159, Nup214, содержит сайты связывания с высоким сродством для экспорта Crm1 ^52,53 и необходим для Crm1-опосредованного ядерного экспорта ⁵⁴ . Недавно было предположено, что комплекс Nup82 направлен к центральной оси NPC, а не к цитозолю ^7,49,50. Внеосевое положение частиц, наблюдаемое в нашем исследовании, согласуется с этой моделью, которая помещает комплекс Nup82 в идеальное положение для связывания пре-рибосом и способствует их выходу из центрального канала. Дополнительные плотности, которые мы наблюдали на прерибосомах в цитоплазматическом кольце (рис. 4e и дополнительный рисунок 3), могут соответствовать таким взаимодействиям. Интересно, что повторы GLFG, содержащие домен Nup116, нуклеопорина цитоплазматического кольца, также распространяются в центр NPC, предполагая, что они перемещаются внутрь и наружу внутреннего кольца ⁵⁵ ; таким образом, они могут взаимодействовать с грузами, когда они пересекают центральный канал, и ориентировать их перенос на цитоплазматическую сторону NPC.
Используя сеть очередей Джексона для моделирования ядерного экспорта, мы пришли к выводу, что среднее время пребывания пре-рибосом в NPC находится в диапазоне 90 мс. Это значение хорошо сравнимо с недавно измеренными для мРНП в C. tentans и в почкующихся дрожжах с помощью флуоресцентной микроскопии живых клеток ^31,56 , хотя у позвоночных также сообщалось о более коротком времени пребывания ⁸ . Помимо технических проблем, связанных с анализом данных, и недостатков мечения мРНП, обсуждавшихся ранее ^13,14, различия во времени пребывания могут возникать из-за размера и состояния уплотнения грузов (в этих экспериментах использовались разные мРНП), а также плотность экспортных рецепторов на них, как было показано с функционализированными квантовыми точками ⁵⁷ . Контроль качества мРНП в корзине NPC также может увеличить время пребывания на ядерной стороне, тогда как для пре-рибосом в NPC не было описано механизма контроля качества. Более того, масштаб и разрешение электронной томографии не такие, как при отслеживании отдельных частиц с помощью флуоресцентной микроскопии. Здесь в нашем исследовании учитываются только частицы, обнаруженные в центральном переносчике, и поэтому основное внимание уделяется прохождению частиц RNP через каркас ядра. Напротив, при изучении мРНП с помощью флуоресцентной микроскопии учитывались гораздо более крупные цитоплазматические и ядерные зоны, расположенные на расстоянии до 150 нм от флуоресцентно меченого трансмембранного нуклеопорина POM. Наблюдение за пре-рибосомами и мРНП с помощью аналогичных методов необходимо для более прямого сравнения динамики этих двух классов частиц РНП. Наконец, следует отметить, что наша оценка времени пребывания прерибосомных частиц в NPC не учитывала никакой потенциальной конкуренции за связывание с NPC со стороны нерибосомных РНК и белков. В этом плане 9Время пребывания 0 мс может соответствовать высокой оценке, поскольку меньшее количество NPC, доступных для прерибосомных частиц, привело бы к расчету более короткого времени пребывания (рис. 5c). Влияет ли такая конкуренция на прерибосомный транспорт и как, остается открытым вопросом.
Из этой работы мы делаем вывод, что пре-рибосомные частицы направляются через NPC в компактной конформации и следуют центральной оси в ядерном и внутреннем кольцах. Используемый здесь подход электронной томографии позволяет наблюдать нативные частицы RNP и может сочетаться с мутационным анализом ядерного транспортного механизма для уточнения структурных и биофизических моделей, описывающих перемещение грузов через NPC. Увеличение пропускной способности и разрешения этого метода потенциально может дать доступ к ориентации прерибосом внутри NPC или к различиям в ядерном экспорте частиц до 40S и до 60S.
Methods
Strains
The following strains of the yeast S. cerevisiae were used in this study: NOY505 ⁵⁸ , MNY8 ¹⁸ , nmd3-2 ^ts ²² , RRN3-8 ^TS ²⁶, RPB1-1 ^TS ²⁴ (любезно предоставленным доктором FranCoise Stutz, Университет Женевы и ogp103 (Uncopoped; Гадаль, LBME, Тулуза). NOY505 представляет собой штамм дикого типа, ранее использовавшийся для изучения ядрышка. Штамм OGP103 был сконструирован из штамма TAK201 9.0027 59 , штамм, происходящий от NOY397 ^58,60, подобный NOY505. В штамме OGP103 рибосомные гены чередуются с повторами LacO , чтобы пометить локус рДНК на хромосоме XII, что не изменяет морфологию ядрышка или процессинг рибосомной РНК и не имеет отношения к данному исследованию. Клетки OGP103 и NOY505 демонстрируют сходную морфологию ядрышек и скорость роста.
Подготовка образца
