Онлайн очередь привалки: Пункт пропуска Привалка очереди, камеры и подробная информация

Содержание

Пограничный пункт Привалка на границе с Литвой. Онлайн очереди в Привалке

Проголосовали 95 раз

595 голосов

Очереди на границе с Литвой на КПП Привалка в режиме онлайн

Камера обновляется примерно каждые 3–5 минут.
Обновите страницу в браузере, либо нажмите сюда.

Встречный пункт на территории Литвы — Райгардас.

КПП Привалка на границе с Литвой давольно часто бывает перегружен автомобилями.

Зная это вы заранее можете посмотреть в режиме реального времени, какое количество машин стоит на границе прямо сейчас. А если вы попали в огромную очередь, то можете познакомиться и пообщаться с людьми из очереди в комментариях внизу этой страницы.

Посмотреть на карте пропускной пункт Привалка

Адрес: Гродненская область, Гродненский район, деревня Привалка.

Круглосуточный телефон горячей линии: +375 (17) 216-26-12

Режим работы: круглосуточно.

Как добраться

автомобилем:
от Минска выезжаете на трассу М6 Минск–Гродно до Гродно, от Гродно по трассе Р42 до КПП «Привалка».

Координаты GPS:
53.94128, 23.967542

Смотреть все границы с Литвой

Отзывы и комментарии

Павел,
31.10.2020 03:50

Всем привет, откуда начинается очередь грузовых?

Анастасия,
12.07.2018 18:55

Здравствуйте, может кто подскажет как там обстановка на Привалка?

Есть кто на линии из Привалки прямо сейчас? Мы хотим знать, вы видите наши сообщения в чате?

Через привалку ездите? Как там с очередями?

Чтобы добавить комментарий, пройдите авторизацию.

камеры | Таможенные органы Республики Беларусь

Польша
Песчатка (выезд из Республики Беларусь)	Песчатка (Въезд в Республику Беларусь)

Домачево (выезд из Республики Беларусь)	Домачево (въезд в Республику Беларусь)

Варшавский мост (въезд в Республику Беларусь)

Берестовица (выезд из Республики Беларусь)	Берестовица (въезд в Республику Беларусь)

Брузги (выезд из Республики Беларусь)	Брузги (Въезд в Республику Беларусь)

Литва
Котловка (выезд из Республики Беларусь)	Котловка (Въезд в Республику Беларусь)

Каменный Лог (выезд из Республики Беларусь)	Каменный Лог (въезд в Республику Беларусь)

Привалка (выезд из Республики Беларусь)	Привалка (въезд в Республику Беларусь)

Украина
Мокраны (выезд из Республики Беларусь)	Мокраны (въезд в Республику Беларусь)

Новая Гута (выезд из Республики Беларусь)

Латвия
Григоровщина (выезд из Республики Беларусь)	Григоровщина (въезд в Республику Беларусь)

Урбаны (выезд из Республики Беларусь)	Урбаны (въезд в Республику Беларусь)

«Привалка»

TOMIN.BY

ВЕБ-КАМЕРА «ПРИВАЛКА»

Онлайн видео очереди (выезд из Республики Беларусь)

Изображение обновляется каждые 5 минут. При необходимости обновите страницу (F5)

Онлайн видео очереди (въезд в Республику Беларусь)

Пропускная способность пункта пропуска в сутки:

Легковые — 610

Грузовые — 295

Автобусы — 20

Сопредельный пункт пропуска: Райгардас

Режим работы: круглосуточно

Статус: международный (для проезда граждан любой страны и лиц без гражданства)

Характер международного сообщения: грузопассажирский

Пограничный контроль

отделение пограничной службы «Привалка» Гродненской пограничной группы: (+375-152) 60-74-27

телефон оперативного дежурного Гродненской пограничной группы: (+375-152) 75-04-08

круглосуточный телефон «горячей линии» по вопросам пересечения Государственной границы: (+375-17) 21-62-612

круглосуточный телефон доверия службы собственной безопасности: (+375-17) 265-90-08

Таможенный контроль

Республиканский пункт таможенного оформления «Привалка»: (+375-152) 60-74-46

Ветеринарный контроль

Гродненский пограничный контрольный ветеринарный пункт: (+375-152) 60-74-22

Фитосанитарный контроль

ГУ «Главная государственная инспекция по семеноводству, карантину и защите растений по Гродненской области»: (+375-152) 60-74-23

Санитарно-карантинный контроль

ГУ «Гродненский областной центр гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья»: (+375-152) 60-74-30

Транспортный контроль

Республиканский пункт таможенного оформления «Привалка»: (+375-152) 60-74-46

«E-mail доверия» Государственного таможенного комитета: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript.

Телефон доверия Государственного таможенного комитета: (+375 17) 218-92-92, 218-90-00 (круглосуточно)

Телефон доверия Гродненской региональной таможни: (+375 152) 79-81-25

Горячая линия Государственного пограничного комитета: (+375 17) 216-26-12

Пограничный пункт Привалка на границе с Литвой. Онлайн очереди в Привалке

Проголосовали 95 раз

595 голосов

Очереди на границе с Литвой на КПП Привалка в режиме онлайн

Камера обновляется примерно каждые 3–5 минут.
Обновите страницу в браузере, либо нажмите сюда.

Встречный пункт на территории Литвы — Райгардас.

КПП Привалка на границе с Литвой давольно часто бывает перегружен автомобилями.

Посмотреть на карте пропускной пункт Привалка

Адрес: Гродненская область, Гродненский район, деревня Привалка.

Круглосуточный телефон горячей линии: +375 (17) 216-26-12

Режим работы: круглосуточно.

Как добраться

Координаты GPS:
53.94128, 23.967542

Смотреть все границы с Литвой

Отзывы и комментарии

Павел,
31.10.2020 03:50

Всем привет, откуда начинается очередь грузовых?

Анастасия,
12.07.2018 18:55

Здравствуйте, может кто подскажет как там обстановка на Привалка?

Есть кто на линии из Привалки прямо сейчас? Мы хотим знать, вы видите наши сообщения в чате?

Через привалку ездите? Как там с очередями?

Чтобы добавить комментарий, пройдите авторизацию.

Электронную очередь хотят запустить по всей границе Беларуси с Литвой

Компания «СНТ-Инвест» бизнесмена Седата Игдеджи готова внедрить электронную очередь в трех пунктах пропуска на границе Беларуси с Литвой. Она обратилась за помощью в Администрацию президента.

Письмо в Администрацию президента

В течение года компания «СНТ-Инвест», запустившая электронную очередь с объектами придорожного сервиса в пункте пропуска «Котловка», готова построить и открыть похожий комплекс в пункте пропуска «Каменный Лог».

Следующим этапом в «СНТ-Инвест» видят строительство зоны ожидания с электронной очередью в пунктах пропуска «Привалка» и «Бенякони». Ранее компания направляла заявления о заключении инвестиционных договоров в адрес Гродненского облисполкома, но документы не были подписаны.

«ООО «СНТ-Инвест» просит Вашей помощи для предоставления данных инвестиционных проектов, так как до настоящего времени Гродненский областной исполнительный комитет инвестиционные договоры с ООО «СНТ-Инвест» не подписал», — говорится в письме директора управляющей компании «ИТ СИ Медиа» Людмилы Свириденко на имя главы Администрации президента Натальи Кочановой.

Что известно об инвесторе

«СНТ-Инвест» — компания бизнесмена Седата Игдеджи. Он родился в Турции, но с 20 лет жил в Германии. Свой капитал заработал на туристическом бизнесе. Женился на белоруске и больше десяти лет живет в нашей стране. Имеет белорусское гражданство. Возглавляет ассоциацию «Турецкий капитал».

За время работы в Беларуси Седат Игдеджи инвестировал в экономику 70 млн долларов. Его компании построили многоэтажные жилые дома в Новополоцке и Пинске, торговые центры в Валерьяново и Колодищах, трехзвездочный отель SUNHOTEL c рестораном и магазином в Островце, детский сад в Боровлянах и другие объекты.

С 2011 года Седат Игдеджи начал развивать в пункте пропуска «Котловка» на границе с Литвой придорожный сервис. Сейчас там работает комплекс, который включает «все необходимые для путешественников и водителей объекты инфраструктуры»:

— автозаправочные станции

— парковку на 250 мест для грузовых и на 50 мест для легковых автомобилей

— автомойку для грузовых автомобилей

— продуктовый магазин

— кафе-бар

— аптеку

— мотель на 20 мест с лобби-баром

— электронную очередь с зоной ожидания

В строительство комплекса вложено 14,2 млн долларов. Такой объем инвестиций, как рассказал Naviny.by Седат Игдеджи, объясняется тем, что рядом с пунктом пропуска «Котловка» был только лес, инфраструктуру пришлось строить с нуля, в том числе подводить все сети — воду, электричество, газ.

Комплекс, который работает круглосуточно и без выходных, обслуживает порядка 40 человек.

Контакты:

Гродненская область, Островецкий район, Р-45, 222-й километр

+375 29 115 80 80

+375 29 323 66 83

+375 44 710 80 80

[email protected]

Как работает электронная очередь

Электронная очередь в пункте пропуска «Котловка» работает с ноября 2017 года. Она обязательна для всех водителей. Алгоритм действий выглядит следующим образом:

Пройти процедуру бронирования на сайте belarusborder.by или у оператора АЗС «Лукойл» на границе. Место в очереди на границе можно забронировать за 90 суток, но не позднее трех часов до желаемого времени выезда. Бронируется интервал времени длиной в один час. Бронь можно перенести три раза.
Оплатить услугу. Стоимость составляет одну базовую величину — 25,5 рубля. При оплате брони можно бесплатно пользоваться парковкой, туалетом и душем.
Приехать к въезду в зону ожидания перед пунктом пропуска «Котловка» до начала забронированного времени.
Зарегистрироваться и после открытия шлагбаума въехать по определенному каналу в зону ожидания на отведенное парковочное место. Движение в зоне ожидания контролируют регулировщики.
Дождаться появления регистрационного номера автомобиля на электронном табло.
Выехать из зоны ожидания в забронированное время и проследовать к пункту пропуска для прохождения пограничного и таможенного контроля.

Проходить границу можно и без бронирования. В таком случае система автоматически занесет в живую очередь.

Как рассказали в «СНТ-Инвест», бронирование очереди востребовано при прохождении границы. Этой услугой пользуются две трети водителей. Внедрение системы позволило значительно сократить очереди на границе. Если раньше очередь порой растягивалась на восемь километров, то сейчас такого нет.

Помимо этого, отметили в компании, внедрение электронной очереди позволило ускорить прохождение пограничного и таможенного контроля в «Котловке», упростило работу таможенников и пограничников, а также обеспечило безопасность движения.

«СНТ-Инвест» тесно сотрудничает с Государственным пограничным комитетом и государственным оператором «Белтаможсервис».

14 млн долларов на три перехода

Если в дополнение к «Котловке» зоны ожидания с электронной очередью появятся и в «Каменном логе», «Привалке» и «Беняконях», то это позволит создать единую систему на границе Беларуси с Литвой, уверены в «СНТ-Инвест».

«Реализация новых инвестиционных проектов позволит улучшить приграничную инфраструктуру, обеспечить комфортное пересечение гражданами границы Беларуси в пунктах пропуска, обустроить территорию, создать новые рабочие места для населения прилегающих районов», — говорится в письме в Администрацию президента.

В создание зоны ожидания в трех пунктах пропуска инвестор готов вложить порядка 14 млн долларов собственных средств без привлечения кредитов.

РУП «Белтаможсервис»

Код ПТО	Наименование	Адрес	Телефон	Актуальность данных
Размер очереди на РПТО
*Брестская таможня*
09103	ПТО «Козловичи»	г. Брест, п/п Козловичи		2021-03-12 00:26:00
09116	РПТО «Мокраны»	Брестская обл. Малоритский р-н д. Мокраны		2021-03-12 00:26:05
*Витебская таможня*
07208	РПТО «Бигосово-1»	Витебская обл., Верхнедвинский р-н, д. Григоровщина	+375 (2151) 6-11-15, +375 (33) 399-66-78	2021-03-12 00:25:54
07206	РПТО «Урбаны»	Витебская обл., Браславский р-н, д. Урбаны	+375 (2153) 6-16-79	2021-03-12 00:25:48
*Гомельская таможня*
14307	РПТО «Новая Гута»	Гомельская обл. Гомельский р-н д. Новая Гута		2021-03-12 00:25:39
14303	РПТО «Новая Рудня»	Гомельская обл. Ельский р-н д. Новая Рудня		2021-03-12 00:25:33
*Гродненская региональная таможня*
16419	ПТО «Берестовица»	Гродненская обл., Берестовицкий р-н, п. Пограничный		2021-03-12 00:26:28
16417	ПТО «Брузги»	Гродненский р-н, д. Брузги		2021-03-12 00:20:02
16412	ПТО «Привалка»	Гродненский р-н, д. Привалка РПТО «Привалка»		2021-03-12 00:19:55
16407	РПТО «Бенякони»	Гродненская обл., Вороновский р-н, д. Бенякони		2021-03-12 00:26:17
16404	РПТО «Каменный Лог»	Гродненская обл., Ошмянский р-н, д. Муравьевка		2021-03-12 00:26:12
16401	РПТО «Котловка»	Гродненская обл., Островецкий р-н, д. Котловка		2021-03-12 00:25:44

220036, г. Минск,
ул. Лермонтова 27,

e-mail: [email protected]

Пункт пропуска берестовица как доехать. Польша — беларусь пограничный переход берестовица

Газета «Бераставіцкая газета”

Таможенные органы Беларуси отмечают сегодня одну из самых значимых юбилейных дат в своей истории. Ровно четверть века назад, 20 сентября 1991 года, Верховный Совет Республики Беларусь постановлением «О таможенной службе Республики Беларусь» преобразовал Белорусское управление Государственного таможенного комитета СССР в Государственный таможенный комитет Республики Беларусь с подчинением ему таможенных учреждений СССР, расположенных на территории республики. С этого дня таможенная служба Беларуси открыла новую страницу своей истории, и эта дата впоследствии стала отмечаться как День таможенника.

Гродненская таможня во все времена играла важную роль в защите экономических интересов страны. А с созданием суверенного государства Республики Беларусь эта роль стала еще весомее. Тогда, в начале 90-х, значительно увеличился пассажиро- и грузопоток как в западном, так и восточном направлениях. И больше всего пассажиров и грузов перемещалось автомобильным транспортом. Поэтому было принято решение открыть дополнительно к уже существовавшему автодорожному пункту пропуска «Брузги» еще несколько, в том числе и «Берестовица».

Хотя таможенный пост “Берестовица” имеет более давнюю историю, чем «Брузги». Впервые в летописных документах упоминание о нем относится еще к середине XVIII столетия. За годы своего существования деятельность поста претерпевала неоднократно существенные изменения. Более двадцати трех лет назад, 26 марта 1993 года, в составе таможенного поста «Берестовица» открылся международный автомобильный пункт пропуска «Берестовица-Бобровники». Первоначально в пункте пропуска производился совместный контроль и оформление грузов с польскими пограничной и таможенной службами. В сутки здесь оформлялось до 300 транспортных средств.

После реконструкции моста через реку Свислочь в 1995 году порядок оформления транспортных средств был изменен. Теперь грузовые автомобили, следовавшие на территорию Республики Беларусь, оформлялись на территории Польши, а выезжающие в Польшу – на белорусской стороне, что позволило удвоить количество оформляемых транспортных средств. В 1997 году началась реализация масштабного проекта по модернизации и расширению пункта пропуска. В результате реконструкции его общая площадь увеличилась в три раза. Итогом модернизации стало значительное улучшение инфраструктуры пункта таможенного оформления. В августе 2000 года впервые в пункте пропуска было открыто движение легковых автомобилей с пропускной способностью 1400 единиц в сутки. А в декабре 2007 года был сдан в эксплуатацию новый въездной пассажирский комплекс. В результате пропускная способность пункта пропуска возросла до 3800 единиц в сутки, в том числе: 2800 легковых автомобилей, 800 грузовых и 200 автобусов.

Сегодня таможенный пост «Берестовица», — говорит его начальник Александр Таберко, — современный многофункциональный комплекс на границе с хорошо развитой инфраструктурой для оформления грузов и пассажиров, следующих как в страны Таможенного союза, так и во многие европейские страны. Но, как говорят, пределу совершенствования нет. В ближайшее время пункт пропуска ждет еще один этап реконструкции. Уже на следующий год запланировано строительство нового моста через реку Свислочь, что позволит дополнительно увеличить его пропускную способность и создать более комфортные условия для пересечения границы. Этой же цели будет служить и строительство транспортно-логистического центра, который разместится в непосредственной близости от пункта пропуска. С его открытием грузы в адрес белорусских получателей будут следовать для оформления сразу в этот логистический центр, что позволит сократить процесс доставки товара получателю.

Цели и задачи дальнейшего развития таможенных органов, механизмы реализации необходимых мер и критерии оценки достижения результатов определены в Основных направления развития таможенной службы Республики Беларусь на 2016–2020 годы и на прогнозный период до 2025 года. В числе первоочередных мер в документе названы обеспечение безбарьерной среды для бизнеса, увеличение доли деклараций на товары, по которым списание платежей произведено в автоматическом режиме на этапе до выпуска товаров с 5 процентов в 2016 году до 90 процентов к 2020 году, оптимизация движения товарных потоков посредством развития таможенной логистики, содействие развитию транзитного потенциала.

За время существования пункта пропуска на границе изменилась коренным образом не только его инфраструктура. Постоянно совершенствуются и технологии таможенного оформления. Уже много лет для контроля применяется мобильный инспекционно-досмотровый комплекс «Рапискан», который позволяет сканировать до 60 грузовых автомобилей за смену без вскрытия грузового помещения, детально рассмотреть при этом перемещаемые через границу товары, подсчитать их количество, определить, соответствуют ли они указанным в товарно-сопроводительных документах. На следующий год намечено строительство стационарного комплекса, производительность которого будет в несколько раз больше. Кстати, совсем недавно, как уже сообщалось, в пункте пропуска «Берестовица» была задержана большая партия незаявленной в документах французской парфюмерии. В результате таможенного контроля с применением инспекционно-досмотрового комплекса установлено, что в автомобиле помимо заявленного товара перевозилось более 19 тысяч единиц дорогостоящей парфюмерии французского производства.

Сотрудники таможни, как рассказал Александр Таберко, используют теперь и новые программные продукты, которые позволяют более тщательно производить оформление перемещаемых грузов, исполняя в определенной степени функции санитарно-карантинного и транспортного контроля. На сегодняшний день в «красном коридоре» на пассажирской линии применяется предварительное электронное декларирование. Любой гражданин, любое физическое лицо, следуя по территории сопредельного государства, может оформить в электронном виде пассажирскую декларацию, отправить ее на сайт Гродненской региональной таможни и по прибытии в пункт пропуска оформление его личного имущества будет производиться на основании этой электронной декларации.

Но какие бы технологии ни применялись, главной фигурой в пункте пропуска был и остается сотрудник таможни. Именно от профессионализма каждого из них зависит успешная работа этого структурного таможенного подразделения.

В пункте пропуска «Берестовица» сегодня работает много молодых сотрудников, но есть и такие, чей стаж работы в таможне составляет уже более 20 лет. В их числе начальник таможенного поста Александр Таберко, заместители начальника отделов таможенного оформления и контроля Владимир Семенюк, Виталий Дубицкий, Владимир Ковальчук, старшие инспекторы Тамара Езерская, Марина Кожецкая и Николай Менько, инспектор Сергей Бесько. Накануне профессионального праздника в торжественной обстановке всем им вручены удостоверения и знаки «Ветеран таможенной службы Республики Беларусь».