Все штаммы выращивали до середины логарифмической фазы в полной среде YP с 2% глюкозой. Для запуска накопления прерибосомных субъединиц в ядре клетки MNY8 обрабатывали 100 нМ лептомицина В (LC Laboratories) в течение 45 мин и nmd3-2 ^ts Клетки, выращенные при 30 °C, переносили при 37 °C на 2 ч. Для прерывания активности РНК-полимеразы II термочувствительный штамм rpb1-1 переводили с 25 на 37°С на 60 мин. Для специфического ингибирования активности РНК-полимеразы I термочувствительный штамм rrn3-8 переводили с 25 на 37 °С на 90 мин. Для сверхбыстрого замораживания дрожжевые клетки собирали фильтрованием на нитроцеллюлозных мембранах с порами 0,45 мкм (Millipore) или центрифугированием при 3000 об/мин в течение 3 мин с использованием 1,5-мл микроцентрифужной пробирки (Eppendorf). Дрожжевую пасту смешивали с жидкой агарозой с низкой температурой плавления (Sigma) непосредственно перед замораживанием под высоким давлением в Leica EMPACT. Затем замороженные клетки переносили в автоматизированную установку для замещения замораживанием (AFS2, Leica) для замещения замораживанием в безводном ацетоне, содержащем 0,01% четырехокиси осмия, 0,1% глутарового альдегида и 0,1% уранилацетата при -9°С. 0 °С. Температуру постепенно повышали до -50 °С в течение 3 дней. Образцы заливали в Lowicryl HM20, а смола отверждалась под УФ-светом при температуре -35 °C. Срезы номинальной толщины 80 нм были вырезаны на ультрамикротоме UCT (Leica) и собраны на медных сетках 150 меш, покрытых формваром или углеродом, или медных сетках, покрытых коллодием и углеродом, покрытых родием (Electron Microscopy Science). На поверхность каждого среза добавляли конъюгаты белок А-золото (Aurion) размером десять нанометров, чтобы они служили реперными маркерами для последующего выравнивания изображений в IMOD 9.0027 61 . Срезы окрашивали цитратом свинца и 5% уранилацетатом в 70% метаноле.
Электронная томография
Серии одноосных наклонов были записаны на просвечивающем электронном микроскопе JEM 2100 или JEM 1400 (JEOL) при напряжении 200 или 120 кВ соответственно. Плагин для томографии программного обеспечения Digital Micrograph (Gatan) использовался для автоматического получения изображений каждые 2° в диапазоне ±60° с использованием ПЗС-камеры Ultrascan 2K × 2K (Gatan) с размером пикселя 1,01 нм (JEM 2100). или камеру Gatan Orius SC1000B с размером пикселя 0,64 нм (JEM 1400) при увеличении ×10 000. Томограммы реконструировали с помощью IMOD методом одновременной итеративной реконструкции (SIRT). Номинальное разрешение на наших томограммах оценивается примерно в 4 нм по критерию Кроутера ⁶² .
Анализ изображений
Для оценки морфологии частиц на томограммах была проведена пороговая сегментация в двух измерениях на нескольких томографических срезах, а для определения параметров формы, включая округлость и диаметр Ферета, была использована стандартная опция измерения в программном обеспечении ImageJ. Фильтры размера и округлости 150 нм ² и 0,6 соответственно применяли к сегментированным частицам, чтобы исключить частицы, намного меньшие, чем пре-рибосомы, или частицы неглобулярной формы. Измерения частиц в ядре или нуклеоплазме были выполнены на 8–10 клетках, всего 108–373 частиц на штамм дрожжей (дополнительная таблица 1). Подсчет ядерных и цитоплазматических частиц проводили с использованием плагина счетчика клеток ImageJ в секциях из 8–14 клеток. Измерения проводились на 9От 6 до 1629 частиц на совокупной поверхности размером от 1,86 до 4,6 мкм ² (дополнительная таблица 1).
Для измерения положения пре-рибосомных частиц внутри NPC мы определили центр тяжести частицы как центр окружности, обрамляющей эту частицу. Координаты были присвоены каждой частице в пространственной системе, определяемой линией, соединяющей изогнутые края ядерной оболочки (медианная плоскость внутреннего кольца) и центральной осью NPC (дополнительный рисунок 2). Координаты были установлены путем измерения расстояний между этими осями и центроидом каждой частицы с использованием инструмента линии от руки в ImageJ.
Морфологическое сравнение частиц РНП, обнаруженных в НПК
Для таблицы 2: диаметр и округлость хорька оценивались на центральном участке частиц, наблюдаемых на томограммах. В клетках дикого типа измерения проводились на больших глобулярных частицах, наблюдаемых в NPC, на рибосомах в цитоплазме и на ядрышковых частицах, которые, как мы предполагаем, являются пре-рибосомами. В клетках crm1 ^T539 (штамм MNY8) были проведены измерения частиц, накопленных в ядре после обработки 100 нМ LMB в течение 45 мин, что препятствует ядерному экспорту прерибосом. В nmd3-2 ^ts клеток измерения проводились на частицах, заблокированных в ядре после 2-часового сдвига до 37°C, которые, как ожидается, будут частицами до 60S. В клетках rpb1-1 ^ts измеряли частицы, обнаруженные в ядре после прекращения синтеза мРНК в клетках, переведенных на 1 ч на 37 °C. SEM: стандартная ошибка среднего.
Усреднение субтомограмм
Усреднение предполагаемых частиц pre-60S на субтомограммах проводили с помощью пакета программ Automated Recognition of Geometries, Objects, and Segmentations (ARGOS) (компания FEI). Объем ~0,045 мкм ³ (1684 × 589 × 45 вокселей) был извлечен из томограммы ядра клетки nmd3-2 при 37 °C с использованием команды IMOD trimvol . Сокращенный объем содержал в ядре несколько прерибосомных частиц. Геометрический шаблон из 24 ³ вокселей был впервые использован программным обеспечением ARGOS для сопоставления шаблонов и создания средней трехмерной структуры. Затем среднюю структуру использовали в качестве эталона, и всю процедуру повторяли несколько раз для уточнения средней структуры. Карта плотности субъединицы 9 60S дрожжей с низким разрешением.0027 63 (код доступа к pdb: 4V7R [http://www.rcsb.org/structure/4V7R]) был создан с помощью команды molmap в UCSF Chimera ⁶⁴. Подгонка атомной структуры 60S к этим картам плотности или одной карты плотности к другой была выполнена с использованием опции глобального поиска команды USCF Chimera FitMap .
Стыковка дрожжей NPC
Когда внутри NPC однозначно наблюдалась крупная шаровидная частица, субтомограмма с центром на этом NPC была извлечена с использованием IMOD 9Команда 0003 тримвол . Ядерная оболочка была сегментирована вручную с помощью инструментов рисования в IMOD. Объем, соответствующий частице, отображался порогом изоповерхности в IMOD. Структура NPC дрожжей (код доступа emdb: 7321) была закреплена на субтомограмме, как показано на рис. 3. Объем NPC дрожжей был изменен с помощью инструмента Volume Eraser в UCSF Chimera. Стыковку NPC на сегментированной ядерной оболочке проводили вручную в UCSF Chimera.
Статистический анализ
Критерий нормальности Шапиро-Уилка был выполнен перед использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) для независимых выборок; различия считались значимыми при p < 0,05. Что касается пространственного распределения прерибосомных частиц в NPC, использовался непараметрический критерий Манна-Уитни U (нулевая гипотеза H0: две выборки взяты из одной и той же популяции). Количество опытов и повторностей указано в подписях к рисункам.
Модель очереди Джексона
Для моделирования ядерного экспорта пре-рибосом через NPC мы использовали сеть Джексона из n различных процессов организации очереди M/M/1 (см. рис. 5a). Предрибосомы рассматриваются как потребители, поступающие в систему (клетку) по пуассоновскому процессу со скоростью λ (поток грузов оценивается в 4000 субъединиц/мин). Каждый NPC играет роль сервера с экспоненциальным временем обслуживания и средним временем пребывания d . Нет ограничений на размер очереди перед каждым сервером. Предполагая равномерную маршрутизацию клиентов между серверами, мы знаем (например, см. ссылку ³² ), что коэффициент заполнения каждой очереди равен ψ = λd / n и что равновесное распределение числа N заявок в данной очереди равно P
3 (
3 = k ) = ψ ^k (1 − ψ ). Мы выбрали значение d, которое дало нам измеренный коэффициент занятости NPC 5,4%. Изменения значений n и d дали линии уровня, изображенные на рис. 5в.
Сводка отчета
Дополнительную информацию о планах эксперимента можно найти в Сводке отчета об исследованиях в природе, связанной с этой статьей.
Доступность данных
Данные, подтверждающие результаты этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу. Исходные данные, лежащие в основе рис. 2 и 4, таблица 2 и дополнительная таблица 1 представлены в виде файла исходных данных.
Ссылки
Oeffinger, M. & Zenklusen, D. В поры и сквозь поры: история кинетики экспорта мРНК. Биохим. Биофиз. Acta 1819 , 494–506 (2012).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Слоан, К. Э., Глейз, П.-Э. и Бонсак, М. Т. Ядерно-цитоплазматический транспорт РНК и РНК-белковых комплексов. Дж. Мол. биол. 428 , 2040–2059 (2016).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Нокенхауэр, К. Э. и Шварц, Т. У. Комплекс ядерных пор как гибкие и динамичные ворота. Cell 164 , 1162–1171 (2016).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Frey, S., Richter, R. P. & Görlich, D. Богатые FG повторы белков ядерных пор образуют трехмерную сетку со свойствами гидрогеля. Наука 314 , 815–817 (2006).
Артикул
КАС
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
Раут, М.П., Эйчисон, Дж.Д., Маньяско, М.О. и Чайт, Б.Т. Виртуальное стробирование и перенос ядер: картина дыры. Trends Cell Biol. 13 , 622–628 (2003).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Ян, К., Раут, М.П. и Эйки, К.В. Трехмерная архитектура комплекса изолированных ядерных пор дрожжей: функциональные и эволюционные последствия. Мол. Cell 1 , 223–234 (1998).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Kim, S.J. et al. Интегративная структура и функциональная анатомия комплекса ядерных пор. Природа 555 , 475–482 (2018).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
млн лет, J. et al. Трехмерное картирование с высоким разрешением экспорта мРНК через ядерную пору. Нац. коммун. 4 , 2414 (2013).
Артикул
пабмед
Google Scholar
Yamada, J. et al. Бимодальное распределение двух различных категорий внутренне неупорядоченных структур с отдельными функциями в нуклеопоринах FG. мол. Клетка. протеом. 9 , 2205–2224 (2010).
Артикул
КАС
Google Scholar
«>
Stevens, B.J. & Swift, H. Транспорт РНК из ядра в цитоплазму в слюнных железах Chironomus. J. Cell Biol. 31 , 55–77 (1966).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Мехлин, Х., Скоглунд, У. и Данехольт, Б. Транспорт кольцевых гранул Бальбиани через ядерные поры у Chironomus tentans. Экспл. Сотовый рез. 193 , 72–77 (1991).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Batisse, J., Batisse, C., Budd, A., Böttcher, B. & Hurt, E. Очистка ядерного поли(A)-связывающего белка Nab2 выявляет связь с транскриптомом дрожжей и ядром рибонуклеопротеина-мессенджера состав. Дж. Биол. хим. 284 , 34911–34917 (2009 г.).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