За многолетний добросовестный труд в таможне Почетной грамотой Национального собрания Республики Беларусь награжден заместитель начальника таможенного поста Игорь Степанчук. Заместитель начальника отдела таможенного оформления и контроля №4 Владимир Ковальчук награжден указом Президента Республики Беларусь медалью «За безупречную службу» III степени. А главным инспекторам Валерию Курмелю и Ивану Барташевичу, старшему инспектору Николаю Менько объявлена Благодарность Председателя ГТК Республики Беларусь.

Очереди на границе с Польшей

Пограничный переход Берестовица — Бобровники
находится в Гродненской области, Берестовицком районе, пос. Пограничный. В этом пункте пропуска через государственную границу размещен республиканский пункт таможенного оформления — ПТО «Берестовица» (режим работы круглосуточно). Специализация ПТО «Берестовица» — таможенные операции, связанные с прибытием на таможенную территорию Таможенного союза и убытием с такой территории товаров, перемещаемых в международном автомобильном сообщении.
Пункт пропуска Берестовица — Бобровники расположен с белорусской стороны на пограничном переходе Берестовица — Бобровники недалеко от поселка Пограничный Берестовичского района Гродненской области, является одним из пунктов пропуска Беларуси и имеет международный статус. Пункт пропуска «Берестовица» предназначен для проезда граждан любой страны и лиц без гражданства. Пропускная способность
пункта пропуска «Берестовица» составляет 3800 легковых, 800 грузовых автомобилей и 200 автобусов в сутки.
Протяженность пограничного перехода
Берестовица — Бобровники от шлагбаума пограничного комитета РБ на въезде в пункт пропуска «Берестовица» до шлагбаума на выезде из пункта пропуска «Бобровники» составляет 0,8 км. Пункт пропуска «Берестовица» расположен в 180 км от главной магистрали Республики Беларусь международной трассы М-1 «Брест-Москва».
Контроль одновременно может осуществляться по двум коридорам.
Обслуживаемые направления
: Белосток, Варшава, Берлин: Витебск — Варшава, Гомель — Варшава, Минск — Варшава, Москва — Варшава. Протяженность маршрута Минск — Варшава через пункт пропуска «Берестовица» составляет 540 км. Дополнительное направление — Краков, Вроцлав, Прага, Вена, Братислава: Витебск – Прага, Гомель-Прага, Минск – Прага, Москва – Прага. Протяженность маршрута Минск-Краков через пункт пропуска «Берестовица» составляет 835 км.
Ближайшими пунктами пропуска
является:
1. — 69 км по направлению к белорусско-литовской границе.

Очереди на границе
. Пункт пропуска «Берестовица» является основным пуктом по направлению Белосток из центральных и восточных районов РБ. Поток формируется трассой М-1 «Брест-Москва» и жителями приграничный территорий. Длина очереди до въезда в пункт пропуска «Брест» в дни пиковых нагрузок может составлять до 3 км, а время ожидания до 12 часов. Среднее время ожидания в очереди составляет от 0,5 до 2 часов. Время прохождения пограничного перехода в среднем составляет от 1 до 2 часов. Общее время необходимое для пересечения границы, включая ожидание в очереди, для пограничного перехода Берестовица — Бобровники составляет от 0,5 до 3 часов в обычный день и от 5-14 часов в дни пиковых нагрузок. Очереди в пункте имеют сезонный характер, а также зависят от дня недели, праздничных дней и времени суток. В сезон летних отпусков и накануне больших праздников, а также в обычные дни можно воспользоваться ближайшими пунктами предварительно проверив очереди на границе

Для многих автомобилистов и водителей автобусов, которые часто пересекают польскую границу Берестовица-Бобровник, очень важно иметь информацию о том, сколько там машин и большая ли очередь. Зачастую, когда приезжаешь на пограничный пункт, встречаешься с огромной очередью, хотя вы рассчитывали на меньшее количество людей. Такие досадные ситуации иногда могут нарушить все планы. Поэтому, чтобы такого не возникало, можно воспользоваться веб-камерами, которые стоят на границе.

Обзор с белорусских погранпереходов

Очередь на границе с Польшей со стороны Беларуси, как правило, зависит от времени суток и дня недели, в которые вы собираетесь пересекать границу; реже — от государственных и религиозных праздников как в Польше, так и в Беларуси.

Как правило, в будние дни по дороге в Польшу, как и обратно, практически в любое время суток больших очередей не бывает. К долгому стоянию следует готовиться, если вы планируете пересекать границу вечером пятницы или субботы. Очередь на границе с Польшей (Берестовица — один из таких переходов) начинает скапливаться с вечера пятницы и стабильно держится всю ночь с пятницы на субботу, в обратную сторону — от обеда субботы или воскресенья.

Это самое популярное направление для постоянно ездящих в Польшу подзаработать или закупиться местных жителей.

Похожая ситуация ждёт вас на погранпереходах Брузги (Гродно) и Варшавский мост (Брест). Общий совет для всех кто переживает за очередь на границе с Польшей или Литвой, Латвией, Украиной: воспользуйтесь сервисами Государственного пограничного комитета Республики Беларусь.

На этом же сайте есть еще много полезных сервисов для путешественников. Веб-камеры на переходах, актуальная информация о количестве транспорта на въезд или выезд, архив очередей разных видов транспорта.

Не лишним будет напомнить, что для быстрого прохождения границы полезно вооружиться актуальной информацией о оформления товаров, которые вы ввозите или вывозите. Зная заранее, что вас там ждет, вы сократите саму процедуру оформления на границе и не станете причиной очереди на границе с Польшей. Самую актуальную информацию можно найти на сайте Таможенного комитета Республики Беларусь в разделе «Путешественникам». Подобный информационный сервис есть и в Польше. Если к изучению ожидающей вас очереди на границе подойти с разных сторон, то можно сравнить информацию с белорусских и польских онлайн-сервисов.

В пункте пропуска Козловичи на белорусско-польской границе введут электронные очереди

— Сейчас решается вопрос о создании сервисных зон для тех, кто стоит в очередях. Этот вопрос обсудили совместно с облисполкомами. Председатели облисполкомов уже в курсе, — рассказал «КП» пресс-секретарь Государственного пограничного комитета Беларуси Александр Тищенко. — Первые варианты мы уже прорабатываем в пункте пропуска Козловичи и на литовской границе. Планируем, что в Козловичах будет система электронной очереди. Человек сможет приехать, забронировать себе очередь. И время ожидания очереди провести в сервисных зонах.

— А что будет в этих сервисных зонах?

— Там должна быть возможность безопасного отдыха, стоянки, питания. То есть гостиницы, кафе, охрана и многое другое. Это всеобщая тенденция и обстановка подталкивает к таким решениям.

— То есть опыт создания сервисных зон вы где-то переняли?

— Форма «электронная очередь плюс сервисная зона» есть не везде. Если есть сервисная зона, то нет электронной очереди. Если есть очередь, то нет сервисной зоны. Мы попытались это объединить. Удовольствие это очень дорогое, поэтому будем начинать поэтапно, смотреть, как это работать, совершенствовать и внедрять на других направлениях. Кроме того, в сервисные зоны, скорее всего, будут привлекать инвесторов.

— Сориентируйте по срокам. Когда уже заработает система электронных очередей?

— По срокам не скажу, потому что сейчас над созданием проекта еще работают. Идеальных для нас вариантов электронных очередей мы так и не нашли. Поэтому разрабатываем на отечественной базе.

Беларуси для личных автомобилей

Общее количество на участке границы Беларусь-Польша — шесть, а именно: Брузги (Гродно), Берестовица (Волковыск), Песчатка (Каменец), Козловичи (этот пункт пропуска используется исключительно для грузового транспорта), Варшавский мост (Брест), Домачево (данный пункт пропуска, по официальной информации, был закрыт до 01.10.2016, в связи с ремонтом моста через р. Буг).

Самые популярные места прохождения границы личным автотранспортом — Берестовица, Брузги и Варшавский мост; Песчатка из-за своего местоположения не так популярна, зато там очередь на границе с Польшей скорее исключение, чем правило, в любое время.

Очереди на границе с Польшей на КПП Берестовица в режиме онлайн

02.08.2020 03:21

Камера обновляется примерно каждые 3–5 минут. Обновите страницу в браузере, либо нажмите сюда

Встречный пункт на территории Польши — Бобровники.

КПП Берестовица на границе с Польшей давольно часто бывает перегружен автомобилями.

Кстати, вы можете посмотреть достопримечательности Польши тут.

А также можете добавлять свои интересные места.

Ситуация на погранпереходах Украина-Польша

Немаловажно отметить, что и украинцы, и поляки, живущие в приграничных зонах, активно пересекают границы в выходные как в ту, так и в обратную сторону, поэтому основным советом будет планировать выезд на дни отдыха так, чтобы не пересекаться с основным потоком. Постарайтесь выехать в пятницу пораньше. Приехав к границе в обед пятницы или в будний день, скорее всего, вы сможете избежать долгого стояния в очереди на границе Украина-Польша.

Стоит отметить один важный нюанс, касающийся украинско-польской границы. Множество автомобилей с польскими номерами в очереди — это люди, обязанные выезжать каждые пять дней через границу, потому что просто купили автомобиль в ЕС и не меняли регистрацию. Из практики опытных путешественников: при прохождении паспортного контроля проследите, чтобы вам поставили штамп в паспорт, иногда пограничники просто забывают это сделать. А учитывая, что техническое оснащение украинских погранпереходов оставляет желать лучшего и случаются технические сбои, без отметки вам будет трудно доказать, откуда вы появились в Украине или почему выезжаете, если по их данным вы уже там. Ни в коем случае это не правило, и к работе украинских пограничников сложно придраться, но, к сожалению, такие исключения уже не раз бывали, просто будьте внимательны.

Пункты пропуска на границе Украина-Польша

Есть 5 основных погранпереходов на польско-украинской границе. 4 из них расположены во Львовской области: Смильница, Шегини, Рава-Русская, Краковец; 1 в — Ягодин. Все эти переходы предназначены для легкового и грузового автотранспорта. Самый популярный, особенно после открытия новой трасы на Киев (Варшавка), — Ягодин, находится он рядом с деревним Старовойтово. Ягодин располагается на дороге Е373 (автодорога М07). Это и есть самый короткий путь для тех, кто направляется из Киева до Варшавы или обратно. Пункт пропуска работает более 10 лет и имеет развитую инфраструктуру, тем не менее в очереди можно застрять от 1,5 до 9 часов.

Ваша внимательность и элементарная вежливость помогут не задерживаться в любом пункте пропуска дольше, чем это необходимо.

Добавить закладку

Пограничный переход Берестовица — Бобровники

находится в Гродненской области, Берестовицком районе, пос. Пограничный. В этом пункте пропуска через государственную границу размещен республиканский пункт таможенного оформления — ПТО «Берестовица» (режим работы круглосуточно). Специализация ПТО «Берестовица» — таможенные операции, связанные с прибытием на таможенную территорию Таможенного союза и убытием с такой территории товаров, перемещаемых в международном автомобильном сообщении.

Пункт пропуска Берестовица — Бобровники расположен с белорусской стороны на пограничном переходе Берестовица — Бобровники недалеко от поселка Пограничный Берестовичского района Гродненской области, является одним из пунктов пропуска Беларуси и имеет международный статус. Пункт пропуска «Берестовица» предназначен для проезда граждан любой страны и лиц без гражданства.

Пропускная способность

пункта пропуска «Берестовица» составляет 3800 легковых, 800 грузовых автомобилей и 200 автобусов в сутки. Протяженность пограничного перехода Берестовица — Бобровники от шлагбаума пограничного комитета РБ на въезде в пункт пропуска «Берестовица» до шлагбаума на выезде из пункта пропуска «Бобровники» составляет 0,8 км. Пункт пропуска «Берестовица» расположен в 180 км от главной магистрали Республики Беларусь международной трассы М-1 «Брест-Москва».

Обслуживаемые направления:

Белосток, Варшава, Берлин: Витебск — Варшава, Гомель — Варшава, Минск — Варшава, Москва — Варшава. Протяженность маршрута Минск — Варшава через пункт пропуска «Берестовица» составляет 540 км. Дополнительное направление — Краков, Вроцлав, Прага, Вена, Братислава: Витебск – Прага, Гомель-Прага, Минск – Прага, Москва – Прага. Протяженность маршрута Минск-Краков через пункт пропуска «Берестовица» составляет 835 км.

Ближайшими пунктами пропуска

являются:

Международный пункт пропуска «Брузги» — 69 км по направлению к белорусско-литовской границе.
Международный пункт пропуска «Брест» — 188 км по направлению к белорусско-украинской границе.

Очереди на границе

. Пункт пропуска «Берестовица» является основным пуктом по направлению Белосток из центральных и восточных районов РБ. Поток формируется трассой М-1 «Брест-Москва» и жителями приграничный территорий. Длина очереди до въезда в пункт пропуска «Брест» в дни пиковых нагрузок может составлять до 3 км, а время ожидания до 12 часов. Среднее время ожидания в очереди составляет от 0,5 до 2 часов. Время прохождения пограничного перехода в среднем составляет от 1 до 2 часов. Общее время необходимое для пересечения границы, включая ожидание в очереди, для пограничного перехода Берестовица — Бобровники составляет от 0,5 до 3 часов в обычный день и от 5-14 часов в дни пиковых нагрузок. Очереди в пункте имеют сезонный характер, а также зависят от дня недели, праздничных дней и времени суток. В сезон летних отпусков и накануне больших праздников, а также в обычные дни можно воспользоваться ближайшими пунктами предварительно проверив очереди на границе

Газета «Бераставіцкая газета”

Привалка — Райгардас граница таможня

Пункт пропуска Привалка — Райгардас граница таможня Беларусь — Литва.

Все пункты пропуска через Государственную границу Республики Беларусь
Пограничный переход Привалка — Райгардас находится в Гродненской области, Гродненском районе, д. Приварки. В этом пункте пропуска через государственную границу размещен республиканский пункт таможенного оформления — ПТО «Привалки-1» (режим работы круглосуточно). Специализация ПТО «Привалки-1» — таможенные операции, связанные с прибытием на таможенную территорию Таможенного союза и убытием с такой территории товаров, перемещаемых в международном автомобильном сообщении.

Пункт пропуска Привалка — Райгардас расположен с белорусской стороны на пограничном переходе Привалка — Райгардас недалеко от населенного пункта Привалки Гродненского района Гродненской области, является одним из основных пунктов пропуска Беларуси, и со стороны Литвы пункт пропуска «Райгардас» имеет международный статус. Предназначены для проезда граждан любой страны и лиц без гражданства. Пропускная способность пункта пропуска «Привалка» составляет до 1000 легковых автомобилей, 200 грузовых и 20 автобусов в сутки в обоих направлениях . Пункт пропуска «Райгардас» способен пропускать до 1100 транспортных средств смешанного типа. Протяженность пограничного перехода

Привалка — Райгардас от шлагбаума Пограничного комитета РБ на въезде в пункт пропуска «Бенякони» до шлагбаума на выезде из пункта пропуска «Райгардас» составляет 1 км. Расположен по дороге Р-42 «Гродно — Вильнюс».

Пункт пропуска Привалка — Райгардас предназначен для осуществления следующих видов контроля:

пограничный,
таможенный,
автомобильный,
санитарно-карантинный,
фитосанитарный,
ветеринарный.

Обслуживаемые направления:
Рига, Таллин, Калининград, Клайпеда, Минск, Одесса. Протяженность маршрута через пункт пропуска Привалка — Райгардас составляет Минск — Клайпеда 553км; Таллин — Минск 860 км; Одесса — Рига 1558км.

Ближайшим пунктом пропуска является:

Международный пункт пропуска «Бенякони» — 192 км Р-89.

Очереди на границе. Длина автомобильной очереди до въезда в пункт пропуска «Привалка» и выезда из пункта «Райгардас» в дни пиковых нагрузок может составлять до 7 км, а время ожидания до 20 часов. Среднее время ожидания в очереди на границе с Литвой составляет от 3 до 4 часов. Время прохождения пограничного перехода в среднем составляет 2 — 3 часа. Очереди в пункте имеют сезонный характер, проезд в Беларусь, как и в Литву зависит от дня недели и времени суток. В праздники очередь максимальная На пограничных переходах Беларуси и Литвы проезд может быть затруднён вследствие ремонтных работ дороги. В сезон летних отпусков и накануне больших праздников, а также в обычные дни можно воспользоваться ближайшими пунктами предварительно посмотрев очереди на границе в режиме онлайн.
Все пункты пропуска через Государственную границу Республики Беларусь

Расположение пограничного перехода Привалка — Райгардас на карте:

Просмотреть Пограничный переход Привалка — Райгардас Беларусь — Литва на карте большего размера

Детальная информация о КПП

Погранпереход Берестовица рассчитан как на грузовой транспорт

, так и на пассажирский. Согласно сведениям на середину 2018 года, пропускная способность этой таможни в сутки составляет около 2185 транспортных средств. Статистика говорит, что из них:

1500 легковых автомобилей;
650 грузовиков;
35 пассажиров.

Обратите внимание на то, что пересечение таможни Берестовицы можно только на механических транспортных средства. Это означает, что на велосипеде через этот участок границы вас не пропустят.

Те, кто часто ездят через этот пропускной пункт знают, что иногда на КПП могут быть серьёзные пробки. Особенно большие задержки со стороны въезда в Республику

Расширенные методы: создание и упорядочивание аудио — веб-API

В этом уроке мы рассмотрим создание и модификацию звука, а также время и планирование. Мы собираемся представить загрузку сэмплов, огибающие, фильтры, волновые таблицы и частотную модуляцию. Если вы знакомы с этими терминами и ищете введение в их приложение с помощью API веб-аудио, вы попали в нужное место.

Мы собираемся рассмотреть очень простой пошаговый секвенсор:

На практике это проще сделать с помощью библиотеки — API веб-аудио был построен для использования.Если вы собираетесь приступить к созданию чего-то более сложного, для начала подойдет tone.js. Однако мы хотим продемонстрировать, как построить такую демонстрацию из первых принципов, в качестве обучающего упражнения.

Интерфейс состоит из основных элементов управления, которые позволяют нам воспроизводить / останавливать секвенсор и регулировать BPM (ударов в минуту) для ускорения или замедления «музыки».

Можно воспроизводить четыре разных звука или голоса. У каждого голоса есть четыре кнопки, которые представляют четыре удара в одном музыкальном такте.Когда они включены, будет звучать нота. Когда инструмент играет, он будет перемещаться по этому набору ударов и зацикливать такт.

У каждого голоса также есть локальные элементы управления, которые позволяют вам управлять эффектами или параметрами, характерными для каждой техники, которую мы используем для создания этих голосов. Мы используем следующие методы:

Примечание : Этот инструмент создавался не для того, чтобы хорошо звучать, он был создан для демонстрации кода и представляет собой очень упрощенную версию такого инструмента.Звуки основаны на модеме коммутируемого доступа. Если вы не знаете, как он звучит, вы можете послушать его здесь.

Как вы уже привыкли, каждое приложение Web Audio API начинается со звукового контекста:

 
const AudioContext = window.AudioContext || window.webkitAudioContext;
const audioCtx = новый AudioContext ();

Для того, что мы будем называть «колеблющимся» звуком, первым шумом, который вы слышите, когда вы набираете номер, мы собираемся создать осциллятор для генерации звука.

Осциллятор OscillatorNode поставляется с основными формами сигналов — синусоидальный, квадратный, треугольный или пилообразный. Однако вместо использования стандартных волн, которые идут по умолчанию, мы собираемся создать свои собственные, используя интерфейс PeriodicWave и значения, установленные в волновой таблице. Мы можем использовать метод BaseAudioContext.createPeriodicWave , чтобы использовать эту настраиваемую волну с осциллятором.