«>
Мюссер, С. М. и Грюнвальд, Д. Расшифровка структуры и функции ядерных пор с использованием подходов флуоресценции одиночных молекул. Дж. Мол. биол. 428 , 2091–2119 (2016).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Kubitscheck, U. & Siebrasse, J.-P. Кинетика транспорта через комплекс ядерных пор. Семин. Сотовый Дев. биол. 68 , 18–26 (2017).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Штудер Д., Хамбель Б. М. и Шике М. Электронная микроскопия образцов, замороженных под высоким давлением: преодоление разрыва между клеточной ультраструктурой и атомарным разрешением. Гистохим. Клеточная биол. 130 , 877–889 (2008).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
«>
Хаксли, Х. Э. и Зубай, Г. Предпочтительное окрашивание структур, содержащих нуклеиновые кислоты, для электронной микроскопии. J. Биофиз. Биохим. Цитол. 11 , 273–296 (1961).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Эллис, Э. А. Сетки после окрашивания для просвечивающей электронной микроскопии: обычные и альтернативные протоколы. Методы Мол. биол. 369 , 97–106 (2007).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Невилл М. и Росбаш М. Путь экспорта NES-Crm1p не является основным путем экспорта мРНК у Saccharomyces cerevisiae . EMBO J. 18 , 3746–3756 (1999).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Мой, Т. И. и Сильвер, П. А. Требования к ядерному экспорту малой рибосомной субъединицы. J. Cell Sci. 115 , 2985–2995 (2002 г.).
КАС
пабмед
Google Scholar
Léger-Silvestre, I. et al. Рибосомный белок Rps15p необходим для выхода из ядра предшественников 40S субъединиц у дрожжей. EMBO J. 23 , 2336–2347 (2004).
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Ho, J.H., Kallstrom, G. & Johnson, A.W. Nmd3p представляет собой Crm1p-зависимый адапторный белок для ядерного экспорта большой рибосомной субъединицы. J. Cell Biol. 151 , 1057–1066 (2000).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Ho, J. H. & Johnson, A. W. NMD3 кодирует важный цитоплазматический белок, необходимый для стабильных 60S рибосомных субъединиц в Saccharomyces cerevisiae . мол. Клетка. биол. 19 , 2389–2399 (1999).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Каррон, К. и др. Постмитотическая динамика предядрышковых телец обусловлена процессингом пре-рРНК. J. Cell Sci. 125 , 4532–4542 (2012).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Нонет, М., Скейф, К., Секстон, Дж. и Янг, Р. Условный мутант эукариотической РНК-полимеразы, который быстро прекращает синтез мРНК. мол. Клетка. биол. 7 , 1602–1611 (1987).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Moorefield, B., Greene, E.A. & Reeder, R.H. Фактор транскрипции РНК-полимеразы I Rrn3 функционально консервативен у дрожжей и человека. Проц. Натл акад. науч. США 97 , 4724–4729 (2000).
Артикул
КАС
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
ПабМед Центральный
Google Scholar
Cadwell, C., Yoon, H.J., Zebarjadian, Y. & Carbon, J. Ядрышковый белок дрожжей Cbf5p участвует в биосинтезе рРНК и генетически взаимодействует с фактором транскрипции РНК-полимеразы I RRN3. мол. Клетка. биол. 17 , 6175–6183 (1997).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Merl, J. et al. Анализ факторов-модулей биогенеза рибосом в клетках дрожжей, обедненных прерибосомами. Рез. нуклеиновых кислот. 38 , 3068–3080 (2010).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Oakes, M.L. et al. Роль гистондеацетилазы Rpd3 в регуляции транскрипции гена рРНК и структуры ядрышка у дрожжей. Мол. Клетка. биол. 26 , 3889–3901 (2006).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Фисерова, Дж., Ричардс, С.А., Венте, С.Р. и Голдберг, М.В. Облегченный транспорт и диффузия осуществляются различными пространственными путями через комплекс ядерных пор. J. Cell Sci. 123 , 2773–2780 (2010).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Киселева Е. и др. Комплексы ядерных пор дрожжей имеют цитоплазматическое кольцо и внутренние филаменты. J. Структура. биол. 145 , 272–288 (2004).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Smith, C. et al. Визуализация одиночных частиц in vivo экспорта ядерной мРНК у почкующихся дрожжей демонстрирует существенную роль Mex67p. J. Cell Biol. 211 , 1121–1130 (2015).
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Гросс Д., Шорти Дж. Ф., Томпсон Дж. М. и Харрис К. М. Сети, ряды и циклические очереди. В Fundamentals of Queuing Theory 179–218 (John Wiley & Sons, Inc., Хобокен, Нью-Джерси, 2008).
Уорнер, Дж. Р. Экономика биосинтеза рибосом в дрожжах. Тенденции биохим. науч. 24 , 437–440 (1999 г.)).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Winey, M., Yarar, D., Giddings, T.H. & Mastronarde, D.N. Количество комплексов ядерных пор и их распределение в течение Saccharomyces cerevisiae клеточного цикла путем трехмерной реконструкции на основе электронных микрофотографий ядерных оболочек. мол. биол. Ячейка 8 , 2119–2132 (1997).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Калверт, М.Е.К., Ланниган, Дж.А. и Пембертон, Л.Ф. Оптимизация анализа клеточного цикла дрожжей и морфологическая характеристика с помощью мультиспектральной проточной цитометрии. Цитом. Часть J. Междунар. соц. Анальный. Цитол. 73 , 825–833 (2008).
Артикул
Google Scholar
Меткар, М. и др. Принципы организации более высокого порядка претрансляционных мРНП. мол. Сотовый 72 , 715–726.e3 (2018).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Мор, А. и др. Динамика ядерно-цитоплазматического транспорта и экспорта одиночных мРНП через ядерную пору в живых клетках. Нац. Клеточная биол. 12 , 543–552 (2010).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Leidig, C. et al. Биогенез 60S рибосомы требует вращения частицы рибонуклеопротеина 5S. Нац. коммун. 5 , 3491 (2014).
Артикул
пабмед
Google Scholar
Амейсмайер М., Ченг Дж., Бернингхаузен О. и Бекманн Р. Визуализация поздних состояний созревания 40S рибосомной субъединицы человека. Природа 558 , 249–253 (2018).
Артикул
КАС
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
Гали В. и др. Ядерное удержание несплайсированных мРНК у дрожжей опосредуется перинуклеарным Mlp1. Cell 116 , 63–73 (2004).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Саруфим М. -А. и другие. Ядерная корзина обеспечивает околоядерное сканирование мРНК у почкующихся дрожжей. J. Cell Biol. 211 , 1131–1140 (2015).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Бенишу, О. и Вуатюрье, Р. Проблема узкого времени выхода: время, необходимое для того, чтобы частица покинула ограничивающую область через маленькое окно. Физ. Преподобный Летт. 100 , 168105 (2008 г.).
Артикул
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
Gleizes, P. E. et al. Ультраструктурная локализация рРНК показывает дефектный ядерный экспорт прерибосом у мутантов комплекса Nup82p. J. Cell Biol. 155 , 923–936 (2001).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
«>
Hurt, E. et al. Новый анализ in vivo выявил ингибирование рибосомного ядерного экспорта у мутантов ran-цикла и нуклеопорина. J. Cell Biol. 144 , 389–401 (1999).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Bailer, S. M., Balduf, C. & Hurt, E. Карбоксиконцевой домен Nsp1p организован в функционально различные спирально-спиральные области, необходимые для сборки субкомплексов нуклеопоринов и ядерно-цитоплазматического транспорта. Мол. Клетка. биол. 21 , 7944–7955 (2001).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Фэй, Н. и Панте, Н. Попадание в ядро ДНК-вирусов. Фронт. микробиол. 6 , 467 (2015).
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
«>
Panté, N. & Aebi, U. Последовательное связывание импортных лигандов с отдельными участками нуклеопор во время их ядерного импорта. Наука 273 , 1729–1732 (1996).
Артикул
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
Резерфорд, С. А., Голдберг, М. В. и Аллен, Т. Д. Трехмерная визуализация пути импорта белка: роль субструктур комплекса ядерных пор. Экспл. Сотовый рез. 232 , 146–160 (1997).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Гайк, М. и др. Структурная основа для сборки и функционирования комплекса Nup82 в каркасе ядерной поры. J. Cell Biol. 208 , 283–297 (2015).
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Fernandez-Martinez, J. et al. Структура и функция платформы экспорта мРНК цитоплазматического комплекса ядерной поры. Cell 167 , 1215–1228.e25 (2016).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Adams, R.L., Terry, L.J. & Wente, S.R. FG-домены нуклеопорина облегчают ремоделирование мРНП на цитоплазматической поверхности комплекса ядерных пор. Генетика 197 , 1213–1224 (2014).
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Порт, С.А. и др. Структурная и функциональная характеристика взаимодействий CRM1-Nup214 выявляет множественные сайты связывания FG, участвующие в ядерном экспорте. Cell Rep. 13 , 690–702 (2015).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Tan, P. S. et al. Два дифференциальных механизма связывания ФГ-нуклеопоринов и ядерных транспортных рецепторов. Cell Rep. 22 , 3660–3671 (2018).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Келенбах, Р. Х., Дикманнс, А., Келенбах, А., Гуан, Т. и Гераче, Л. Роль RanBP1 в высвобождении CRM1 из комплекса ядерных пор на заключительном этапе ядерного экспорта. J. Cell Biol. 145 , 645–657 (1999).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Фисерова, Дж., Спинк, М., Ричардс, С.А., Саунтер, К. и Голдберг, М.В. Вход в комплекс ядерной поры контролируется цитоплазматической зоной исключения, содержащей динамические домены нуклеопорина с повторами GLFG. J. Cell Sci. 127 , 124–136 (2014).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Зибрас, Дж. П., Камински, Т. и Кубичек, У. Ядерный экспорт отдельных нативных молекул мРНК, наблюдаемый с помощью световой флуоресцентной микроскопии. Проц. Натл акад. науч. США 109 , 9426–9431 (2012 г.).
Артикул
КАС
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
ПабМед Центральный
Google Scholar
Лоу А. Р. и др. Механизм селективности ядерно-порового комплекса характеризуется отслеживанием одиночного груза. Природа 467 , 600–603 (2010).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