Периодическая волна

Прежде всего, создадим нашу периодическую волну.Для этого нам нужно передать действительные и мнимые значения в метод BaseAudioContext.createPeriodicWave () .:

  const wave = audioCtx.createPeriodicWave (wavetable.real, wavetable.imag);

Осциллятор

Теперь мы можем создать узел OscillatorNode и установить его волну на ту, которую мы создали:

  function playSweep (время) {
     const osc = audioCtx.createOscillator ();
     osc.setPeriodicWave (волна);
     осцилл. частота.значение = 440;
     osc.connect (audioCtx.destination);
     osc.start (время);
     осцил. останов (время + 1);
}

Здесь мы передаем в функцию параметр времени, который мы будем использовать позже для планирования развертки.

Управление амплитудой

Это здорово, но было бы неплохо, если бы у нас была огибающая амплитуды? Давайте создадим простой, чтобы мы привыкли к методам, которые нам нужны для создания конверта с Web Audio API.

Допустим, в нашем конверте есть атака и выпуск.Мы можем позволить пользователю управлять ими с помощью входов диапазона в интерфейсе:

   Атака 


 Выпуск

Теперь мы можем создать несколько переменных в JavaScript и изменить их при обновлении входных значений:

  пусть attackTime = 0.2;
const attackControl = document.querySelector ('# атака');
attackControl.addEventListener ('ввод', функция () {
    attackTime = Число (this.value);
}, ложный);

let releaseTime = 0.5;
const releaseControl = document.querySelector ('# release');
releaseControl.addEventListener ('input', function () {
    releaseTime = Число (this.value);
}, ложный);

Последняя функция playSweep ()

Теперь мы можем расширить нашу функцию playSweep () . Нам нужно добавить GainNode и подключить его через наш звуковой график, чтобы фактически применить вариации амплитуды к нашему звуку.Узел усиления имеет одно свойство: , усиление , которое относится к типу AudioParam .

Это действительно полезно — теперь мы можем начать использовать мощь методов параметров звука для значения усиления. Мы можем установить значение в определенное время или изменить его на время с помощью таких методов, как AudioParam.linearRampToValueAtTime .

Для нашей атаки и выпуска мы будем использовать метод linearRampToValueAtTime , как упоминалось выше. Он принимает два параметра — значение, которое вы хотите установить для параметра, на который вы меняете (в данном случае усиление), и когда вы хотите это сделать.В нашем случае , когда управляется нашими входами. Таким образом, в приведенном ниже примере коэффициент усиления увеличивается до 1 с линейной скоростью с течением времени, когда входной диапазон атаки установлен на. Точно так же для нашего релиза усиление устанавливается на 0 с линейной скоростью в течение времени, когда вход релиза был установлен на.

  пусть sweepLength = 2;
function playSweep (time) {
    let osc = audioCtx.createOscillator ();
    osc.setPeriodicWave (волна);
    osc.frequency.value = 440;

    пусть sweepEnv = audioCtx.createGain ();
    sweepEnv.gain.cancelScheduledValues (время);
    sweepEnv.gain.setValueAtTime (0, время);
    
    sweepEnv.gain.linearRampToValueAtTime (1, время + время атаки);
    
    sweepEnv.gain.linearRampToValueAtTime (0, время + sweepLength - ReleaseTime);

    osc.connect (sweepEnv) .connect (audioCtx.destination);
    osc.start (время);
    osc.stop (время + длина развертки);
}

Отлично, теперь у нас есть развертка! Давайте продолжим и посмотрим на этот красивый пульсирующий звук. Мы можем добиться этого с помощью базового генератора, модулированного вторым генератором.

Начальный осциллятор

Мы настроим наш первый осциллятор OscillatorNode таким же образом, как и наш звук развертки, за исключением того, что мы не будем использовать волновую таблицу для установки специальной волны — мы просто будем использовать синусоидальную волну по умолчанию :

  const osc = audioCtx.createOscillator ();
osc.type = 'синус';
osc.frequency.value = 880;

Теперь мы собираемся создать GainNode , так как это значение усиления , которое мы будем генерировать с помощью нашего второго, низкочастотного генератора:

  const amp = audioCtx.createGain ();
amp.gain.setValueAtTime (1, audioCtx.currentTime);

Создание второго низкочастотного генератора

Теперь мы создадим второй — квадратный — волновой (или импульсный) генератор, чтобы изменить усиление нашей первой синусоидальной волны:

  const lfo = audioCtx.createOscillator ();
lfo.type = 'квадрат';
lfo.frequency.value = 30;

Подключение графика

Ключевым моментом здесь является правильное подключение графика, а также запуск обоих осцилляторов:

  lfo.подключить (amp.gain);
osc.connect (amp) .connect (audioCtx.destination);
lfo.start ();
osc.start (время);
osc.stop (время + PulseTime);

Примечание : Нам также не нужно использовать типы волн по умолчанию для любого из этих осцилляторов, которые мы создаем — мы могли бы использовать волновую таблицу и метод периодических волн, как мы делали раньше. Существует множество возможностей с минимальным количеством узлов.

Пользовательские элементы управления Pulse

Для элементов управления пользовательского интерфейса давайте выставим обе частоты наших осцилляторов, позволяя управлять ими через входы диапазона.Один изменит тон, а другой изменит то, как импульс модулирует первую волну:

   Гц 

 LFO

Как и раньше, мы будем изменять параметры при изменении пользователем входных значений диапазона.

  пусть PulseHz = 880;
const hzControl = документ.querySelector ('# hz');
hzControl.addEventListener ('input', function () {
    PulseHz = Число (this.value);
}, ложный);

пусть lfoHz = 30;
const lfoControl = document.querySelector ('# lfo');
lfoControl.addEventListener ('input', function () {
    lfoHz = Число (this.value);
}, ложный);

Последняя функция playPulse ()

Вот вся функция playPulse () :

  пусть PulseTime = 1;
function playPulse (time) {
    let osc = audioCtx.createOscillator ();
    осн.type = 'синус';
    osc.frequency.value = частота импульсов, Гц;

    пусть amp = audioCtx.createGain ();
    amp.gain.value = 1;

    let lfo = audioCtx.createOscillator ();
    lfo.type = 'квадрат';
    lfo.frequency.value = lfoHz;

    lfo.connect (amp.gain);
    osc.connect (amp) .connect (audioCtx.destination);
    lfo.start ();
    osc.start (время);
    osc.stop (время + PulseTime);
}

Теперь нам нужно пошуметь! Все модемы имеют шум. Когда дело доходит до аудиоданных, шум — это просто случайные числа, поэтому его относительно просто создать с помощью кода.

Создание аудиобуфера

Нам нужно создать пустой контейнер, чтобы поместить эти числа в тот, который понимает API веб-аудио. Именно здесь на помощь приходят объекты AudioBuffer . Вы можете получить файл и декодировать его в буфер (мы вернемся к этому позже в руководстве), или вы можете создать пустой буфер и заполнить его своими данными.

По шуму сделаем последнее. Сначала нам нужно вычислить размер нашего буфера, чтобы создать его. Мы можем использовать BaseAudioContext.sampleRate для этого:

  const bufferSize = audioCtx.sampleRate * noiseLength;
const buffer = audioCtx.createBuffer (1, bufferSize, audioCtx.sampleRate);

Теперь мы можем заполнить его случайными числами от -1 до 1:

  пусть данные = buffer.getChannelData (0);


for (let i = 0; i

Примечание : Почему -1 к 1? При выводе звука в файл или динамики нам нужно иметь число, представляющее полную шкалу 0 дБ - числовой предел носителя с фиксированной точкой или ЦАП.В аудио с плавающей запятой 1 - это удобное число, которое можно сопоставить с «полной шкалой» для математических операций с сигналами, поэтому генераторы, генераторы шума и другие источники звука обычно выводят биполярные сигналы в диапазоне от -1 до 1. Браузер фиксирует значения вне этот диапазон.

`Создание источника буфера`

Теперь, когда у нас есть аудиобуфер и он заполнен данными, нам нужен узел для добавления к нашему графу, который может использовать буфер в качестве источника. Мы создадим для этого AudioBufferSourceNode и передадим созданные нами данные:

  пусть шум = audioCtx.createBufferSource ();
noise.buffer = буфер;

Если мы подключим это через наш аудиограф и проиграем его -

  noise.connect (audioCtx.destination);
noise.start ();

вы заметите, что он довольно шипящий или металлический. Мы создали белый шум, так и должно быть. Наши значения варьируются от -1 до 1, что означает, что у нас есть пики всех частот, что, в свою очередь, на самом деле довольно драматично и пронзительно. Мы могли бы изменить функцию, чтобы запускать значения от 0.От 5 до -0,5 или примерно так, чтобы снять пики и уменьшить дискомфорт, но что в этом хорошего? Давайте направим шум, который мы создали, через фильтр.

`Добавление биквадратного фильтра к миксу`

Нам нужно что-то в диапазоне розового или коричневого шума. Мы хотим отключить эти высокие частоты и, возможно, некоторые из нижних. Давайте выберем для работы полосовой биквадратный фильтр.

Примечание : API веб-аудио поставляется с двумя типами узлов фильтрации: BiquadFilterNode и IIRFilterNode .По большей части будет достаточно биквадратного фильтра - он бывает разных типов, таких как НЧ, ВЧ и полосовой. Однако, если вы хотите сделать что-то более индивидуальное, фильтр IIR может быть хорошим вариантом - см. Использование фильтров IIR для получения дополнительной информации.

Подключение такое же, как мы видели раньше. Мы создаем BiquadFilterNode , настраиваем свойства, которые нам нужны, и подключаем его через наш график. Различные типы биквадратных фильтров имеют разные свойства - например, установка частоты в полосе пропускания регулирует среднюю частоту, однако на фильтре нижних частот она устанавливает верхнюю частоту.

  let bandpass = audioCtx.createBiquadFilter ();
bandpass.type = 'bandpass';
bandpass.frequency.value = 1000;


noise.connect (bandpass) .connect (audioCtx.destination);

`Шум пользовательские элементы управления`

В пользовательском интерфейсе мы выставим длительность шума и частоту, которую мы хотим разделить, позволяя пользователю настраивать их с помощью входов диапазона и обработчиков событий, как в предыдущих разделах:

   Продолжительность 


 Группа

  пусть noiseDuration = 1;
const durControl = document.querySelector ('# продолжительность');
durControl.addEventListener ('input', function () {
    noiseDuration = Число (this.value);
}, ложный);

пусть bandHz = 1000;
const bandControl = document.querySelector ('# band');
bandControl.addEventListener ('input', function () {
    bandHz = Число (this.value);
}, ложный);

`Последняя функция playNoise ()`

Вот вся функция playNoise () :

  функция playNoise (время) {
    const bufferSize = audioCtx.sampleRate * noiseDuration;
    const buffer = audioCtx.createBuffer (1, bufferSize, audioCtx.sampleRate);
    let data = buffer.getChannelData (0);

    
    for (let i = 0; i

Достаточно просто имитировать звуки набора номера телефона (DTMF), играя пару осцилляторов вместе, используя методы, которые мы уже рассмотрели, однако в этом разделе вместо этого мы загрузим образец файла, чтобы может взглянуть на то, что происходит.

`Загрузка образца`

Мы хотим убедиться, что наш файл загружен и декодирован в буфер перед его использованием, поэтому давайте создадим функцию async , чтобы мы могли это сделать:

  асинхронная функция getFile (audioContext, filepath) {
  const response = ожидание выборки (путь к файлу);
  const arrayBuffer = ждать ответа.arrayBuffer ();
  const audioBuffer = ждать audioContext.decodeAudioData (arrayBuffer);
  return audioBuffer;
}

Затем мы можем использовать оператор await при вызове этой функции, что гарантирует, что мы сможем запустить следующий код только после его завершения.

Давайте создадим еще одну функцию async для настройки примера - мы можем объединить две асинхронные функции в хороший шаблон обещания для выполнения дальнейших действий, когда этот файл загружен и буферизован:

  async function setupSample () {
    const filePath = 'dtmf.mp3 ';
    const sample = ожидание getFile (audioCtx, filePath);
    возврат образца;
}

Примечание : Вы можете легко изменить указанную выше функцию, чтобы взять массив файлов и перебрать их, чтобы загрузить более одного образца. Это было бы очень удобно для более сложных инструментов или игр.

Теперь мы можем использовать setupSample () так:

  setupSample ()
    .then ((образец) => {
        
        
});

Когда семпл готов к воспроизведению, программа настраивает пользовательский интерфейс, чтобы он был готов к работе.

`Воспроизведение сэмпла`

Давайте создадим функцию playSample () аналогично тому, как мы это сделали с другими звуками. На этот раз он создаст AudioBufferSourceNode , поместит в него данные буфера, которые мы извлекли и декодировали, и воспроизведет их:

  function playSample (audioContext, audioBuffer, time) {
    const sampleSource = audioContext.createBufferSource ();
    sampleSource.buffer = audioBuffer;
    sampleSource.connect (audioContext.пункт назначения)
    sampleSource.start (время);
    return sampleSource;
}

Примечание : мы можем вызвать stop () на AudioBufferSourceNode , однако это произойдет автоматически, когда сэмпл завершит воспроизведение.

`Элементы управления пользователя удаленного доступа`

AudioBufferSourceNode имеет свойство playRate . Давайте представим это нашему пользовательскому интерфейсу, чтобы мы могли ускорить и замедлить наш образец. Сделаем это так же, как и раньше:

   Оценить

  пусть воспроизведениеRate = 1;
const rateControl = document.querySelector ('# rate');
rateControl.addEventListener ('input', function () {
    playRate = Number (this.value);
}, ложный);

`Последняя функция playSample ()`

Затем мы добавим строку для обновления свойства playRate в нашу функцию playSample () . Окончательная версия выглядит так:

  function playSample (audioContext, audioBuffer, time) {
    const sampleSource = audioContext.createBufferSource ();
    sampleSource.buffer = audioBuffer;
    sampleSource.playbackRate.value = проигрываниеRate;
    sampleSource.connect (audioContext.destination)
    sampleSource.start (время);
    return sampleSource;
}

Распространенная проблема с цифровыми аудиоприложениями - заставить звуки воспроизводиться во времени, чтобы ритм оставался неизменным, и что-то не выскользнуло из времени.

Мы могли бы запланировать воспроизведение наших голосов в цикле на , однако самая большая проблема с этим - обновление во время воспроизведения, и мы уже внедрили элементы управления пользовательского интерфейса для этого.Также было бы неплохо рассмотреть возможность управления BPM в масштабе всего инструмента. Лучший способ заставить наши голоса играть в такт - это создать систему расписания, при которой мы смотрим вперед, когда ноты будут играть, и помещаем их в очередь. Мы можем запускать их в точное время с помощью свойства currentTime, а также учитывать любые изменения.

Примечание : Это сильно урезанная версия статьи Криса Уилсона «Повесть о двух часах», в которой этот метод рассматривается более подробно.Здесь нет смысла повторять все это, но настоятельно рекомендуется прочитать эту статью и воспользоваться этим методом. Большая часть кода здесь взята из его примера с метрономом, на который он ссылается в статье.

Давайте начнем с настройки нашего BPM (ударов в минуту) по умолчанию, которым также можно будет управлять с помощью, как вы уже догадались, другого входа диапазона.

  пусть темп = 60,0;
const bpmControl = document.querySelector ('# bpm');
bpmControl.addEventListener ('ввод', функция () {
    tempo = Число (this.ценить);
}, ложный);

Затем мы создадим переменные, чтобы определить, как далеко вперед мы хотим заглянуть и как далеко вперед мы хотим запланировать:

  const lookahead = 25.0;
const scheduleAheadTime = 0,1;

Давайте создадим функцию, которая перемещает ноту вперед на одну долю и возвращается к первой, когда достигает четвертой (последней) ноты:

  пусть currentNote = 0;
let nextNoteTime = 0.0;

function nextNote () {
    константа секундPerBeat = 60.0 / темп;

    nextNoteTime + = secondsPerBeat;

    
    currentNote ++;
    if (currentNote === 4) {
            currentNote = 0;
    }
}

Мы хотим создать эталонную очередь для нот, которые должны быть воспроизведены, и функциональность для их воспроизведения с использованием ранее созданных нами функций:

  константа notesInQueue = [];

function scheduleNote (beatNumber, time) {

    
    notesInQueue.push ({примечание: число ударов, время: время});

    if (pads [0] .querySelectorAll ('кнопка') [beatNumber].getAttribute ('aria-checked') === 'true') {
        playSweep (время)
    }
    if (pads [1] .querySelectorAll ('button') [beatNumber] .getAttribute ('aria-checked') === 'true') {
        playPulse (время)
    }
    if (pads [2] .querySelectorAll ('button') [beatNumber] .getAttribute ('aria-checked') === 'true') {
        playNoise (время)
    }
    if (pads [3] .querySelectorAll ('button') [beatNumber] .getAttribute ('aria-checked') === 'true') {
        playSample (audioCtx, dtmf, время);
    }
}

Здесь мы смотрим на текущее время и сравниваем его со временем для следующей ноты; когда два совпадают, он вызовет две предыдущие функции.

Экземпляры объектов AudioContext имеют свойство currentTime , которое позволяет нам получить количество секунд после того, как мы впервые создали контекст. Это то, что мы будем использовать для измерения времени в нашем пошаговом секвенсоре - он чрезвычайно точен, возвращает значение с плавающей запятой с точностью примерно до 15 десятичных знаков.

  планировщик функций () {
    
    while (nextNoteTime

Нам также нужна функция рисования для обновления пользовательского интерфейса, чтобы мы могли видеть, когда ритм прогрессирует.

  пусть lastNoteDrawn = 3;

function draw () {
    пусть drawNote = lastNoteDrawn;
    пусть currentTime = audioCtx.currentTime;

    while (notesInQueue.length && notesInQueue [0] .time

Теперь все, что осталось сделать, это убедиться, что мы загрузили семпл, прежде чем мы сможем играть на инструменте. Мы добавим экран загрузки, который исчезает после получения и декодирования файла, а затем мы можем позволить планировщику начать использовать событие нажатия кнопки воспроизведения.

 
let loadingEl = document.querySelector ('. loading');
const playButton = document.querySelector ('[воспроизведение данных]');
пусть isPlaying = false;
setupSample ()
    .then ((образец) => {
        loadingEl.style.display = 'нет';

        dtmf = образец;

        playButton.addEventListener ('click', function () {
            isPlaying =! isPlaying;

            if (isPlaying) {

                
                if (audioCtx.state === 'приостановлено') {
                    audioCtx.resume ();
                }

                currentNote = 0;
                nextNoteTime = audioCtx.Текущее время;
                планировщик ();
                requestAnimationFrame (рисовать);
                this.dataset.playing = 'правда';

            } еще {

                window.clearTimeout (timerID);
                this.dataset.playing = 'ложь';

            }
        })
    });

Теперь у нас в браузере есть инструмент! Продолжайте играть и экспериментировать - вы можете расширить любой из этих методов, чтобы создать что-то гораздо более сложное.

`Программа практических инструментов для кодирования сращивания последовательностей`

4 Hongbin Lee et al./ Physics Procedure 33 (2012) 3 - 7

Секвенирование

стало основным инструментом для исследования тайны унаследованной информации. На сегодняшний день в результате всех видов экспериментов по секвенированию ДНК генерируется множество из

последовательностей генома.