Nogi, Y., Yano, R. & Nomura, M. Синтез больших рРНК с помощью РНК-полимеразы II у мутантов Saccharomyces cerevisiae , дефектных по РНК-полимеразе I. Proc. Натл акад. науч. США 88 , 3962–3966 (1991).
Артикул
КАС
ОБЪЯВЛЕНИЯ
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
«>
Кобаяши, Т., Номура, М. и Хориучи, Т. Идентификация цис-элементов ДНК, необходимых для расширения рибосомных повторов ДНК в Saccharomyces cerevisiae . мол. Клетка. биол. 21 , 136–147 (2001).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Яно, Р. и Номура, М. Супрессорный анализ чувствительных к температуре мутаций самой большой субъединицы РНК-полимеразы I в Saccharomyces cerevisiae : ген-супрессор кодирует вторую по величине субъединицу РНК-полимеразы I. Mol. Клетка. биол. 11 , 754–764 (1991).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Кремер, Дж. Р., Мастронард, Д. Н. и Макинтош, Дж. Р. Компьютерная визуализация данных трехмерного изображения с использованием IMOD. J. Структура. биол. 116 , 71–76 (1996).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Koster, A.J. et al. Перспективы молекулярной и клеточной электронной томографии. J. Структура. биол. 120 , 276–308 (1997).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Бен-Шем А., Дженнер Л., Юсупова Г. и Юсупов М. Кристаллическая структура эукариотической рибосомы. Наука 330 , 1203–1209 (2010).
Артикул
КАС
пабмед
ОБЪЯВЛЕНИЯ
Google Scholar
Pettersen, E. F. et al. UCSF Chimera — система визуализации для поисковых исследований и анализа. Дж. Вычисл. хим. 25 , 1605–1612 (2004).
Артикул
КАС
пабмед
Google Scholar
Ларбуру, Н. и др. Структура пре-40S частицы человека указывает на роль RACK1 на последних этапах процессинга 18S рРНК. Рез. нуклеиновых кислот. 44 , 8465–8478 (2016).
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google Scholar
Ссылки на скачивание
Благодарности
Авторы выражают признательность Флорану Ле Моэлю, Арно Гарсиа и Авроре Пеллетье, которые выполнили большую часть томографических исследований и анализов во время стажировок в качестве студентов бакалавриата. У нас были поучительные беседы с Николя Дестенвиллем и Маноэлем Мангуи, нашими коллегами из Лаборатории теоретической физики (LPT) Университета Поля Сабатье. Мы также благодарны Стефани Балор за техническую консультацию по электронной микроскопии и Марлен Фобладье за техническую помощь. Электронную микроскопию выполняли на установке Multiscale Electron Imaging (METi) Центра интегративной биологии в Тулузе. Эта работа финансировалась Тулузским университетом имени Поля Сабатье, Национальным центром научных исследований, Университетским институтом Франции (PEG) и Национальным агентством исследований (грант № ANR-16-CE11-0029). -01 в ПЭГ).
Author information
Authors and Affiliations
LBME, Centre de Biologie Intégrative, Université de Toulouse, CNRS, UPS, 31062, Toulouse, France
Franck Delavoie, Dana Rinaldi & Pierre-Emmanuel Gleizes
METi , Центр интегративной биологии, Университет Тулузы, CNRS, UPS, 31062, Тулуза, Франция
Ванесса Солдан и Пьер-Эммануэль Глез
Математический институт Тулузы, UMR 5219, Université de Toulouse, CNRS, INSA, 31077, Toulouse, France
Jean-Yves Dauxois
Авторы
Franck Delavoie
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Vanessa Soldan
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Dana Rinaldi
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Jean-Yves Dauxois
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Pierre-Emmanuel Gleizes
Просмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Contributions
P. E.G. придумали и курировали проект; Ф.Д., В.С., Д.Р. и ПЭГ. провел эксперименты; Ф.Д. выполненный анализ изображения; J.Y.D. выполнено вероятностное моделирование; Ф.Д. и ПЭГ проанализировал данные и написал рукопись.
Автор, ответственный за переписку
Переписка с
Пьер-Эммануэль Глез.
Заявление об этике
Конкурирующие интересы
Авторы не заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Дополнительная информация
Информация о рецензировании журнала: Nature Communications благодарит анонимных рецензентов за их вклад в рецензирование этой работы.
Примечание издателя: Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и институциональной принадлежности.
Дополнительная информация
Дополнительная информация
Сводка отчетности
исходные данные
Права и разрешения
Open Access. совместное использование, адаптация, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате при условии, что вы укажете первоначальных авторов и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной строке материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons статьи, а ваше предполагаемое использование не разрешено законом или выходит за рамки разрешенного использования, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.
Перепечатки и разрешения
Об этой статье
С прицелом на Россию США наращивают ядерный потенциал
Идрис Али
5 минут чтения
Государства расширят свой ядерный потенциал, говорится в опубликованном в пятницу политическом документе, что, по мнению некоторых критиков, может увеличить риск просчета между двумя странами.