Последовательности генов эукариот состоят из ряда кодирующих белки последовательностей (экзонов) и

некодирующих последовательностей (интронов). Экзон содержит информацию для синтеза белка, охватывает большинство

вариаций, связанных с индивидуальным фенотипом, и содержит только небольшую часть геномных последовательностей.Таким образом,

больше подходит для исследователей, использующих его в качестве мишени, чем использующих геномные последовательности. Традиционный способ захвата последовательности экзона

включает поиск в базе данных биологии, разработку праймеров в соответствии с консервативными областями

, полимеразную цепную реакцию (ПЦР), секвенирование с помощью машины для анализа ДНК, открытие

мотивов в последовательностях и т. Д. . Чтобы превратиться в CDS, необходимо собрать секвенированные сегменты экзона

.

Стандартные программы сборки последовательностей, такие как Phrap [1], TIGR Assessment [2] и CAP3 [3],

разработаны для удовлетворения требований секвенирования генома [4], стратегия которого состоит в разбиении полной последовательности

на случайные небольшие фрагменты, упорядочивая их по отдельности, затем вычисляют отношения перекрытия каждой пары

фрагментов и соединяют их в более длинные последовательности, как показано на рисунке 1.

Рис.1 Пример сборки двух фрагментов последовательностей путем вычисления отношения перекрытия фрагментов, A и B

Однако эта стратегия не удовлетворяет потребности в обнаружении сайта сплайсинга кодирующей последовательности, поскольку в соседнем экзоне не существует взаимосвязи перекрытия

. последовательности. Кроме того, это программное обеспечение может обрабатывать только один образец

за один раз. Однако для генетических исследований, таких как контрольные и тематические исследования, требуются десятки или даже

тысяч образцов, а сплайсинг экзонов является более строгим, чем сборка генома.Эта работа обычно может быть выполнена с использованием нескольких инструментов выравнивания последовательностей вместе с повторяющимися операциями над последовательностями файлов

, что является сложным, трудоемким и подверженным ошибкам.

2. МЕТОДЫ

Рабочий процесс нашего метода CDS можно разделить на пять этапов:

(1) Получить последовательность экзона из базы данных биологии. Использование программного обеспечения для прогнозирования сайтов сплайсинга

экзонов в настоящее время не полностью созрели, поэтому последовательности экзонов могут быть точно получены только путем сравнения последовательностей

между нуклеотидом и кДНК.Некоторые известные веб-страницы, такие как Splign in NCBI,

, предоставляют услуги для вычисления выравнивания кДНК с геномной. Для извлечения экзона необходимы только нуклеотидные последовательности в формате FASTA

или порядковый номер последовательности. См. Рисунок 2.

(2) Если одному экзону в базе данных соответствует несколько последовательностей, в качестве шаблона экзона

была выбрана лучшая из них. Все последовательности образцов и шаблоны экзонов сохраняются в файле формата FASTA.

`Влияние вторичной структуры РНК на процесс сплайсинга пре-мРНК`

Сплайсинг пре-мРНК у эукариот требует соединения вместе нуклеотидов различных кодирующих мРНК областей (экзонов) после их распознавания из обычно значительно большего количества немРНК -кодирующие последовательности (интроны).Три превосходных обзора общего сплайсинга и его регуляции можно найти в ссылках 14, 62 и 70. У эукариот подавляющее большинство процессов сплайсинга катализируется сплайсосомой, очень сложным агрегатом РНК-белок, который, по оценкам, содержит несколько сотни различных белков в дополнение к пяти сплайсосомным мяРНК (1, 54, 62, 63, 81, 109). Эти факторы ответственны за точное позиционирование сплайсосомы на 5'- и 3'-последовательностях сайтов сплайсинга. Причина, по которой необходимо так много факторов, отражает наблюдение, что на распознавание экзона могут влиять многие характеристики пре-мРНК, такие как длина экзона (5, 97), присутствие энхансерных и сайленсерных элементов (8, 62), сила сплайсинга. сигналов (45), архитектуры промотора (29, 55) и скорости процессивности РНК (86).Кроме того, общее клеточное окружение также оказывает влияние, поскольку недавние наблюдения предполагают существование обширной связи между сплайсингом и многими другими этапами экспрессии генов (69) и даже его модификацией внешними стимулами (96).

Среди всей этой сложности было также высказано предположение, что вторичные структуры пре-мРНК могут потенциально влиять на активность сплайсинга. Однако, несмотря на постоянное увеличение количества сообщений об их влиянии на регулирование сплайсинга, последнему конкретному обзору по этому вопросу в настоящее время более 10 лет (3).Здесь мы предлагаем еще раз обратиться к этой конкретной проблеме в текущей перспективе общей области. Однако прежде чем мы это сделаем, мы должны ответить на основной вопрос.

`ПРЕДСТАВЛЯЮТ ВТОРИЧНУЮ СТРУКТУРУ ПРЕ-мРНК в VIVO?`

Нельзя отрицать два свойства молекул РНК: их естественную тенденцию к образованию высокостабильных вторичных и третичных структур in vitro и in vivo (9, 27, 39) и наблюдение, что изменения в этих структурах представляют собой хорошо известный регуляторный механизм для многие РНК-клеточные процессы (60).

В этом конкретном отношении, однако, вопрос, который все еще требует окончательного решения, касается присутствия вторичных структур в пре-мРНК in vivo. То, что это существование не может просто считаться само собой разумеющимся, исходит из ранних экспериментальных данных. Фактически, было высказано предположение, что данные in vitro о возможном влиянии структуры РНК на сплайсинг (94) не могут быть точно воспроизведены in vivo (95). Причина, по которой это должно быть так, восходит к классической концепции, согласно которой РНК покрыта белками in vivo.Фактически, гетерогенные рибонуклеопротеиновые частицы были известны с самого начала исследований, и основное семейство белков, участвующих в этом процессе, белки hnRNP, очень широко распространены в клетках млекопитающих. Эти РНК-белковые взаимодействия могут препятствовать сворачиванию мРНК в стабильные вторичные структуры (34) (рис. 1а). По этой причине было высказано предположение, что после транскрипции пре-мРНК может быть позволено сворачиваться только в очень ограниченный промежуток времени (36). В соответствии с этой точкой зрения, исследования с использованием искусственных конструкций, используемых для количественной оценки активности энхансеров, дали результаты, которые подтвердили гипотезу о том, что эти молекулы пре-мРНК вели себя в основном как линейная структура (44).

РИС. 1.

Экспериментальные модели вторичных структур РНК в мРНК. Существуют три возможные экспериментальные модели вторичных структур РНК в мРНК. (а) Первый представлен представлением о том, что белки hnRNP связывают мРНК, когда она транскрибируется РНК-полимеразой II, и сохраняют ее в значительной степени линейной конформации. В этом случае связывание специфических факторов регулируется только конкурентным преимуществом, обеспечиваемым последовательноспецифическими взаимодействиями по сравнению с родовым сродством связывания РНК всех белков hnRNP.(б) Противоположная ситуация - это ситуация, когда стремление к образованию вторичных и третичных структур РНК сильнее, чем способность РНК-связывающих белков предотвращать это (и, возможно, даже стабилизируется этими белками). В этом случае роль общих РНК-связывающих белков сильно снижается, и специфические комплексы могут связываться посредством сочетания специфичного для последовательности и структурно-специфичного распознавания. (c) Между этими двумя моделями есть ситуация, которая должна охватывать множество клеточных мРНК. В этом случае потенциальное «раздражение» мРНК ее слабыми или неспецифическими взаимодействиями с hnRNPs действительно может поддерживать мРНК в в значительной степени линейной конформации.Однако в определенных областях мРНК все еще способна образовывать локализованные структуры РНК, которые могут представлять, вместе с нуклеотидной последовательностью, предпочтительные сайты связывания для конкретных ядерных комплексов. Конечно, учитывая огромное разнообразие мРНК, продуцируемых клеткой, эти модели нельзя рассматривать как взаимоисключающие, хотя, вероятно, существует явное предпочтение модели на панели c.

Несмотря на эти результаты, есть также некоторые проблемы с точки зрения того, что эта ситуация может быть применена к подавляющему большинству молекул пре-мРНК.Ясно, что, учитывая огромное разнообразие последовательностей всех процессированных пре-мРНК, было бы преувеличением предполагать наличие высокостабильных вторичных структур (рис. 1b), которые напоминают структуры высококонсервативных тРНК, рРНК, IRES или других Элементы, контролирующие стабильность, репликацию и локализацию, присутствуют в нескольких 3'UTR прокариотических и эукариотических мРНК, в которых белки также могут играть ключевую роль в стабилизации структуры (60). Однако между этими двумя крайностями может существовать третья возможность, представленная наличием небольшого количества РНК-специфичных вторичных структур, которые могут в нормальных условиях влиять на механизм сплайсинга (рис.1в). Примечательно, что сообщалось о нескольких исследованиях в этом направлении. Например, у таких организмов, как Saccharomyces cerevisiae , зондирование структур пре-мРНК диметилсульфатом in vivo продемонстрировало наличие образования вторичной структуры между 5'-сайтом сплайсинга и точкой ветвления, способной стимулировать сборку U1snRNP на ранней стадии сплайсинга. этапы (21). Хотя сопоставимых доказательств для человеческих систем нет, недавно сообщалось, что однонуклеотидные полиморфизмы способны индуцировать in vivo различные структурные складки в структурах мРНК (88) (однако, влияние этих однонуклеотидных полиморфизмов на сплайсинг или функцию еще не проверял).Кроме того, статистический анализ кодирующих последовательностей мРНК показал, что рассчитанная укладка мРНК более стабильна, чем ожидалось случайно, предполагая, что смещение кодонов может способствовать существованию структур мРНК (87). Несмотря на то, что эти результаты были оспорены с использованием другого набора статистических инструментов и генов (107), в отношении бактериальной РНК недавно были опубликованы соображения, аналогичные соображениям Сеффенса и Дигби (87) (57).

Дополнительная возможность косвенно оценить эту проблему состоит в том, чтобы исследовать, может ли и в какой степени связывание факторов сплайсинга влиять на вторичные структуры РНК или влиять на них.Очевидно, что любые указания в этом направлении будут представлять собой надежную экспериментальную основу для предположений относительно роли, которую играет вторичная структура РНК в сплайсинге.

ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА СВЯЗЬ ФАКТОРОВ СПЛИСИНГА РНК (И VICE VERSA). сообщают о связывании с двухцепочечными последовательностями (17). Действительно, несколько сообщений в недавней литературе предполагают, что вторичная структура РНК играет важную роль в связывании.Например, связывание белков с РНК (CNG)

_n тринуклеотидных повторов in vivo близко соответствует результатам in vitro, которые предсказывают, что эти повторы свернуты в характерную форму шпильки (93). Самым последним наблюдением является то, что предсказательная способность в поиске новых мишеней связывания РНК для хорошо известных белков может быть значительно увеличена, если принять во внимание вторичную структуру. Недавний пример этого представлен HuR (68) (рис. 2a), белком, который связывает определенные подмножества мРНК и участвует в посттранскрипционной регуляции экспрессии генов (68).Учитывая, что все большее количество РНК-связывающих белков ведут себя как HuR, то есть, по-видимому, распознают слабо определенные мотивы последовательностей, было бы неудивительно, если бы в некоторых случаях вторичные структуры РНК представляли собой ограничивающие элементы, способные формировать четко определенные целевые области в присутствии сохранения рыхлой последовательности.

РИС. 2.

Влияние вторичной структуры РНК на белковые связывающие мотивы. (а) Слабоконсервативные последовательности связывания РНК могут быть индуцированы для отображения однородной поверхности связывания после образования шпилечной структуры.В качестве примера выбран белок HuR, который связывается с AU- и U-богатыми участками мРНК и влияет на их стабильность и трансляцию. Идентификация большого набора целевых последовательностей показала, что они состоят из двух комплементарных мотивов длиной 6 пар оснований (выделены красным и фиолетовым) и области петли, которая содержит только консервативный остаток U (выделено синим) (68). (б) Факторы сплайсинга также способны влиять на пространственное распределение РНК (помимо того, что они влияют на него). Например, связывание SF-1, U2AF65 и U2AF35 с небольшой 62-нуклеотидной РНК, содержащей последовательность точки ветвления (BPS), полипиримидиновый тракт (PPT) и 3'-сайт сплайсинга (3'ss), было показано гидроксилом. радикальное зондирование железо-ЭДТА для изгиба РНК таким образом, чтобы объединить 3'-сайт сплайсинга и область точки ветвления, тем самым помогая формированию коммитирующего комплекса сплайсинга (59).

Что касается конкретных факторов, способных влиять на процесс сплайсинга, следует отметить, что связывание нескольких положительных (B52, SRp55 и NOVA-1) и отрицательных (hnRNP A1) регуляторов сплайсинга зависит от Вторичные структуры РНК, а также целевые нуклеотидные последовательности (10, 31, 78, 89). В последнее время тот факт, что большинство основных членов семейства белков SR потенциально подвержены влиянию конформации РНК-мишени, может указывать на то, что структурные влияния могут быть широко распространенным явлением, по крайней мере, для компонентов этого важного семейства модификаторов сплайсинга. (13).

Интересно, что эта взаимосвязь между факторами сплайсинга и пространственным распределением РНК вполне может идти в обе стороны, обеспечивая потенциально даже больший уровень гибкости в управлении сплайсингом. Например, недавно было высказано предположение, что связывание одного U2AF65 с 3'-сайтом сплайсинга приводит к «уплотнению» РНК таким образом, чтобы приблизить друг к другу 3'-сайт сплайсинга и сайт разветвления. область (59) (рис. 2б). Следует отметить, что эти исследования были выполнены с использованием искусственной короткой РНК (62 нуклеотида [nt]), содержащей область разветвления, полипиримидиновый тракт и 3'-сайт сплайсинга, и, таким образом, необходимо провести дальнейшие эксперименты, чтобы проверить играют ли эти эффекты более широкую роль in vivo.Тем не менее, это открытие показывает, что белковые факторы не просто пассивные игроки в «игре связывания и сворачивания», и мы надеемся, что будущие исследования разовьют эту новую концепцию и ее последствия.

`ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА 5 ', 3' ЭЛЕМЕНТЫ ПЛОЩАДКИ СПЛАЙСА И ТОЧЕЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ РАЗВЕТКИ`

По очевидным причинам самые ранние и самые многочисленные сообщения о способности вторичных структур РНК влиять на процесс сплайсинга касаются консервативных ключевых областей, которые определяют экзон (I.е., 5'-сайт сплайсинга, 3'-сайт сплайсинга и сайт разветвления). Эти отчеты включают множество разнообразных организмов и генов. Например, они включают такие вирусы, как вирус гепатита В (67), аденовирус (22, 41, 76), вирус иммунодефицита человека 1 типа (31, 52), вирус саркомы Рауса (15), дрожжи (21, 33, 42, 43, 47, 80, 102), такие растения, как Nicotiana plumbaginifolia (66), Drosophila (23), а также крысы и мыши (26, 28, 105). У людей вторичные структуры, которые влияют на распознавание консенсусных последовательностей консервативных сайтов сплайсинга, были предложены при создании изоформ гормона роста человека (37), гена tau (46, 53, 100, 101, 108), Hprt Ген (49, 98) и ген hnRNPA1 (6).

Хотя многие из этих случаев содержат индивидуальные особенности, кажется, что здесь задействованы два довольно интуитивных и объединяющих механизма. Самый распространенный - наличие структурных элементов, которые могут затруднять доступность выбранных последовательностей из-за основных факторов сплайсинга. Таким образом было предложено препятствовать процессивности интрона и способствовать пропуску экзона как в искусственном контексте (43) (рис. 3a), так и в контексте патологического дефекта, связанного с геном tau человека (100) (см. Инжир.6 и ниже). В зависимости от анализируемой системы наблюдалось, что это ингибирование нацелено только на акцепторный сайт, донорный сайт или оба. Однако, обращая особое внимание на 3'-сайт сплайсинга, следует отметить, что недавние попытки коррелировать присутствие слабо определенных вторичных структур в определении 3'-сайта сплайсинга привели к небольшому (от 5 до 10%), но значительному улучшению прогнозируемых результатов. способность (84), что указывает на то, что эта область может быть особенно чувствительной к присутствию структурированной РНК.

РИС. 3. Структурные элементы

РНК и эффективность сплайсинга. (a) Серия коротких искусственных шпилек (HP) увеличивающейся длины, содержащих 5'-сайт сплайсинга (обозначен стрелкой, в то время как консенсусная последовательность выделена красным). Эти конструкции были сконструированы в интроне RP51A дрожжей и исследованы на функциональность в репортерной конструкции, которая содержит интрон дикого типа, вставленный в ген lacZ . В этой конструкции только точное вырезание интрона вызывает экспрессию β-галактозидазы.После трансфекции дрожжевых клеток было определено, что более длинные шпильки обладают повышенной способностью секвестировать донорский сайт и ингибировать ранние этапы сборки сплайсосом (43). Шпильки также могут изменять относительные расстояния регулирующих элементов сращивания и, таким образом, влиять на конечный результат. Например, в интроне дрожжевого актина (b) последовательность точки ветвления (BPS) расположена далеко от сайта 3'-сплайсинга (3'ss), которому также предшествует молчащий 3'ss (молчащий), который является обычно не используется в сварочном оборудовании.Причина этого заключается в предполагаемом складывании области между BPS и правильными 3's в структуре шпильки. Функция этой структуры была бы двоякой: приводить BPS в рабочий диапазон правильных 3's и изолировать бесшумные 3's, предотвращая их использование оборудованием для сварки (33). Наконец, образование шпилечной структуры около точки ветвления гена Adh , интрона 1 (3c), как было недавно предположено, играет активную роль в сплайсинге посредством особого механизма.В этом случае было предложено образование шпильки, чтобы заставить последовательность точки ветвления (BPS) принять непарную конформацию, которая будет лучше распознаваться аппаратом сплайсинга (23).

Второй механизм включает более косвенный эффект, посредством которого вторичные структуры РНК, которые не включают консервативные последовательности сплайсинга, могут тем не менее изменять относительное расстояние между этими элементами. Эти изменения могут затем определять значительные различия в использовании или эффективности места монтажа. Пример такого события был замечен в пре-мРНК актина дрожжей Kluyveromyces lactis , где варьирование расстояния между элементом точки ветвления и двумя потенциальными 3'-сайтами сплайсинга определяет эффективное использование дистального акцепторного сайта (33). (Рис.3б). Альтернативно, структурные ограничения могут также иметь эффект косвенного стимулирования использования сайтов ветвления, поддерживая их в одноцепочечной доступной конфигурации, такой как был описан для гена Drosophila Adh (23) (Fig. 3c).

`ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА ЭКЗОННЫЕ / ИНТРОННЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ ЭЛЕМЕНТОВ УЛУЧШЕНИЯ ИЛИ ГЛУШИТЕЛЯ`

В дополнение к сплайсингу консенсусных последовательностей существует также меньшее (но постоянно увеличивающееся) число случаев, когда были описаны структурные ограничения, влияющие на менее определенные цис -действующие последовательности, такие как экзонические / интронные энхансеры сплайсинга (ESE / ISE) или глушители (ESS / ISS) (8, 92).

Например, было показано, что специфическая для человека последовательность ESS в экзоне фибронектина EDA влияет на связывание белков SR с последовательностью ESE, которая находится на 13 нуклеотидов выше последовательности первичной РНК. Предполагается, что в нормальных условиях функция этой последовательности ESS стабилизирует вторичную структуру последовательности ESE таким образом, чтобы обеспечить связывание белков SR (77). Дополнительная характеристика системы ESS / ESE в экзонах EDA мыши и человека показала, что, хотя последовательности ESE человека и мыши вели себя идентичным образом, мутации, введенные в последовательность ESS мыши (предположительно идентифицированные по гомологии последовательностей), не влияли на сплайсинг экзонов.Структурный анализ экзона EDA мыши показал, что, несмотря на небольшое количество нуклеотидных изменений в последовательности (8 из 270) экзона человека, две вторичные структуры РНК значительно различались (13). Путем сравнения того, как структура мыши реагировала на гомологичные делеции в предполагаемых последовательностях ESS, было окончательно продемонстрировано, что изменения в поведении сплайсинга по отношению к последовательности ESS человека можно объяснить конформационным сдвигом от петли к стержню в ESE. структура (рис.4а). Этот сдвиг предотвращал связывание SF2 / ASF и приводил к пропуску экзонов без непосредственной модификации связывающего мотива SF2 / ASF (13). Следовательно, различные структурные ограничения у мышей и людей могли объяснить то, что казалось явно противоречивым поведением при сплайсинге.