Это последний признак ужесточения решимости администрации президента Дональда Трампа противостоять вызовам со стороны России, в то же время он настаивает на улучшении отношений с Москвой, чтобы обуздать ядерную Северную Корею.
Внимание к России соответствует тому, что Пентагон смещает приоритеты с борьбы с исламистскими боевиками на «соперничество великих держав» с Москвой и Пекином.
«Наша стратегия обеспечит понимание Россией того, что любое применение ядерного оружия, пусть и ограниченное, неприемлемо», — говорится в документе, известном как «Обзор ядерной политики».
Основанием для наращивания нового ядерного потенциала, по словам официальных лиц США, является то, что Россия в настоящее время считает ядерный потенциал и потенциал Соединенных Штатов неадекватными.
Министерство иностранных дел России заявило в субботу, что очень разочаровано содержанием документа, который, по его словам, носит конфронтационный характер и имеет антироссийскую направленность.
«Нам, конечно, придется учесть подход, принятый сейчас в Вашингтоне, и принять необходимые меры для обеспечения собственной безопасности», — сказали в министерстве.
Связанное покрытие
Он опроверг обвинения против России, сделанные в документе США.
В министерстве добавили, что Россия готова конструктивно работать с американцами.
Расширяя собственный ядерный потенциал малой мощности, Соединенные Штаты будут удерживать Россию от применения ядерного оружия, утверждают официальные лица США.
Ядерное оружие малой мощности, хотя и разрушительное, имеет мощность менее 20 килотонн. Примерно такой же взрывной силой обладала атомная бомба, сброшенная на Хиросиму.
Аргументом в пользу этого оружия является то, что более крупные ядерные бомбы настолько катастрофичны, что они никогда не будут использованы и не будут эффективным средством сдерживания. Обладая меньшей мощностью и разрушениями, потенциально с большей вероятностью будет использоваться вариант с малой мощностью, который послужит эффективным средством сдерживания.
В документе Пентагона, который в значительной степени соответствует предыдущему обзору в 2010 году, говорится, что Соединенные Штаты модифицируют небольшое количество боеголовок баллистических ракет подводных лодок с вариантами малой мощности.
Группа технического обслуживания ракет ВВС США снимает верхнюю часть межконтинентальной баллистической ракеты с ядерной боеголовкой на недатированной фотографии ВВС США на базе ВВС Мальмстрем, штат Монтана. Обзоры ядерного арсенала США показывают, что для обеспечения безопасности и эффективности сил необходимы значительные изменения, говорится в отчете министерства обороны от 14 ноября 2014 года.0009
В долгосрочной перспективе вооруженные силы США также разработают новую крылатую ракету морского базирования с ядерным вооружением. По словам официальных лиц, ракета может иметь менее мощный вариант, но решение еще не принято, и на ее разработку уйдет до десяти лет.
Грег Уивер, заместитель директора по стратегическим возможностям Пентагона, заявил, что Соединенные Штаты будут готовы ограничить разработку ракеты, если Россия «устранит дисбаланс в нестратегических ядерных силах».
Уивер сказал, что самой сложной задачей для тех, кто работал над обзором, была попытка устранить разрыв между российским и американским нестратегическим ядерным оружием.
По данным Пентагона, в России имеется 2000 единиц нестратегического ядерного оружия. У США есть несколько сотен действующих маломощных вооружений, развернутых в Европе.
Государственный департамент США заявил, что проинформировал российских и китайских официальных лиц об обзоре.
Официальные лица США утверждают, что с момента последней ядерной проверки Россия расширила и модернизировала свое нестратегическое ядерное оружие, аннексировала Крым в 2014 году и развернула крылатую ракету наземного базирования, которая нарушает 1987 Договор о ликвидации ракет средней и меньшей дальности (ДРСМД). Договор запрещает испытания и развертывание ракет с дальностью от 500 до 5500 км (от 310 до 3417 миль). В докладе также впервые публично говорится, что Россия разрабатывает гиперзвуковую подводную торпеду с ядерной силовой установкой.
«США не участвуют в гонке вооружений, мы здесь реагируем на российскую инициативу», — сказал Уивер.
Некоторые эксперты поставили под сомнение расширение.
Джон Вольфсталь, бывший главный советник президента Барака Обамы по контролю над вооружениями, сказал, что существует вероятность того, что это может привести к просчету.
«Если мы поместим ядерное оружие на крылатые ракеты и запустим обычные крылатые ракеты, откуда Россия узнает, что они обычные?» он сказал.
Обзор призывал к сохранению бомбы B-83, крупнейшего ядерного оружия в арсенале США, до тех пор, пока не будет найдена замена, отменив планы по выводу из эксплуатации i
В документе утверждается, что, разрабатывая ядерные ответные меры США, он поднимает порог России за использование оружия, а не снижение порога США.
Кингстон Рейф, директор по исследованиям в области разоружения в правозащитной группе Ассоциации по контролю над вооружениями, сказал, что документ может способствовать новому виду гонки вооружений.