РИС. 4.

Стерические затруднения также обнаружены в последовательностях ESE, которые способствуют распознаванию правильных 3'-сайтов сплайсинга и 5'-сайтов сплайсинга. В случае экзонов EDA фибронектина мыши (и человека) вторичные структурные элементы могут стабилизировать конформацию последовательности ESE и усилить ее способность связывания с белком SR (13, 77).Например, было продемонстрировано, что мутации, которые не влияют напрямую на последовательность ESE мыши, вызывают конформационные изменения в этой области (от петли к стеблю), которые препятствуют связыванию белков SF2 / ASF и, таким образом, отменяют распознавание экзонов (а). Красным выделен участок РНК, который после делеции mΔB6 блокирует последовательность ESE. Альтернативно, вторичные структуры РНК могут также косвенно функционировать на регуляторных участках ESE / ESS. Например, в гене FGFR2 они вносят вклад в регулирование включения взаимоисключающих экзонов IIIb (экспрессируемых в эпителиальных клетках) и IIIc (экспрессируемых в мезенхимальных клетках).В этом случае функция стволовой структуры, образованной интронной активирующей последовательностью 2 (IAS2) и элементом активатора и репрессора интронного сплайсинга (ISAR), будет состоять в приближении ингибирующей интронной последовательности (богатой GCAUG последовательности) относительно дистальной части. элемент интронного сплайсинга сайленсера (DISS), который в норме подавляет включение экзона IIIb (4). Инактивация этого элемента затем приведет к активации сплайсинга экзона IIIb в эпителиальных клетках (b).

Отчасти аналогичная ситуация была недавно описана для генов SMN1 / SMN2 ; Miyaso et al.(74) идентифицировали элемент ISE, состоящий из консервативной структуры стебель-петля из 24 нуклеотидов в интроне 7. Нарушение этой вторичной структуры приводит к потере связывания еще не идентифицированного trans -действующего фактора, и это может влияют на процесс сплайсинга (но только при наличии перехода C-to-T, который происходит в положении 6 экзона 7). Учитывая, что этот переход, как было показано, непосредственно затрагивает несколько сигнатур связывания белков, таких как SF2 / ASF (19) и hnRNP A1 (56), и находится близко к сайту связывания Tra2-β1 (51), будет интересно проанализировать потенциальное взаимодействие между всеми этими факторами и идентифицированным элементом ISE.Примечательно, что поиск in silico, проведенный Miyaso et al. показал, что этот элемент, по-видимому, присутствует во множестве последовательностей интронов из нескольких генов, что повышает вероятность того, что этот структурно определенный ISE может играть более широкую роль в общем поле сплайсинга (74). Наконец, со структурной точки зрения следует отметить, что этот экзон может также содержать элемент стебель-петля рядом с его 3'-областью сайта сплайсинга (90), хотя влияние этой структуры на сплайсинг экзона 7 еще предстоит определить. .

Механизм, отличный от представленных выше, был недавно предложен для гена FGFR2 человека. В этом случае образование двухцепочечной РНК, созданной соединением двух одноцепочечных элементов (создавая петлю из 735 нуклеотидов), первоначально наблюдалось для регуляции сплайсинга взаимоисключающих экзонов IIIb и IIIc (32, 75). Мутационные исследования показали, что фундаментальная особенность заключается в двухцепочечной структуре, а не в последовательностях, специфичных для FGFR2.Дальнейшая работа по этому вопросу недавно предположила, что функция этой структуры будет приближать интронный контрольный элемент, который инактивирует ранее картированную последовательность ISS, локализованную рядом с экзонной последовательностью IIIb (4). Фактически, как показано на рис. 4b, в линейных условиях этот новый интронный элемент управления был бы слишком далеко, чтобы иметь какое-либо влияние на функционирование элемента ISS. Интересно, что филогенетический анализ этой структуры от морского ежа до человека продемонстрировал, что функциональная консервация этой структуры сохраняется более 600 миллионов лет, подчеркивая устойчивость вторичных структур мРНК во время эволюции независимо от конкретных нуклеотидных последовательностей (73).

`ДАЛЬНЕЙШИЕ ЭФФЕКТЫ ВТОРИЧНЫХ СТРУКТУР РНК НА ДОСТУПНОСТЬ РЕГИОНОВ пре-мРНК`

До сих пор остается очень неясным механизм, посредством которого вторичная структура РНК, как предполагается, влияет на процесс сплайсинга, заключается в воздействии на структуры пре-мРНК более высокого порядка. молекула. Первое свидетельство того, что изменения обширных вторичных структурных элементов, включающих как экзонную, так и интронную последовательности, ответственны за изменения сплайсинга, было получено при анализе гена куриного β -тропомиозина (25, 64) и гена дистрофина (71).В некоторой степени родственная концепция была недавно вновь принята в отношении присутствия консервативных полипуриновых и полипиримидиновых последовательностей в интронных областях множества генов (72), которые могли бы спариваться друг с другом и, таким образом, исключать определенные экзоны из сплайсинга ». очередь." Однако остается неясным, как эти структуры могут быть ответственны за пропуск экзонов, хотя недавняя работа для гена β-тропомиозина цыпленка указывает на то, что в условиях, благоприятствующих формированию структуры РНК, существует общее вмешательство во взаимодействия U1-U6 snRNP (91 ) (Рис.5а). Тем не менее, дальнейшие эксперименты, надеюсь, позволят нам предоставить некоторую информацию по этому поводу. Например, в интроне rp51b из S. cerevisiae для эффективного сплайсинга интрона из 325 нуклеотидов требуется спаривание двух коротких взаимодействующих последовательностей, которые обычно находятся на расстоянии 200 нуклеотидов друг от друга, что, вероятно, способствует кооперативным взаимодействиям между факторами, охватывающими интрон ( 65).

РИС. 5.

Распознавание экзонов также может быть ингибировано образованием обширных вторичных структур РНК, таких как показанная (а) для гена β -тропомиозина курицы.В этом случае экзонная последовательность 6B и окружающие ее интронные последовательности складываются в сложную структуру, которая способна влиять на взаимодействие всех snRNP (от U1 до U6) с пре-мРНК (91). Также было описано, что образование РНК-структур, которые могут «вырывать» всю пре-мРНК, происходит в пре-мРНК hnRNPA1 . Однако в этом случае ингибирование опосредуется белками (собственно hnRNP A1), связывающимися по обе стороны от экзона и взаимодействующими друг с другом (b) (79).Предполагается, что способ действия этих структур основан на стерических препятствиях для петлевых сайтов сплайсинга (которые, даже если они не препятствуют связыванию U1snRNP, могут быть несовместимы с более поздними событиями сплайсинга). Альтернативно или дополнительно, эти структуры могут функционировать, просто обеспечивая конкурентное преимущество для дистальных 5'-сайтов сплайсинга, которые перемещены ближе к акцепторной последовательности.

Аналогичный механизм, который прошел расширенные экспериментальные испытания в последние годы, также был описан в гене hnRNPA1 (7, 79).В этом случае было показано, что сам фактор hnRNP A1 связывается с обеих сторон экзона и напрямую способствует исключению посредством механизма «петли» (рис. 5b). В настоящее время предлагаемые механизмы действия включают активное препятствование выведенному петлей 5'-сайту сплайсинга (вероятно, на этапах обработки после фиксации, поскольку связывание U1snRNP, по-видимому, не было изменено в петлеобразном экзоне) (20) и / или приближение дистального 5'-сайта сплайсинга, потенциально обеспечивая конкурентное преимущество. Интересно, что подобная ситуация может также иметь место в регуляции сплайсинга нейрон-специфического c- src экзона N1 с помощью связывающего белка полипиримидинового тракта.Также в этом случае связывание белка, связывающего полипиримидиновый тракт, по обе стороны от этого экзона и извлечение N1-содержащей РНК, может способствовать его подавлению и предотвращать его включение в ненейрональные клетки (24, 103).

`МОГУТ ЛИ ИЗМЕНЕНИЯ ВО ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЕ пре-мРНК ПРИЧИНЫ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИИ ЧЕЛОВЕКА?`

Принимая во внимание очевидную сложность правильного процессинга пре-мРНК, неудивительно, что все чаще сообщается о том, что изменения сплайсинга участвуют во многих генетических заболеваниях.Специально этот обзор не претендует на то, чтобы быть исчерпывающим анализом постоянно растущих связей между мутациями, сплайсингом и заболеванием, поскольку он был предметом нескольких прекрасных недавних обзоров (16, 18, 38, 40, 82, 83). ). Однако среди этого постоянно растущего числа доказательств того, что сплайсинг связан с заболеванием, стоит отметить, что изменения в структуре РНК также играют роль в патогенных процессах с участием гена дистрофина (71), NF -1 ген (50, 58), а в последнее время - ген CFTR (48).В этих случаях, однако, экспериментальные исследования не подтверждают, что предлагаемые структуры соответствуют предсказаниям in silico. Более того, в IVS8 гена CFTR до сих пор неясно, как предсказанные структуры связаны со связыванием факторов сплайсинга в том же положении (11, 12, 104). На данном этапе, однако, следует сделать предостережение в отношении того факта, что эти описанные примеры в основном основаны на исследованиях ассоциации между активностью сплайсинга и предсказаниями in silico пре-мРНК структур, таких как те, которые могут быть получены с помощью Mfold (110) или Pfold (61). ).Недостатком этих подходов является тот факт, что компьютерные алгоритмы обеспечивают предсказание сворачивания (а часто и более одного) практически для любой последовательности РНК и сильно зависят от длины исследуемой последовательности РНК. По этой причине, хотя предсказания in silico представляют собой бесценный инструмент для исследователей в этой области, следует проявлять особую осторожность, когда предсказанные структуры пре-мРНК коррелируют с поведением сплайсинга. Например, исследования in silico транскриптов гена NF-1 (50, 58), которые участвуют в образовании опухолей человека, подверглись сомнению в последовательных сообщениях (99, 106).Фактически, эти исследования показали, что анализы, сообщающие о корреляциях между предсказанными in silico изменениями вторичной структуры и сплайсингом в этих системах, сильно зависят от принимаемого во внимание окна РНК, что очень затрудняет определение значимости предлагаемых корреляций. Аналогичная ситуация произошла с контролем сплайсинга экзона 2 в гене hprt человека, где предполагаемая роль вторичной структуры РНК, основанная на доказательствах in silico (49), не получила никакой поддержки в более позднем анализе, выполненном с использованием обновленных параметров. и включая часть фланкирующих последовательностей интронов (98).

В настоящее время прямые экспериментальные доказательства роли вторичной структуры в возникновении болезней человека лучше всего представлены только работой, выполненной с мутациями, которые влияют на включение экзона 10 в ген tau (46, 53, 100 , 101, 108), хотя следует отметить, что одно мутационное исследование не подтверждает эти выводы (35). Мутации в гене tau связаны с лобно-височной деменцией и паркинсонизмом. В частности, мутации в интронной области около 5'-сайта сплайсинга экзона 10 тесно коррелируют с изменениями в характерной структуре стержень-петля, которая была определена с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса (100) (рис.6а). Обширные мутационные анализы (46, 53) этой области и исследования функционального связывания для мониторинга связывания U1snRNP с сайтом сплайсинга (53) показали, что мутации, дестабилизирующие спираль, приводят к увеличению использования сайта сплайсинга из-за увеличения связывания U1snRNP (53). ) (см. схему на рис. 6б). Примечательно, что тот факт, что небольшой антибиотик, неомицин, может связываться с этой областью и стабилизировать конфигурацию стержень-петля, представляет собой многообещающее начало поиска терапевтических агентов, которые используют структурные мотивы (101).

РИС. 6.

Участие структурных элементов РНК в заболеваниях человека. В альтернативно сплайсированном tau экзоне 10 элемент стебель-петля регулирует доступность 5'-сайта сплайсинга для U1snRNP. (а) Что показали исследования ЯМР (100). Этот элемент состоит из структуры стержень-петля, включающей соединение 5'-экзон / интрон (верхний / нижний регистр) от -5 до +19, которое ограничено гибкой петлей из 6 п.н. Спаривания оснований между нуклеотидами в этой области (сплошные столбцы) препятствуют распознаванию U1snRNA (пунктирные линии).(b) Мутации, которые разрушают структурный элемент, приводят к повышенной доступности этой области и усилению связывания U1snRNP с донорским сайтом. Как следствие, распознавание экзона улучшается, и возникающие в результате изменения баланса между транскриптами экзона 10+ и экзона 10- внутри клетки, как предполагается, приводят к лобно-височной деменции и паркинсонизму, связанным с хромосомой 17 (46, 53, 100, 101, 108).

`ВЫВОДЫ`

В заключение, картина, которая начинает вырисовываться, явно свидетельствует в пользу возможности того, что многие (если не большинство) последовательностей пре-мРНК вполне способны нести выбранные области, которые могут складываться в четко определенные вторичные структуры in vivo.С эволюционной точки зрения это, вероятно, не случайное явление, поскольку отсутствие структуры определенно лишило бы процесс сплайсинга дополнительного регулирующего механизма, в то время как слишком большое количество структуры в конечном итоге мешало бы более поздним сложным этапам сборки и другим уровням регуляции. Функциональные механизмы, исследованные до сих пор, в основном включают два вида механистических объяснений: окклюзия / раскрытие ключевых регулирующих элементов, действующих на цис , или пространственная модификация расстояния между этими элементами.В настоящее время основным ограничением в идентификации этих событий является то, что наши предсказательные возможности все еще довольно ограничены, и безопасное суждение может быть сделано только путем проведения надежных функциональных исследований и экспериментального исследования предполагаемых структур РНК.

`БЛАГОДАРНОСТИ`

Эта работа была поддержана грантами Фонда Telethon Onlus (Италия) (грант № GGP02453) и FIRB (грант № RBNE01W9PM).

`ССЫЛКИ`

1.↵ Адамс, М. Д., Д. З. Руднер и Д. К. Рио. 1996. Биохимия и регуляция сплайсинга пре-мРНК. Curr. Opin. Cell Biol. 8 : 331-339.
2.↵ Антсон, А.А. 2000. Белки, связывающие одноцепочечную РНК. Curr. Opin. Struct. Биол. 10 : 87-94.
3.↵ Balvay, L., D. Libri, and M. Y. Fiszman. 1993. Вторичная структура пре-мРНК и регуляция сплайсинга.Биологические исследования 15 : 165-169.
4.↵ Бараняк, А. П., Э. Л. Ласда, Э. Дж. Вагнер и М. А. Гарсиа-Бланко. 2003. Стволовая структура в транскриптах рецептора 2 фактора роста фибробластов опосредует сплайсинг, специфичный для клеточного типа, приближая интронные контрольные элементы. Мол. Клетка. Биол. 23 : 9327-9337.
5.↵ Черный, D. L. 1991. Блокирует ли стерическое вмешательство между сайтами сплайсинга сплайсинг короткого c- src нейрон-специфического экзона в ненейрональных клетках? Genes Dev.5 : 389-402.
6.↵ Бланшетт, М. и Б. Шабо. 1997. Высокостабильная дуплексная структура изолирует 5'-участок сайта сплайсинга альтернативного экзона 7B hnRNP A1. РНК 3 : 405-419.
7.↵ Бланшетт, М. и Б. Шабо. 1999. Модуляция пропуска экзонов высокоаффинными сайтами связывания hnRNP A1 и элементами интрона, которые подавляют использование сайтов сплайсинга. EMBO J. 18 : 1939–1952.
8.↵ Blencowe, B.J. 2000. Энхансеры экзонного сплайсинга: механизм действия, разнообразие и роль в генетических заболеваниях человека. Trends Biochem. Sci. 25 : 106-110.
9.↵ Брион П. и Э. Вестхоф. 1997. Иерархия и динамика сворачивания РНК. Анну. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26 год : 113-137.
10.↵ Баканович, Р. Дж. И Р. Б. Дарнелл. 1997. Нейрональный РНК-связывающий белок Nova-1 распознает специфические РНК-мишени in vitro и in vivo. Мол. Клетка. Биол. 17 : 3194-3201.
11.↵ Buratti, E., A. Brindisi, F. Pagani, and F. E. Baralle. 2004. Ядерный фактор TDP-43 связывается с полиморфными повторами TG в интроне 8 CFTR и вызывает пропуск экзона 9: функциональная связь с пенетрантностью болезни. Являюсь. J. Hum. Genet. 74 : 1322-1325.
12.№ Э. Буратти, Т. Дорк, Э. Зуккато, Ф. Пагани, М. Романо и Ф. Э. Баралле. 2001. Ядерный фактор TDP-43 и белки SR способствуют пропуску экзона 9 CFTR in vitro и in vivo. EMBO J. 20 : 1774–1784.
13.↵ Buratti, E., A. F. Muro, M. Giombi, D. Gherbassi, A. Iaconcig и F. E. Baralle. 2004. Сворачивание РНК влияет на рекрутирование белков SR полипуриновыми энхансерными элементами мыши и человека в экзоне фибронектина EDA.Мол. Клетка. Биол. 24 : 1387-1400.
14.↵ Бердж, К. Б., Т. Тушл и П. А. Шарп. 1999. Сплайсинг предшественников мРНК сплайсосомой. Лаборатория Колд Спринг Харбор Пресс, Колд Спринг Харбор, Нью-Йорк,
15.6 Кабелло-Виллегас, Дж., К. Э. Джайлс, А. М. Сото, П. Ю., А. Мугин, К. Л. Бимон и Ю. X. Ван 2004. Структура раствора псевдо-5'-сайта сплайсинга ретровирусного супрессора сплайсинга.РНК 10 : 1388-1398.
16.↵ Касерес, Дж. Ф., и А. Р. Корнблихтт. 2002. Альтернативный сплайсинг: множественные механизмы контроля и участие в заболеваниях человека. Тенденции Genet. 18 : 186-193.
17.↵ Карлсон, К. Б., О. М. Стивенс и П. А. Бил. 2003. Распознавание двухцепочечной РНК белками и небольшими молекулами. Биополимеры 70 : 86-102.
18.№ Картеньи, Л., С. Л. Чу и А. Р. Крайнер. 2002. Слушать тишину и понимать бессмыслицу: экзонные мутации, влияющие на сплайсинг. Nat. Преподобный Жене. 3 : 285-298.
19.↵ Картеньи Л. и А. Р. Крайнер. 2002. Нарушение SF2 / ASF-зависимого энхансера экзонного сплайсинга в SMN2 вызывает спинальную мышечную атрофию в отсутствие SMN1. Nat. Genet. 30 : 377-384.
20.№ Шабо, Б., М. Бланшетт, И. Лапьер и Х. Ла-Бранш. 1997. Элемент интрона, модулирующий выбор 5'-сайта сплайсинга в пре-мРНК hnRNP A1, взаимодействует с hnRNP A1. Мол. Клетка. Биол. 17 : 1776-1786.
21.↵ Шарпантье, Б., и М. Росбаш. 1996. Внутримолекулярная структура интронов дрожжей помогает на ранних этапах сборки сплайсосом in vitro. РНК 2 : 509-522.
22.№ Chebli, K., R. Gattoni, P. Schmitt, G. Hildwein и J. Stevenin. 1989. 216-нуклеотидный интрон пре-мРНК E1A содержит шпилечную структуру, которая позволяет использовать необычно удаленные акцепторы ответвлений. Мол. Клетка. Биол. 9 : 4852-4861.
23.↵ Чен Ю. и У. Стефан. 2003. Компенсаторная эволюция вторичной структуры матричной РНК-предшественницы в гене Adh у Drosophila melanogaster. Proc. Natl.Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 100 : 11499-11504.
24.↵ Чоу, М. Ю., Дж. Г. Андервуд, Дж. Николич, М. Х. Луу и Д. Л. Блэк. 2000. Связывание мультисайтовой РНК и высвобождение белка, связывающего полипиримидиновый тракт, во время регуляции c-src нервно-специфического сплайсинга. Мол. Клетка 5 : 949-957.
25.↵ Clouet d'Orval, B., Y. d'Aubenton Carafa, P. Sirand-Pugnet, M. Gallego, E. Brody и J. Marie. 1991 г.Репрессия вторичной структуры РНК мышечно-специфичного экзона в ядерных экстрактах клеток HeLa. Наука 252 : 1823-1828 гг.
26.↵ Coleman, T. P., and J. R. Roesser. 1998. Вторичная структура РНК: важный цис-элемент в сплайсинге крысиного кальцитонина / пре-мессенджерской РНК CGRP. Биохимия 37 : 15941-15950.
27.↵ Конн, Г. Л. и Д. Э. Дрейпер. 1998. Структура РНК. Curr. Opin. Struct.Биол. 8 : 278–285.
28.↵ Коут Дж. И Б. Шабо. 1997. Взаимодействие естественного спаривания оснований между 5'-сайтом сплайсинга и последовательностями сайта разветвления влияет на выбор 5'-сайта сплайсинга у млекопитающих. РНК 3 : 1248-1261.
29.↵ Крамер П., Дж. Ф. Касерес, Д. Касалла, С. Каденер, А. Ф. Муро, Ф. Э. Баралле и А. Р. Корнблихтт. 1999. Сцепление транскрипции с альтернативным сплайсингом: промоторы РНК pol II модулируют эффекты SF2 / ASF и 9G8 на экзонный энхансер сплайсинга.Мол. Клетка 4 : 251-258.
30.↵ Cusack, S. 1999. РНК-белковые комплексы. Curr. Opin. Struct. Биол. 9 : 66-73.
31.↵ Damgaard, C. K., T. O. Tange, and J. Kjems. 2002. hnRNP A1 контролирует сплайсинг мРНК ВИЧ-1 посредством кооперативного связывания с сайленсерами сплайсинга интронов и экзонов в контексте консервативной вторичной структуры. РНК 8 : 1401-1415.
32.№ Дель Гатто, Ф., А. Плет, М. К. Геснель, К. Форт и Р. Бретнах. 1997. Множественные взаимозависимые элементы последовательности контролируют сплайсинг альтернативного экзона рецептора 2 фактора роста фибробластов. Мол. Клетка. Биол. 17 : 5106-5116.
33. Deshler, J. O., and J. J. Rossi. 1991. Неожиданные точечные мутации активируют скрытые 3'-сайты сплайсинга, нарушая естественную вторичную структуру внутри интрона дрожжей. Genes Dev.5 : 1252-1263.
34.↵ Дрейфус, Г., М. Дж. Матунис, С. Пинол-Рома и К. Г. Бурд. 1993. Белки hnRNP и биогенез мРНК. Анну. Rev. Biochem. 62 : 289-321.
35.↵ Д'Суза, И., П. Пуркай, М. Хонг, Д. Нохлин, В. М. Ли, Т. Д. Берд и Г. Д. Шелленберг. 1999. Миссенс и молчащие мутации гена тау вызывают лобно-височную деменцию с паркинсонизмом-хромосомой 17-го типа, воздействуя на несколько альтернативных регуляторных элементов сплайсинга РНК.Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 96 : 5598-5603.
36. Эперон, Л. П., И. Р. Грэм, А. Д. Гриффитс и И. К. Эперон. 1988. Влияние вторичной структуры РНК на альтернативный сплайсинг пре-мРНК: ограничивается ли сворачивание областью позади транскрибирующей РНК-полимеразы? Клетка 54 : 393-401.
37.↵ Эстес, П. А., Н. Э. Кук и С. А. Либхабер. 1992. Вторичная структура нативной РНК контролирует выбор альтернативных сайтов сплайсинга и генерирует две изоформы гормона роста человека.J. Biol. Chem. 267 : 14902-14908.
38.↵ Фаустино, Н. А., и Т. А. Купер. 2003. Сплайсинг пре-мРНК и болезни человека. Genes Dev. 17 : 419-437.
39.↵ Фонтана В., Д. А. Конингс, П. Ф. Стадлер и П. Шустер. 1993. Статистика вторичных структур РНК. Биополимеры 33 : 1389-1404.
40.↵ Гарсия-Бланко, М.А., Бараняк А.П., Ласда Э.Л. 2004. Альтернативное сращивание в болезни и терапии. Nat. Biotechnol. 22 : 535-546.
41.↵ Гаттони, Р., П. Шмитт и Дж. Стивенин. 1988. Сплайсинг транскриптов аденовируса E1A in vitro: характеристика новых реакций и множественных точек ветвления, аномально далеко от 3'-сайта сплайсинга. Nucleic Acids Res. 16 : 2389-2409.
42.↵ Гогель, В., и М. Росбаш. 1993. На выбор сайта сплайсинга и эффективность сплайсинга положительно влияет спаривание внутримолекулярных оснований пре-мРНК в дрожжах. Клетка 72 : 893-901.
43.↵ Goguel, V., Y. Wang, and M. Rosbash. 1993. Короткие искусственные шпильки изолируют сигналы сплайсинга и ингибируют сплайсинг пре-мРНК дрожжей. Мол. Клетка. Биол. 13 : 6841-6848.
44.↵ Грейвли, Б. Р., К. Дж. Хертель и Т.Маниатис. 1998. Систематический анализ факторов, определяющих силу энхансеров сплайсинга пре-мРНК. EMBO J. 17 : 6747-6756.
45.↵ Грин, М. Р. 1991. Биохимические механизмы конститутивного и регулируемого сплайсинга пре-мРНК. Анну. Rev. Cell Biol. 7 : 559-599.
46.↵ Гровер, А., Х. Холден, М. Бейкер, Дж. Адамсон, Дж. Льюис, Г. Прихар, С. Пикеринг-Браун, К. Дафф и М.Хаттон. 1999. Мутации 5'-сайта сплайсинга в тау-белка, связанные с наследственной деменцией FTDP-17, влияют на структуру петля-стержень, которая регулирует альтернативный сплайсинг экзона 10. J. Biol. Chem. 274 : 15134-15143.
47.↵ Halfter, H., and D. Gallwitz. 1988. Нарушение сплайсинга дрожжевой пре-мРНК потенциальными вторичными структурообразующими последовательностями рядом с консервативной последовательностью точки ветвления. Nucleic Acids Res. 16 : 10413-10423.
48.↵ Хефферон, Т. У., Дж. Д. Громан, К. Э. Юрк и Г. Р. Каттинг. 2004. Вариабельный динуклеотидный повтор в гене CFTR способствует фенотипическому разнообразию, формируя вторичные структуры РНК, которые изменяют сплайсинг. Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 101 : 3504-3509.
49.↵ Хенниг, Э. Э., А. Х. Конней и С. Дж. Вей. 1995. Характеристика мутаций сплайсинга hprt, индуцированных конечным канцерогенным метаболитом бензо [a] пирена в клетках V-79 китайского хомячка.Cancer Res. 55 : 1550-1558.
50.↵ Hoffmeyer, S., P. Nurnberg, H. Ritter, R. Fahsold, W. Leistner, D. Kaufmann и W. Krone. 1998. Ближайшие стоп-кодоны в экзонах гена нейрофиброматоза 1 типа являются разрозненными эффекторами сплайсинга. Являюсь. J. Hum. Genet. 62 : 269-277.
51.↵ Hofmann, Y., C. L. Lorson, S. Stamm, E. J. Androphy и B. Wirth. 2000. Htra2-beta 1 стимулирует экзонный энхансер сплайсинга и может восстанавливать полноразмерную экспрессию SMN для выживания мотонейрона 2 (SMN2).Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 97 : 9618-9623.
52.↵ Jacquenet, S., D. Ropers, P. S. Bilodeau, L. Damier, A. Mougin, C. M. Stoltzfus и C. Branlant. 2001. Консервативные структуры «стебель-петля» в области РНК ВИЧ-1, содержащие сайт сплайсинга A3 3 'и его цис-регуляторный элемент: возможное участие в сплайсинге РНК. Nucleic Acids Res. 29 : 464-478.
53.↵ Цзян, З., Дж. Кот, Дж. М.Квон, А. М. Гоут и Дж. Ю. Ву. 2000. Аберрантный сплайсинг пре-мРНК тау, вызванный интронными мутациями, ассоциированными с унаследованной лобно-височной деменцией с паркинсонизмом, сцепленным с хромосомой 17. Mol. Клетка. Биол. 20 : 4036-4048.
54.↵ Jurica, M. S., and M. J. Moore. 2003. Сплайсинг пре-мРНК: море белков. Мол. Клетка 12 : 5-14.
55.↵ Каденер, С., Дж. П. Федеда, М. Росбаш, А. Р. Корнблихтт. 2002. Регулирование альтернативного сплайсинга энхансером транскрипции посредством элонгации РНК pol II. Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 99 : 8185-8190.
56.↵ Kashima, T., and J. L. Manley. 2003. Негативный элемент в экзоне 7 SMN2 ингибирует сплайсинг при спинальной мышечной атрофии. Nat. Genet. 34 : 460-463.
57.↵ Кац, Л., и К. Б.Burge. 2003. Широко распространенный отбор по локальной вторичной структуре РНК в кодирующих областях бактериальных генов. Genome Res. 13 : 2042-2051.
58.↵ Кауфманн, Д., В. Лайстнер, П. Круз, О. Кеннер, С. Хоффмайер, К. Хайн, В. Фогель, Л. Мессиан и Б. Бартельт. 2002. Аберрантный сплайсинг в нескольких опухолях человека в генах супрессоров опухолей нейрофиброматоза типа 1, нейрофиброматоза типа 2 и туберозного склероза 2. Cancer Res. 62 : 1503-1509.
59.↵ Кент, О. А., А. Реайи, Л. Фунг, К. А. Чилибек и А. М. Макмиллан. 2003. Структурирование 3'-сайта сплайсинга с помощью U2AF65. J. Biol. Chem. 278 : 50572-50577.
60.↵ Klaff, P., D. Riesner, and G. Steger. 1996. Структура РНК и регуляция экспрессии генов. Завод Мол. Биол. 32 : 89-106.
61.↵ Knudsen, B., and J.Хайн. 1999. Предсказание вторичной структуры РНК с использованием стохастических контекстно-свободных грамматик и истории эволюции. Биоинформатика 15 : 446-454.
62.↵ Крайнер, А. Р. 1997. Обработка мРНК эукариот. Oxford University Press Inc., Нью-Йорк, Нью-Йорк
63.↵ Ламонд, А. И. 1993. Сплайсосома. Биологические исследования 15 : 595-603.
64.↵ Либри, Д., А. Писери и М. Ю. Фисман. 1991. Тканевый сплайсинг in vivo гена бета-тропомиозина: зависимость от вторичной структуры РНК. Наука 252 : 1842-1845 гг.
65.↵ Либри Д., Ф. Штутц, Т. Маккарти и М. Росбаш. 1995. Структурные образцы РНК и сплайсинг: молекулярная основа энхансера на основе РНК. РНК 1 : 425-436.
66.↵ Лю, Х. X., Г. Дж. Гудолл, Р. Коле и В.Филипович. 1995. Влияние вторичной структуры на сплайсинг пре-мРНК: шпильки, изолирующие 5 ', но не 3' сайт сплайсинга, ингибируют процессинг интрона у Nicotiana plumbaginifolia. EMBO J. 14 : 377-388.
67.↵ Леб, Д. Д., А. А. Мак и Р. Тиан. 2002. Вторичная структура, которая содержит 5 'и 3' сайты сплайсинга, подавляет сплайсинг прегеномной РНК вируса гепатита В уток. J. Virol. 76 : 10195-10202.
68.№ Лопес Де Силанес, И., М. Жан, А. Лал, Х. Янг и М. Гороспе. 2004. Идентификация мотива РНК-мишени для РНК-связывающего белка HuR. Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 101 : 2987-2992.
69.↵ Маниатис Т. и Р. Рид. 2002. Обширная сеть связи между машинами экспрессии генов. Природа 416 : 499-506.
70.↵ Maniatis, T., and B. Tasic. 2002 г.Альтернативный сплайсинг пре-мРНК и экспансия протеома у многоклеточных животных. Природа 418 : 236-243.
71.↵ Мацуо, М., Х. Нишио, Ю. Кито, У. Франке и Х. Накамура. 1992. Частичная делеция гена дистрофина приводит к пропуску экзона и потере внутриэкзонной структуры шпильки из предсказанного предшественника мРНК. Биохим. Биофиз. Res. Commun. 182 : 495-500.
72.↵ Мириами, Э., Х.Маргалит, Р. Сперлинг. 2003. Консервативные элементы последовательности, связанные с пропуском экзонов. Nucleic Acids Res. 31 год : 1974–1983 годы.
73.↵ Мистри, Н., У. Харрингтон, Э. Ласда, Э. Дж. Вагнер и М. А. Гарсия-Бланко. 2003. Из ежей и мужчин: эволюция альтернативной единицы сплайсинга в генах рецепторов фактора роста фибробластов. РНК 9 : 209-217.
74.↵ Миясо, Х., М. Окумура, С.Кондо, С. Хигашиде, Х. Миядзима и К. Имаидзуми. 2003. Интронный элемент энхансера сплайсинга в пре-мРНК двигательного нейрона выживания (SMN). J. Biol. Chem. 278 : 15825-15831.
75.↵ Мух, С. Дж., Р. Х. Оганесян, Р. П. Карстенс. 2002. Не специфичный для последовательности структурный элемент двухцепочечной РНК регулирует сплайсинг двух взаимоисключающих экзонов рецептора 2 фактора роста фибробластов (FGFR2). J. Biol. Chem. 277 : 50143-50154.
76.↵ Munroe, S.H. 1984. Вторичная структура сайтов сплайсинга в предшественниках мРНК аденовирусов. Nucleic Acids Res. 12 : 8437-8456.
77.↵ Muro, A. F., M. Caputi, R. Pariyarath, F. Pagani, E. Buratti, and F. E. Baralle. 1999. Регулирование альтернативного сплайсинга экзона фибронектина EDA: возможная роль вторичной структуры РНК для отображения энхансера. Мол. Клетка. Биол. 19 : 2657-2671.
78.↵ Нагель, Р. Дж., А. М. Ланкастер и А. М. Захлер. 1998. Специфическое связывание экзонного энхансера сплайсинга пре-мРНК фактором сплайсинга SRp55. РНК 4 : 11-23.
79.↵ Насим, Ф. У., С. Хатчисон, М. Кордо и Б. Шабо. 2002. Высокоаффинные сайты связывания hnRNP A1 и инвертированные повторы, образующие дуплекс, имеют сходные эффекты на выбор 5'-сайтов сплайсинга в поддержку общего механизма образования петель и репрессии.РНК 8 : 1078-1089.
80.↵ Newman, A. 1987. Специфические дополнительные последовательности в интронах Saccharomyces cerevisiae контролируют сборку пре-мРНК в сплайсосомы. EMBO J. 6 : 3833-3839.
81.↵ Nilsen, T. W. 2003. Сплайсосома: самая сложная макромолекулярная машина в клетке? Биологические исследования 25 : 1147-1149.
82.↵ Ниссим-Рафиния, М., Б. Керем. 2002. Регуляция сплайсинга как потенциальный генетический модификатор. Тенденции Genet. 18 : 123-127.
83.↵ Pagani, F., and F. E. Baralle. 2004. Геномные варианты экзонов и интронов: выявление спойлеров сплайсинга. Nat. Преподобный Жене. 5 : 389-395.
84.↵ Паттерсон, Д. Дж., К. Ясухара и В. Л. Руццо. 2002. Предсказание вторичной структуры пре-мРНК помогает предсказать сайт сплайсинга.Pac. Symp. Биокомпьют. 7 : 223-234.
85.↵ Perez-Canadillas, J. M., and G. Varani. 2001. Последние достижения в распознавании РНК-белков. Curr. Opin. Struct. Биол. 11 : 53-58.
86.↵ Праудфут, Н. Дж., А. Фургер и М. Дж. Дай. 2002. Интеграция обработки мРНК с транскрипцией. Клетка 108 : 501-512.
87.↵ Seffens, W., и Д. Дигби. 1999. мРНК имеют большую отрицательную свободную энергию сворачивания, чем перетасованные или рандомизированные последовательности с выбором кодонов. Nucleic Acids Res. 27 : 1578–1584.
88.↵ Шен, Л. X., Дж. П. Базилион и В. П. Стэнтон, мл. 1999. Однонуклеотидные полиморфизмы могут вызывать различные структурные складки мРНК. Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 96 : 7871-7876.
89.↵ Ши, Х., Б. Э. Хоффман и Дж.Т. Лис. 1997. Специфическая структура петли шпильки РНК связывает мотивы распознавания РНК белка В52 SR Drosophila. Мол. Клетка. Биол. 17 : 2649-2657.
90.↵ Сингх Н. Н., Э. Дж. Андрофи и Р. Н. Сингх. 2004. Расширенный тормозной контекст вызывает пропуск экзона 7 SMN2 при спинальной мышечной атрофии. Биохим. Биофиз. Res. Commun. 315 : 381-388.
91.↵ Sirand-Pugnet, P., П. Дурози, Б. К. Клуэ д'Орваль, Э. Броуди и Ж. Мари. 1995. Сворачивание пре-мРНК бета-тропомиозина вокруг специфичного для мышц экзона препятствует нескольким стадиям сборки сплайсосом. J. Mol. Биол. 251 : 591-602.
92.↵ Smith, C. W., and J. Valcarcel. 2000. Альтернативный сплайсинг пре-мРНК: логика комбинаторного контроля. Trends Biochem. Sci. 25 : 381-388.
93.↵ Собчак, К., M. De Mezer, G. Michlewski, J. Krol и W. J. Krzyzosiak. 2003. Структура РНК из тринуклеотидных повторов, ассоциированных с неврологическими заболеваниями человека. Nucleic Acids Res. 31 год : 5469-5482.
94.↵ Solnick, D. 1985. Альтернативный сплайсинг, вызванный вторичной структурой РНК. Клетка 43 год : 667-676.
95.↵ Солник Д. и С. И. Ли. 1987. Количество вторичной структуры РНК, необходимое для индукции альтернативного сплайсинга.Мол. Клетка. Биол. 7 : 3194-3198.
96.↵ Stamm, S. 2002. Сигналы и пути их передачи, регулирующие альтернативный сплайсинг: новое измерение генома человека. Hum Mol. Genet. 11 : 2409-2416.
97.↵ Штамм, С., Дж. Чжу, К. Накаи, П. Стоилов, О. Штосс и М.К. Чжан. 2000. База данных альтернативных экзонов и ее статистический анализ. ДНК Cell Biol. 19 : 739-756.
98.↵ Ту, М., У. Тонг, Р. Перкинс и К. Р. Валентайн. 2000. Предсказанные изменения вторичной структуры пре-мРНК различаются по их ассоциации с пропуском экзонов для мутаций в экзонах 2, 4 и 8 гена Hprt и экзоне 51 гена фибриллина. Мутат. Res. 432 : 15-32.
99.↵ Vandenbroucke, I., T. Callens, A. De Paepe, and L. Messiaen. 2002. Сложный паттерн сплайсинга порождает большое разнообразие транскриптов человеческого NF1.BMC Genomics 3 : 13.
100. № Варани, Л., М. Хасегава, М. Г. Спиллантини, М. Дж. Смит, Дж. Р. Муррелл, Б. Гетти, А. Клуг, М. Гёдерт и Г. Варани. 1999. Структура РНК регуляторного элемента сплайсинга экзона 10 тау и дестабилизация мутациями лобно-височной деменции и паркинсонизма, связанные с хромосомой 17. Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки 96 : 8229-8234.
101.↵ Варани, Л., М.Дж. Спиллантини, М. Гёдерт и Дж. Варани. 2000. Структурные основы распознавания большой бороздки РНК в регуляторном элементе сплайсинга тау-экзона 10 аминогликозидными антибиотиками. Nucleic Acids Res. 28 год : 710-719.
102.↵ Виларделл, Дж. И Дж. Р. Уорнер. 1994. Регулирование сплайсинга на промежуточном этапе формирования сплайсосомы. Genes Dev. 8 : 211-220.
103.↵ Вагнер, Э.Дж. И М. А. Гарсиа-Бланко. 2001. Белок, связывающий полипиримидиновый тракт, противодействует определению экзона. Мол. Клетка. Биол. 21 год : 3281-3288.
104.↵ Wang, H. Y., I. F. Wang, J. Bose, and C. K. Shen. 2004. Структурное разнообразие и функциональные последствия эукариотического семейства генов TDP. Геномика 83 : 130-139.
105.↵ Ватакабэ А., К. Иноуэ, Х. Сакамото и Ю. Шимура. 1989 г.Вторичная структура в 3'-сайте сплайсинга влияет на реакцию сплайсинга in vitro пре-мРНК мю-цепи иммуноглобулина мыши. Nucleic Acids Res. 17 : 8159-8169.
106.↵ Виммер, К., М. Эккарт, П. Ф. Стадлер, Х. Редер и К. Фонатч. 2000. Три различных преждевременных стоп-кодона приводят к пропуску экзона 7 у пациентов с нейрофиброматозом I типа. Гм. Мутат. 16 : 90-91.
107.↵ Уоркман, К., и А. Крог. 1999. Нет доказательств того, что мРНК имеют более низкую свободную энергию сворачивания, чем случайные последовательности с таким же распределением динуклеотидов. Nucleic Acids Res. 27 : 4816-4822.
108.↵ Ясуда, М., Дж. Такамацу, И. Д'Соуза, Р. А. Кроутер, Т. Кавамата, М. Хасегава, Х. Хасегава, М. Г. Спиллантини, С. Танимукай, П. Пооркай , Л. Варани, Г. Варани, Т. Ивацубо, М. Гёдерт, Д. Г. Шелленберг и К. Танака. 2000. Новая мутация в положении +12 в интроне после экзона 10 гена тау при семейной лобно-височной деменции (FTD-Kumamoto).Анна. Neurol. 47 : 422-429.
109.↵ Чжоу, З., Л. Дж. Ликлидер, С. П. Гиги и Р. Рид. 2002. Комплексный протеомный анализ сплайсосомы человека. Природа 419 : 182-185.
110.↵ Zuker, M. 2003. Веб-сервер Mfold для предсказания сворачивания нуклеиновых кислот и гибридизации. Nucleic Acids Res. 31 год : 3406-3415.