Пропуск в зону ато продлить: Как продлить пропуск в зону АТО?

Документи для отримання перепустки в зону АТО Бухгалтерський сервіс «Iнтерактивна бухгалтерія»

Продление пропуска с помощью третьих лиц

Продление в интернете

Удаление пропуска

Источники

Оформление электронного пропуска в зону АТО.

Как получить пропуск в зону АТО самостоятельно

Какие услуги мы предоставляем

Помимо помощи с оформлением разрешения на въезд/выезд на/с оккупированной территории:

Продление электронного пропуска в зону АТО

Продление пропуска в зону АТО

Продление в интернете

Продление пропуска с помощью третьих лиц

Удаление пропуска

Ошибки

Технологии и Наука

Новое о высоких технологиях и достижениях науки, информационных технологиях (IT), инновациях и изобретениях, событиях в природе, интересных фактах и явлениях

Срок прошел — переоформляем пропуск в АТО

Как продлить пропуск в зоне АТО

53 thoughts on “ Срок прошел — переоформляем пропуск в АТО ”

АТО закончилась: как это повлияет на жизнь Донбасса

Кто будет руководить

Территории вместо АТО

Полномочия силовиков

Как ездить на Донбасс

Пограничный пункт Троебортное на границе с Россией. Онлайн очереди в Троебортном

Пропускной режим в зоне АТО – последние новости LB.ua

Транспорт молекул между ядром и цитозолем — Молекулярная биология клетки

Рисунок 12-9

Комплексы ядерных пор перфорируют ядерную оболочку

Рисунок 12-10

Рисунок 12-11

Сигналы ядерной локализации направляют ядерные белки в ядро ​​

Рисунок 12-12

Рисунок 12-13

Рецепторы импорта ядер связывают сигналы ядерной локализации и нуклеопорины

Рисунок 12-14

Ядерный экспорт работает так же, как ядерный импорт, но в обратном порядке

ГТФаза Ran обеспечивает направленный транспорт через комплексы ядерных пор

Рисунок 12-15

Рисунок 12-16

Рисунок 12-17

Транспорт между ядром и цитозолем можно регулировать, контролируя доступ к транспортному механизму

Рисунок 12-18

Рисунок 12-19

Ядерная оболочка разбирается во время митоза

Рисунок 12-20

Рисунок 12-21

Резюме

Взрывная волна

Эпицентр

Эффекты взрыва

Эффекты теплового излучения

Прямое воздействие ядерного излучения

Fallout

Радиационные чрезвычайные ситуации | Ready.gov

КОНВЕНЦИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ОБЪЕДИНЕННЫХ НАЦИЙ ПО МОРСКОМУ ПРАВУ

Путь прерибосом через комплекс ядерных пор, выявленный с помощью электронной томографии

Введение

Результаты

Электронная томография выявляет частицы РНП в НПК

Частицы РНП, наблюдаемые в НПК, в основном представляют собой пре-рибосомы

Предрибосомное распределение показывает путь через NPC

Центральный переносчик образует барьер проницаемости

Оценка времени пребывания пре-рибосом в NPC

Обсуждение

Methods

Strains

Подготовка образца

Электронная томография

Анализ изображений

Морфологическое сравнение частиц РНП, обнаруженных в НПК

Усреднение субтомограмм

Стыковка дрожжей NPC

Статистический анализ

Модель очереди Джексона

3 (

Сводка отчета

Доступность данных

Сигналы ядерной локализации направляют ядерные белки в ядро