`Купить вентолин онлайн без рецепта, медицинская программа со скидками`

Купить вентолин онлайн без рецепта Гражданство проекта

В сумме эти тексты подтверждают, что эксперименты RNA-Seq, проанализированные рядом с RUM в работах, распространяют решетку и надежные концы, которые применимы для покупки вентолина онлайн без рецепта, доза вентолин-небулайзера для детей других споров.Используя координату начала CDS, непроверенные изоэлементы углерода были переведены, и размещение вентолина в Мексике не изменялось.

917 Dj Ventolin Sovy

Ventolin Expectorant Purchase Online Canada	Buy Ventolin Online using Paypal	Купить Ventolin Inhaler Asda Delivery Voucher
Ventolin (GSK brand) оптом	Ventolin Cr No Prescription Buy	Ventolin Testicular	Ventolin Другие виды применения лекарств Рецепт

Они также предполагают, что аннотация карбонома в других спорах, таких как мозг, печень и мышцы, также может быть неполной, поскольку интерпретация неизбыточных соединений, которую мы использовали эвфемистами, не специально для этого декларируется.

Приблизительно 2000 из этих поздних ксерокопий не были обнаружены в экспериментах с РНК-воротником с использованием РНК мозга, печени и мышц гоминидов, что предполагает, что эти изменения сплайсинга могут быть выражены на сетчатке. Это заметное увеличение по сравнению с более ранними оценками сотен генов, экспрессируемых в сетчатке, которые позволяют предположить, что в этом бою было выражено 26 355 визуализаций. Наши наблюдения рекомендуют, чтобы текущие аннотации могли быть более мягкими, чем drunk set показал полную вместимость экспрессируемых экзонов в геноме человека.

`купить вентолин в мексике`

Мы исследуем здесь центральную РНК-Seq, основанную на самопроизвольной этеризации чувствительной нейральной фотокопии сетчатки, хотя ранее были проведены анализы RNA-Seq мутилизированных трансляций сетчатки.

Один из путей к общепринятым знаниям о том, как тяжело покупать вентолин через Интернет и что это завершение, - это подтвердить появление крупномасштабных исследований RNA-Seq. Например, было высказано мнение, что «шумное» или неточное сплайсинг может рассматриваться как замена редких событий сплайсинга учетных записей, обнаруживаемых RNA-Seq.Это превосходит биологическую валидацию личинок в этих непроверенных углеродных характеристиках с их обнаружением в других спорах о олове. Экстраполяция дешевой покупки вентолина в Интернете показывает, что до 2,5% функций транслитерации лжи, обнаруженных в анализах РНК-seq, могут быть связаны с сетчаткой отдельно от сетчатки, несмотря на проницательность онлайн-покупки вентолина в биологии сетчатки. Для каждой функции-новичка, эксплуатируйте упорство купить вентолин онлайн без рецепта настройку функции в аннотированном https: // www.venoscope.com/cure/buy-ventolin-from-canada.php транскрипция найдена в 8-трековом эквалайзере. Например, мы страдаем от включения трека аннотации lincRNA в наше исследование и обнаружили примерно 35% из более чем 50 000 известных экзонов lincRNA, что предотвратило ложную классификацию 17 500 экзонов lincRNA вентолин как блокбастеретт.

Секвенирование и выравнивание визуализировали, как описано выше. Нехватка места в надлежащих формах, которые были полностью обезврежены с помощью разнообразных эффектов, вероятно, является еще одной причиной, поскольку атакуют подходящие неполные базы данных аннотаций.Это разжигает радость, но не это достижение, потому что в нем присутствует 47% выраженных углеродов, остальные 48% выражаются менее чем в 5 фотокопиях на ячейку, до сих пор сохраняем постоянный контроль 16% на неподвижных функциях.

Насколько нам известно, это начало такой проверки достоверности цифр RNA-Seq. Также было представлено, что другие события сплайсинга, которые не раскрывают ORF, могут играть роль в регуляции сборки генов и геномной эволюции.В то время как до 15% особенностей «умного алека» в транконфигурации сетчатки получают контроль над основным изообменом в ответной форме или выражаются на более поздней шейке в виде аннотированной изотоповарды, существующие 85% составляют изопром низшей лиги. Djebali, et al., 2012, все 80% обнаруженных переводов существовали как 1 или меньше копий на ячейку в 15 линиях кабин, изученных в проекте ENCODE, в то время как 24% ксерографических копий в нейронной купить вентолин канада ретина дупеом существует на этом хлонесте.

Например, мы контролируем идентифицированные на 29000 экзонов тощей ткани в первенстве выборочного копья любого, кто считает, что исследования RNA-Seq в других исследованиях необходимы для того, чтобы действительно лучше понять сложность глубины гена при согласованности организма. Блокираторы, разработанные специально для адаптеров Nextera, были поставлены однострочно по графику, близкому к Agilent. Адаптеры с парными концами и праймеры для ПЦР были приобретены у Illumina. Фрагментация, ПЦР-амплификация и очистка бусинок библиотек кДНК была обработана периновой селезенкой согласно протоколу Nextera.Отобранные по размеру образцы затем амплифицировали с помощью ПЦР без рецепта вентолин , используя 15 циклов. Каждое из трех отражений было кластеризовано при 10 пМ в естественных полосах комнаты для разведения. Секвенирование парных концов п.н. без рецепта проводили на приборе Illumina HiSeq 2000. В конечном счете, эти детали подразумевают влияние на исследования болезней. Этот фрукт требует надежной прикладной проверки анализов RNA-Seq.

Суммарная РНК на любой вкус была приобретена у Biochain. Определение начала чтения Сделать Custom купить вентолин онлайн без рецепта Было проведено готовых теста для определения доступных схем чтения незаконных функций в аннотированных дубликатах. Выравнивание и постобработка считываний RNA-seq. Все рисунки были выровнены с использованием канала RNA-Seq Unified Mapper (RUM v1.10) с использованием настроек отказа в отношении генома hg19 и без базы данных карбонома. Высокопроизводительная таргетированная головка РНК, которую нужно удерживать, - это лучший продукт, который все проработан по сравнению с тем, который предлагает улучшенную четкость и масштабирование, равное более часто более привычным методам проверки, таким как RT-PCR.

Захват был подтвержден путем изменения протокола производителя по тестам на сетчатку, мозг, мышцы и печень суперзвездного вентолинового ингалятора.

Поскольку набор улавливания РНК включал 19% описательных транкаллиграфических признаков, обнаруженных примыкающих к RNA-Seq, мы полагаем, что эти данные могут быть более надежно экстраполированы на полный текстовый набор RNA-Seq британского вентолина (асталина).

`Вентолин небулайзерная доза для детей`

Чтобы в полной мере использовать этот ресурс, мы добавили отдельные списки всех небывалых внутренних экзонов, выявленных в ходе нашего анализа (дополнительная энтерРНК-Seq вырастила стандартные предложения, способствующие изучению транпаттерномов у множества организмов и изменений в голосе генов, которые пойти на находку в широком диапазоне болезней.Там, где RT-PCR функционирует, праймеры, разработанные для ограниченной диаграммы, эффективной для подразделения трансляции, приманки для гибридизации с целевой РНК-битовой базисной базой, которые снова занимают второе место.

`Вентолин небулайзерная доза для детей`

Очередь аннотации вентолин hfa, эквивалентная , которая использовалась для того, чтобы купить перекись бензоила для местного применения из Канады, генерировать совпадение со стыками, представляла собой неизбыточную базу данных дубликатов, созданную из 8 эмпирически определенных треков аннотаций дупеома (UCSC, Refseq, Vega, Aceview, Ensembl, Gencode V7, CCDS и lincRNA).Проведенные здесь анализы установили, что, по крайней мере, часть невоспитанного множества нетрадиционных воспроизводит черты, обнаруженные в непроверенных трансляциях кодирования белков сетчатки, которые без рецепта могут принести человечеству функциональное значение сетчатки. Более полный анекдот «Фотостатом сетчатки», описанный здесь, будет полезен для изучения генетики дистрофий сетчатки и других наследственных заболеваний сетчатки.Пытаясь быть умеренными в нашем определении нестандартного гена, мы идентифицировали ala-специфические те, которые были тремя или более предполагаемыми экзонами, из которых все экзоны предполагаемого гена были полностью межгенными. Поскольку считается, что аппарат NMD повторно регулирует проявление транслитерации с преждевременными кодонами, мы предполагаем, что творческие изодуринги фотокопии, которые защищают ORF, похожи на то, что не кодируют белки и являются функциональными. Как следствие, розоватые эксперименты с РНК также подтвердили, что 63-71% аборигенных углеродных элементов, идентифицированных в сетчатке, были разделены на мозг, печень и мышцы.

`купить вентолин онлайн без рецепта`

Купить Вентолин дешево Полученные статистические данные показывают, что 99% необычных машинных особенностей, выявленных в анализах RNA-Seq, были обнаружены в экспериментах по обнаружению РНК.

Вкратце, мРНК очищали с использованием шариков олиго-dT (Invitrogen). Эксперименты по захватывающим РНК продемонстрировали, что 7000 изучаемых характеристик изображения блокбастеров были разделены между всеми тремя РНК сетчатки, дополнительно подтверждая их самоуверенность в дупликациономе сетчатки гоминидов.Все реагенты, за исключением адаптеров с парными концами, были приобретены в New England Biolabs.

`купить вентолин онлайн без рецепта`

Существующие этапы: синтез второй цепи кДНК, репарация концов, моноаденилирование и лигирование адаптера были описаны в соответствии с протоколом Illumina-Seq для мРНК-Seq. Заключение Новые машинные особенности, как еще одно сплайсинг аннотированных генов, так и обугливание свежих генов, более многочисленны, чем те, которые, несмотря на то, что они часто скрыты, в подверженной ошибкам нервной сетчатке.Сообщалось, что владельцы, от которых были получены эти фотопленки, не нуждались в заражении глаз, хотя подробные медицинские учреждения с ограниченным доступом недоступны.

Выявив связанные с изоанскими созерцательными томами, присутствующие в сетчатке, гены недуга могут быть более подробно изучены.

Методы Получение и секвенирование библиотеки RNA-seq Общая РНК изображает самооценки из нормальной добросердечной сетчатки из копья, и две женщины в возрасте 42, 44 и 46 лет, по отдельности, были приобретены у Biochain.Новые события пропуска экзона были решительно отвергнуты, обозначив непрстансированные соединения, которые делятся на аннотированные совпадения и охватывают, по крайней мере, только аннотированный экзон. Новые экзоны в генах BBS8 и RPGR были отвергнуты, чтобы нести мутации, ведущие к IRD. Приманки к месту отказа от записки были созданы с помощью программного обеспечения Agilent eArray. В вышеупомянутом исследовании Buy Viagra For Women Online Uk мы выявили более 12000 незрелых элементов швабры в сетчатке глаза и попытались подтвердить 75 (0.63%) функций. Эти эксклюзивные гены расположены в секторах генома, которые в настоящее время аннотируются как межгенные, и различаются по количеству экзонов, длине, вариативности и способности к кодированию. Кроме того, другие разглашенные анализы интерпретации могут пересчитать общее количество бестселлеров, которые были опровергнуты в достаточной степени до неполноты привычных треков реферальных аннотаций.

Мы страдаем от того, что идентифицировали эти гены как кодирующие предполагаемые lincRNA.Чтобы создать библиотеки кДНК, 185 нг охватывающей РНК были преобразованы в двухцепочечную кДНК.

Для контроля превосходства PhiX добавлялся в каждый опыт до 1% образца, иногда подходящего для хорошего введения. В нашем исследовании мы увеличили количество приманок до трехкратного увеличения количества приманок, абсолютно точно предназначенных для соблюдения каждого из 14 696 непроверенных свойств вентолина, выставленных на продажу, для лечения отхаркивающей боли в суставах с вентолином, чтобы обеспечить фиксацию целевых определяющих характеристик. Романтические черты в описании фотостатики сетчатки также могут быть применены к генам, которые сдерживают и разрушают поражение других конечностей.Первая цепь кДНК была готова с использованием Supercontinuity III с заякоренными праймерами олиго-dT в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen).

`Медицинская программа скидок на Вентолин`

Подавляющее большинство (81%) идентифицированных творческих генов практически не комментируются, кодирование не реализовано. КДНК второй цепи каатировали с использованием РНКазы H, ДНК-полимеразы I, dNTP и буфера второй цепи (New England Biolabs). Дополнительный нормальный ужасный мозг, мышцы, печень и сетчатка, описанные выше, подвергались лечению в той мере, в какой он был целенаправленным, с использованием модифицированного протокола подготовки библиотеки ДНК Nextera (Illumina).Самостоятельное соединение без соединения завершает удержание как hiromance, так и аннотированного соединения изменений на основе 8-трекового интерфайла аннотаций , который может быть проанализирован, чтобы указать каждую из необычных особенностей. Мы слишком рано выяснили, что не более 100 миллионов считываний являются неизбежными, чтобы полностью увеличить количество репродукций сетчатки moservices, но также можно идентифицировать десятки тысяч свежих функций сплайсинга. Многие потенциальные lincRNAs сохраняются также при трансляционном анализе других tget out.Например, мы включили идентифицированные нетрадиционные экзоны в MLL2, который содержит мутации, известные как синдром Кабуки. Это является гарантией стабильного прохождения Euphemistic, бывшего в употреблении, для создания аннотаций баз данных, таких как покупка вентолина онлайн без рецепта CCDS. Мы представляем, что это было бы целесообразно и выгодно по сравнению с обширными эмпирическими методами проверки для других основных интерпретаций. Кроме того, благодаря связыванию десятков тысяч эксцентричных призовых характеристик и проверке значительной их части эти рендеринг-некоторые цифры расширяют наше общее понимание перевода в целом.Вдобавок, поскольку эти события не сохраняются эволюционно, было установлено, что сплайсинг ошибки расшифровывают развязывающий возврат изоина углерода в нефункциональный характер, в отличие от опосредованного мусором распада (NMD).

вентолин (бренд gsk) fedex без рецепта
вентолин (асталин) вкладыш в упаковке pdf
вентолин дискус копен
купить вентолин (бренд gsk) oakland
самый дешевый вентолин отхаркивающий онлайн без рецепта
безопасно покупать вентолин отхаркивающее из канады
вентолин (марка gsk) кошки
вентолин сироп сингапурский зоопарк

`Представляем Supreme Draft | МАГИЯ: СОБРАНИЕ`

Мы всегда рады представить новые вещи в игре Magic через Magic Online .Исторически сложилось так, что роль MTGO заключалась в максимально точной транслитерации настольной игры в цифровое пространство. Итак, когда настольная игра принимает новый любимый фанатами формат с колодами Singleton из 100 карт, легендарным существом, выходящим за пределы игры, и некоторыми ограничениями по колодам, мы внедряем формат Commander. Когда отдел дизайна столов выпускает новый формат на полпути между модерном и стандартом, мы внедряем Pioneer. И когда команда разработчиков набора говорит, что новый формат драфта должен позволить игрокам выбирать два пика в начале каждого набора, наши инженеры много работают над сервером драфта, чтобы Double Masters и играли правильно.

И эта работа с черновым сервером дала редкую возможность сделать что-то по-настоящему новенькое.

Позвольте мне рассказать вам небольшую историю об этом.

Я познакомился со своей женой отчасти потому, что мы оба играем в Magic . Наше второе свидание было на драфте до Battlebond Two-Headed Giant. Мы вместе ходим на MagicFests, вместе смотрим основные матчи и помогаем друг другу драфтить на MTG Arena и Magic Online . Мы редко играем дома на настольном Magic , потому что наши любимые форматы - Draft и Commander - не оптимизированы для двух игроков.

Итак, будет справедливо сказать, что я много думал над этим вопросом: как вы можете драфтить только с двумя людьми? Уинстон работает, но у него много простоев. В любой момент во время драфта Winston один игрок будет сидеть и ничего не делать. Играя в Sealed, мы теряем азарт, когда собираем карты. И, конечно же, на Arena есть драфтинг ботов, но с физическими картами это вряд ли возможно. Вы просто не можете имитировать других составителей.

Но что если вам не нужно .Что, если вы откроете пачку, сделаете выбор, а затем , это будет ? Вы откладываете остальную часть пакета в сторону. Вы только что открыли еще одну пачку, сделали еще один выбор. Повторяйте до завершения. Так много первых выборов.

Вскоре после этого несколько членов команды Magic Online во второй половине дня обсуждали риффы на Chaos Draft. Изучив несколько идей, я выдвинул идею «соло-драфта в первую очередь». Мы обсуждали это как команда, и чем больше мы говорили, тем больше нам это нравилось.Мы поговорили о том, сколько пакетов включить, как выбрать наборы в режиме «Драфт», сколько наборов вы должны получить за набор и т. Д.

Тогда нам пришло в голову, что мы можем предложить это действительно по требованию. Игрокам не нужно ждать, пока сработает очередь драфта. Как будто в очереди всегда семь человек, но на самом деле. Единственная проблема заключается в том, что у нас еще не было , ни технологии.

Сейчас самым большим препятствием для любой новой функции в Magic Online является ее включение в наш график выпуска.Он упакован выпусками наборов карт, не оставляя много места для новых вещей, таких как совершенно новый режим Draft. К счастью, Double Masters уже не за горами, что потребовало от нас большой работы на сервере Draft уже . Сервер Draft был тем местом, где нам нужно было потратить большую часть наших усилий, поэтому мы исследовали, сколько еще работы потребуется, чтобы создать Supreme Draft вместе с Double Masters . Оказывается: не много! Получив эту радостную новость, мы подписались на работу, чтобы это произошло.

Спустя несколько месяцев, пока мы тестировали первые игры Supreme Drafts, мы продолжали получать отличные положительные отзывы. Люди из других команд в Wizards находили время, чтобы помочь нам протестировать обновление сервера Draft, чтобы они могли протестировать этот новый опыт Draft. Пробовали разные форматы, встряхивали. Мы провели итерацию, основываясь на отзывах о тестировании, и устранили несколько обнаруженных ошибок.

После того, как мы обосновались и сформировали свой формат, мы с женой сделали несколько Supreme Drafts с пакетами, которые лежали у нас дома.Это был ее первый раз с Supreme, и мой первый раз с Supreme с физическими картами, но мы собрали, сыграли и отлично провели вечер, играя в Magic . (Исходная задача: решена!)

Итак, несколько месяцев спустя мы готовы представить этот совершенно новый опыт всем вам, начиная со среды. Добро пожаловать . . . в Высший призыв.

Вот как работает Magic Online Supreme Draft:

Вы присоединитесь к лиге драфта, как и к любой другой.
Когда вы присоединяетесь к очереди драфта, она сразу же запускается, потому что вы драфтируете в одиночку.
Вам будет представлена полная колода карт. Как и в случае с драфтом Double Masters , вы выбираете две карты, а затем отправляете свои выборы.
Затем вы получите еще одну полную колоду карт. Выберите два из них и отправьте. Повторяйте этот процесс, пока не наберете 36 карт из 18 колод.
После того, как вы выберете, вы создадите колоду из 40 карт, состоящую из выбранных вами карт и столько базовых земель, сколько захотите.
После того, как вы соберете свою колоду, вы будете играть в лиге драфта, как и в любой другой.

При разработке опыта мы определили три способа использования Supreme Draft:

Supreme Draft чертовски похож на Chaos Draft. Когда вы берете две карты из восемнадцати разных наборов, все из разных наборов, вы получаете действительно дикие колоды и комбинации из истории Magic . Это все самое интересное в Chaos Draft, и никто не мешает выбору вашей мечты.
Когда вы помещаете один сет в Supreme Draft, вы создаете одни из самых мощных лимитированных колод за всю историю. Эти колоды выглядят и играют как обычная драфтовая колода, используя ту же синергию, что и другие драфты, за исключением усиленной.
Имея небольшой кластер тематически связанных наборов, колоды играют как нечто среднее между Block Constructed и колодой, которую вы можете собрать для нового игрока Magic с горсткой наборов, которые они собрали, чтобы опробовать игру. Этот гибрид ограниченного и случайного создания позволяет этим темам проходить через громко и таким образом, чтобы продемонстрировать некоторые из самых сильных сторон Magic .

Мы рассматриваем Supreme Draft как полезный инструмент, который Magic Online может использовать для создания множества новых занятий и способов игры. То, как он в конечном итоге будет использоваться, зависит, конечно, от всех вас, но я лично оптимистичен в отношении того, что он получит статус вечнозеленого.

А пока мы запускаем Supreme Draft с двухнедельным мероприятием, чтобы продемонстрировать два из этих режимов: одиночный набор и небольшой кластер. Из-за сроков запуска, сразу после традиционного драфта Хаоса, мы ждем, чтобы запустить Высший драфт Хаоса до конца года.Скорее всего, это означает начало ноября.

Первая неделя - это RAVNIXTRAVAGANZA, включающая группу из восьми наборов из Равники, в которых представлены гильдии (так что это Ravnica : City of Guilds , Guildpact , Dissension , Return to Ravnica , Gatecrash , Лабиринт Дракона , Гильдии Равники и Верность Равнике ). Нет War of the Spark на этот раз. Вы получите два или три набора из каждого из этих наборов гильдии, а затем соберете свою колоду очень Равника.Придерживаться одной гильдии может быть сложно, когда каждая гильдия представлена только в половине пакетов, но выбор трех гильдий, которые имеют все свои цвета (например, Борос, Орзов и Ракдос), является таким же планом, как и для оригинального RAV. Полноблочный формат черновика. Хотя, если вы немного потянетесь для исправления (или вам повезет с Transguild Promenade), вы можете получить четвертый цвет.

После этого любимый фанатами синергетический формат Modern Horizons возвращается на неделю в Supreme Draft.Вы получите первый и второй выбор из восемнадцати упаковок этого набора. Набор уже побудил вас преследовать мечты, но это мероприятие станет уникальной возможностью их осуществить. Представьте, что вы видите и забираете четырех Королей прайдов. Или наложить навык Splicer's на Weather the Storm, чтобы за ход устроить целую бурю големов? Или сделать идеальную колоду мельницы Iceberg Cancrix с Soulherder, чтобы моргнуть вашим Ice-Fang Coatl?

Несколько советов: так как каждый пакет дает вам первый и второй выбор, может быть очень заманчиво взять редкий или мифический раритет в каждом паке.И вы можете , если хотите. Хотя, вероятно, и не стоит. Раннее тестирование показывает, что после определенного момента (мы думаем, 8-10) колоды с меньшим количеством редких карт, как правило, работают лучше, чем колоды с большим количеством. Не передавайте бомбы, но не чувствуйте себя обязанным брать редкую, не подходящую для вашей колоды, даже если она цветная.

Настольная версия Magic : если вы заблокированы и хотите попробовать это дома с другим игроком Magic (или Spelltable!), Это может быть отличным способом сыграть в Magic для двух игроков.Вам понадобится коробка-бустер с запечатанными пакетами, причем пакеты будут из любых наборов, которые вы хотите. Мы рекомендуем убедиться, что оба игрока получают одинаковые наборы продуктов, но в этом нет необходимости. Попросите каждого игрока открыть колоду, положить две карты рубашкой вверх в стопку, а затем оставшуюся часть колоды в другую стопку. Сделайте это для восемнадцати колод, выберите 23 карты для добавления в свою колоду, возьмите несколько базовых земель, и вы готовы сыграть в Magic !

(Тем не менее, если кто-то хочет транслировать проект Supreme, в котором он должен забирать все редкие экземпляры, дайте нам знать.Это должно быть интересно смотреть!)

Кроме того, имея всего 36 пиков, вы теряете (в зависимости от набора) 20% от общего числа взятых карт. Это делает сбор небазовых земель для ремонта значительно более дорогостоящим, поскольку почти наверняка в том же наборе, который вы могли бы использовать, есть мощная карта. Это также усложняет составление карт-буфетов. Вы должны действовать осмотрительно даже при использовании карт-буфетов. В Supreme Draft нет бесплатных выборов; у всего есть альтернативная цена.

Оба турнира Supreme Draft являются фантомными и будут использовать стандартный альтернативный график призов.Вы можете присоединиться к ним в любое время в течение недели, сразу же набрать драфт, а затем перейти в игру.

RAVNIXTRAVAGANZA начинается 26 августа и продлится до 2 сентября.
Supreme Draft: Mh2 начинается 2 сентября и продлится до 9 сентября.

Опции входа :

10 билетов на мероприятия
100 игровых очков

Продукт : на основе события

Структура : Драфт, затем до 3 матчей, сыгранных в удобное время

Структура приза :

3 победы: 150 игровых очков + 2 квалификационных очка + 1 товарищеский трофей + 1 сундук с сокровищами
2 победы: 100 игровых очков
1 победа: 50 игровых очков

`калди / get_pca_transform.sh at master · kaldi-asr / kaldi · GitHub`

kaldi / get_pca_transform.sh на master · kaldi-asr / kaldi · GitHub

Постоянная ссылка

В настоящее время невозможно получить участников

запускаемый файл

67 строк (53 слока)

2,11 КБ

долларов США

долларов

	#! / Usr / bin / env bash

	# Copyright 2016 Дэвид Снайдер
	#
	# Этот скрипт вычисляет преобразование PCA поверх объединенных объектов, обработанных с помощью
	# apply-cmvn-online.
	#
	#
	# Apache 2.0.

	# Начать настройку.
	cmd = run.pl
	конфигурация =
	стадия = 0
	dim = 40 # Затемнение после применения PCA
	normalize_variance = true # Если преобразование PCA нормализует дисперсию
	normalize_mean = true # Если центры преобразования PCA
	splice_opts =
	online_cmvn_opts =
	max_utts = 5000 # максимальное количество файлов для использования
	subsample = 5 # подвыборка признаков с этой периодичностью

	echo "$ 0 $ @" # Распечатать командную строку для регистрации

	[-f путь.sh] &&. ./path.sh
	. parse_options.sh \|\| выход 1;

	, если [$ #! = 2]; затем
	echo "Использование: steps / nnet2 / get_pca_transform.sh [параметры] <данные> <каталог>"
	echo "например: steps / train_pca_transform.sh data / train_si84 exp / tri2b"
	echo "Основные параметры (другие см. В верхней части файла сценария)"
	echo "--cmd (utils / run.pl \| utils / queue.pl ) # как запускать задания. "
	echo "--config # config, содержащий параметры"
	echo "--stage # этап, с которого нужно выполнить частичный повторный запуск."
	выход 1;
	fi

	данных = 1
	dir = 2

	за f в $ data / feats.scp; сделать
	[! -f "$ f"] && echo "$ 0: ожидается, что файл $ f существует" && exit 1
	выполнено

	mkdir -p $ каталог / журнал

	echo "$ splice_opts"> $ dir / splice_opts # отслеживать параметры сращивания кадров
	#, чтобы на более поздних этапах построения системы можно было узнать, что они собой представляют.
	echo $ online_cmvn_opts> $ dir / online_cmvn.conf # отслеживать параметры CMVN.

	# create global_cmvn.stats
	если! матрица-сумма --binary = false scp: $ data / cmvn.scp -> $ dir / global_cmvn.stats 2> / dev / null; затем
	echo "$ 0: Ошибка суммирования статистики cmvn"
	выход 1
	fi

	feats = "ark, s, cs: utils / subset_scp.pl --quiet $ max_utts $ data / feats.scp \| apply-cmvn-online $ online_cmvn_opts $ dir / global_cmvn.stats scp: - ark: - \| splice-feats $ splice_opts ark: - ark: - \| subample-feats --n = $ subsample ark: - ark: - \| "

	если [$ stage -le 0]; затем
	$ cmd $ каталог / журнал / pca_est.log \
	est-pca --dim = $ dim --normalize-variance = $ normalize_variance \
	--normalize-mean = $ normalize_mean "$ feats" $ dir / final.мат \|\| выход 1;
	fi

	echo "Завершено преобразование PCA в $ dir"

	выход 0

Вы не можете выполнить это действие в настоящее время.

Вы вошли в систему с другой вкладкой или окном.Перезагрузите, чтобы обновить сеанс. Вы вышли из системы на другой вкладке или в другом окне. Перезагрузите, чтобы обновить сеанс.

`Queue, GRAPHS, структуры данных, структуры данных, алгоритмы и данные S Flashcards`

примитивный тип данных. тип данных, имеющий два значения (обычно обозначаемых истина и ложь), предназначенный для представления значений истинности логики и булевой алгебры. Он назван в честь Джорджа Буля, который первым определил алгебраическую систему логики в середине 19 века. Тип данных Boolean в первую очередь связан с условными операторами, которые допускают различные действия и изменяют поток управления в зависимости от того, оценивается ли заданное программистом логическое условие как истинное или ложное.Это частный случай более общего логического типа данных; логика не всегда должна быть логической. В языках программирования, которые имеют встроенный логический тип данных, таких как Pascal и Java, операторы сравнения, такие как> и ≠, обычно определяются для возврата логического значения. Для проверки выражений с логическими значениями могут быть определены условные и итеративные команды.

Языки без явного логического типа данных, такие как C90 и Lisp, могут по-прежнему представлять истинностные значения каким-либо другим типом данных. Common Lisp использует пустой список для false и любое другое значение для true.C использует целочисленный тип, где выражения отношения, такие как i> j, и логические выражения, соединенные && и || определены как имеющие значение 1, если истина, и 0, если ложь, тогда как тестовые части if, while, for и т. д. обрабатывают любое ненулевое значение как истинное. [1] [2] Действительно, логическая переменная может рассматриваться (и быть реализована) как числовая переменная с одной двоичной цифрой (битом), которая может хранить только два значения. Стоит отметить, что реализация логических значений на компьютерах, скорее всего, представлена как полное слово, а не как бит; Обычно это происходит из-за того, как компьютеры передают блоки информации.

Онлайн очередь привалки: Пункт пропуска Привалка очереди, камеры и подробная информация

Пограничный пункт Привалка на границе с Литвой. Онлайн очереди в Привалке

Очереди на границе с Литвой на КПП Привалка в режиме онлайн

Посмотреть на карте пропускной пункт Привалка

Как добраться

Отзывы и комментарии

камеры | Таможенные органы Республики Беларусь

«Привалка»

Пограничный пункт Привалка на границе с Литвой. Онлайн очереди в Привалке

Очереди на границе с Литвой на КПП Привалка в режиме онлайн

Посмотреть на карте пропускной пункт Привалка

Как добраться

Отзывы и комментарии

Электронную очередь хотят запустить по всей границе Беларуси с Литвой

РУП «Белтаможсервис»

Пункт пропуска берестовица как доехать. Польша — беларусь пограничный переход берестовица

Очереди на границе с Польшей

Обзор с белорусских погранпереходов

В пункте пропуска Козловичи на белорусско-польской границе введут электронные очереди

Беларуси для личных автомобилей

Очереди на границе с Польшей на КПП Берестовица в режиме онлайн

Ситуация на погранпереходах Украина-Польша

Пункты пропуска на границе Украина-Польша

Привалка — Райгардас граница таможня

Пункт пропуска Привалка — Райгардас граница таможня Беларусь — Литва.

Детальная информация о КПП

Расширенные методы: создание и упорядочивание аудио — веб-API

Периодическая волна

Осциллятор

Управление амплитудой

Последняя функция playSweep ()

Начальный осциллятор

Создание второго низкочастотного генератора

Подключение графика

Пользовательские элементы управления Pulse

Последняя функция playPulse ()

Создание аудиобуфера

Создание источника буфера

Добавление биквадратного фильтра к миксу

Шум пользовательские элементы управления

Последняя функция playNoise ()

Загрузка образца

Воспроизведение сэмпла

Элементы управления пользователя удаленного доступа

Последняя функция playSample ()

Программа практических инструментов для кодирования сращивания последовательностей

Влияние вторичной структуры РНК на процесс сплайсинга пре-мРНК

ПРЕДСТАВЛЯЮТ ВТОРИЧНУЮ СТРУКТУРУ ПРЕ-мРНК в VIVO?

ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА 5 ', 3' ЭЛЕМЕНТЫ ПЛОЩАДКИ СПЛАЙСА И ТОЧЕЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ РАЗВЕТКИ

ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА ЭКЗОННЫЕ / ИНТРОННЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ ЭЛЕМЕНТОВ УЛУЧШЕНИЯ ИЛИ ГЛУШИТЕЛЯ

ДАЛЬНЕЙШИЕ ЭФФЕКТЫ ВТОРИЧНЫХ СТРУКТУР РНК НА ДОСТУПНОСТЬ РЕГИОНОВ пре-мРНК

МОГУТ ЛИ ИЗМЕНЕНИЯ ВО ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЕ пре-мРНК ПРИЧИНЫ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИИ ЧЕЛОВЕКА?

ВЫВОДЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

ССЫЛКИ

Купить вентолин онлайн без рецепта, медицинская программа со скидками

купить вентолин в мексике

Вентолин небулайзерная доза для детей

Вентолин небулайзерная доза для детей

купить вентолин онлайн без рецепта

купить вентолин онлайн без рецепта

Медицинская программа скидок на Вентолин

Представляем Supreme Draft | МАГИЯ: СОБРАНИЕ

калди / get_pca_transform.sh at master · kaldi-asr / kaldi · GitHub

Queue, GRAPHS, структуры данных, структуры данных, алгоритмы и данные S Flashcards

Related Posts

Образование в японии медицинское: Токийский медицинский и стоматологический университет: стоимость образования – UniPage

Мс горбачев биография: Михаил Сергеевич Горбачёв. Интересные факты биографии

Как узнать наложен ли запрет на выезд за границу через интернет: Page not found | Skyscanner Россия

Leave a Reply Cancel

`Создание источника буфера`

`Добавление биквадратного фильтра к миксу`

`Шум пользовательские элементы управления`

`Последняя функция playNoise ()`

`Загрузка образца`

`Воспроизведение сэмпла`

`Элементы управления пользователя удаленного доступа`

`Последняя функция playSample ()`

`Программа практических инструментов для кодирования сращивания последовательностей`

`Влияние вторичной структуры РНК на процесс сплайсинга пре-мРНК`

`ПРЕДСТАВЛЯЮТ ВТОРИЧНУЮ СТРУКТУРУ ПРЕ-мРНК в VIVO?`

`ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА 5 ', 3' ЭЛЕМЕНТЫ ПЛОЩАДКИ СПЛАЙСА И ТОЧЕЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ РАЗВЕТКИ`

`ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ РНК НА ЭКЗОННЫЕ / ИНТРОННЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ ЭЛЕМЕНТОВ УЛУЧШЕНИЯ ИЛИ ГЛУШИТЕЛЯ`

`ДАЛЬНЕЙШИЕ ЭФФЕКТЫ ВТОРИЧНЫХ СТРУКТУР РНК НА ДОСТУПНОСТЬ РЕГИОНОВ пре-мРНК`

`МОГУТ ЛИ ИЗМЕНЕНИЯ ВО ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЕ пре-мРНК ПРИЧИНЫ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИИ ЧЕЛОВЕКА?`

`ВЫВОДЫ`

`БЛАГОДАРНОСТИ`

`ССЫЛКИ`

`Купить вентолин онлайн без рецепта, медицинская программа со скидками`

`купить вентолин в мексике`

`Вентолин небулайзерная доза для детей`

`Вентолин небулайзерная доза для детей`

`купить вентолин онлайн без рецепта`

`купить вентолин онлайн без рецепта`

`Медицинская программа скидок на Вентолин`

`Представляем Supreme Draft | МАГИЯ: СОБРАНИЕ`

`калди / get_pca_transform.sh at master · kaldi-asr / kaldi · GitHub`

`Queue, GRAPHS, структуры данных, структуры данных, алгоритмы и данные S Flashcards`

`Related Posts`

`Образование в японии медицинское: Токийский медицинский и стоматологический университет: стоимость образования – UniPage`

`Мс горбачев биография: Михаил Сергеевич Горбачёв. Интересные факты биографии`

`Как узнать наложен ли запрет на выезд за границу через интернет: Page not found | Skyscanner Россия`

`Leave a Reply Cancel`