Как продлить пропуск в зону ато в электронном виде: Как оформить и сделать электронный пропуск в зону АТО в 2023 году

за провоз «серого» зерна из России отвечать приходится экспортерам

Вот уже несколько лет власти страны не могут решить проблему так называемого серого импорта зерна. Ежегодно в Казахстан, по оценкам экспертов, попадает до двух миллионов тонн контрабандной пшеницы. Проблема, считают они, в «дырявой» границе. Прежде всего, в элементарном отсутствии электронных весов на погранпунктах и в многолетней привычке чиновников — приписывать урожай, которого по факту нет. Этим и пользуются  нечистые на руку фермеры. При этом несуществующие объемы они просто заполняют российским зерном. Корреспондент BaigeNews.kz о том, почему так происходит и как можно решить эту проблему.

Проблема в том, что соседи сбивают нам цену на пшеницу. Из-за недобросовестной конкуренции в проигрыше не только честные аграрии, но и экспортеры. Последних, к слову, обвиняют в провозе чужой пшеницы по казахстанским документам и в незаконном возврате НДС. Многим из них предъявлены многомиллионные иски. Однако сами  экспортеры уверены, что во всей этой ситуации их просто делают крайними. Говорят, что чиновники хотят переложить на них всю ответственность за свои просчеты и провальную работу. Пока же в стране действует временный запрет на ввоз пшеницы автотранспортом. Срок ограничений истекает через 3 месяца.

Бизнесмен из Костаная Алексей Коростылёв вот уже шесть лет экспортирует казахстанскую пшеницу в Узбекистан и Афганистан. За это время, говорит он, удалось выстроить доверительные отношения с партнерами. Однако теперь зарекомендовавшая себя на рынке компания рискует просто обанкротиться. Причина в претензиях фискалов.

«Первый иск фирме налоговики предъявили в 2018 году. Фермер привез нам пшеницу, предоставил все документы с синими печатями, все было легально. Мы подписали в бухгалтерии. Но, тем не менее, через полгода Управление госдоходов подало иск о признании сделки недействительной. После чего нас обязали выплатить доначисленный нам КПН (корпоративный подоходный налог). Это около 2,5 миллионов тенге. В этом году история повторяется, хотя мы не фирма однодневка, у нас хорошие обороты, мы приносим валютную выручку стране, тем не менее, в этом году нас снова подозревают в фиктивных сделках. На данный момент у нас уже два иска. Общая сумма – свыше ста миллионов тенге. С этой суммы мы должны еще 20 % оплатить в доход государства – КПН», — негодует экспортер.

Предъявленный иск компания Коростылёва намерена оспаривать и дальше. Сумма, говорит он, просто неподъемная. Бизнесмена возмущает то, что налоговики  игнорируют имеющиеся у экспортеров доказательства. Это документы: товарно-транспортные накладные о перевозке, договоры, электронные счета-фактуры, чеки, подтверждающие оплату и факт поставки зерна.

«Зерно мы по факту отгрузили, то есть в Узбекистан, Афганистан экспортировали. Все экспортные декларации, вся документация, фитосанитарный контроль — все это есть. Но, тем не менее, суд, УГД не учитывают этот факт. Просто по шаблону «штопают» обвинительные акты и нас не слушают. Наверное, каждый второй экспортер в нашем городе, в нашей области на разные суммы получал иски. Мы же коллеги, все в чате общаемся, знаем о ситуации. Нам приходится сейчас просто отсиживаться, так как счета заблокированы. На суммы, превышающие порядка 30-40 миллионов тенге», — делится Алексей Коростылёв.  

По его словам, для сбыта контрабандного зерна чаще всего недобросовестные трейдеры открывали так называемые фирмы-однодневки. Среди них были и иностранцы.

«Мы знаем, нерезиденты, которые являются потенциальными покупателями пшеницы, открывают компании в Казахстане на наших граждан или даже на себя. Плотно работают, завозят, в том числе, и импортное зерно под казахстанскими документами. Могут год проработать.  Знаю компании, учредители которых граждане Узбекистана и Афганистана, но в данном случае им ничего не грозит. У них миллиардные обороты, максимум, их могут депортировать или счета заблокировать. А с нами даже разбираться не хотят», — уверен экспортер.

По мнению заместителя председателя национальной Ассоциации экспортеров «KazGrain» Алибека Атай, контрабандное зерно и ранее попадало в страну, но не в таких масштабах. Однако около пяти лет назад рынок буквально начал ощущать этот поток.

«Несколько лет назад Россия увеличила субсидии в АПК, выросла урожайность, соответственно, им некуда было сбывать зерно. Для этого понадобились новые рынки. Примерно с 2018-2019 годов мы ощутили, что к нам заходит дешевая пшеница. Российская была на тот момент даже дешевле нашей наполовину. То есть разница в цене доходила до 50%. Сейчас это 30 %. В этой схеме, я считаю, были «завязаны» и таможенники, погранцы, те же самые, транспортная полиция, все они «кормились», все в деле. Поэтому закрывали глаза на все это», — отмечает Алибек Атай.

Эксперт считает, что основной пик серого импорта пришелся на 2019-2021 годы. Он не исключает, что именно тогда для этого массово подделывали документы. Казахстанские аграрии также ощутили на себе последствия недобросовестной конкуренции.

«Когда начало бить рублем по нашим аграриям, они, наконец, начали шуметь, поняли, что не справляются. С этого года в правительстве взялись за это, начали ограничивать, ставить всякие препоны на границе, документы требовать, которые должны были быть еще в 2018 году. Официально государство говорит: из России зашло 1,5 миллионов зерна. Эту цифру можно смело умножать на 2. К примеру, официально камаз завозит 23 тонны. Это легально, по документам, а сверху 18 тонн у него серого зерна», — говорит Алибек Атай.

Проверить, соответствует ли заявленный в документах объем фактическому, казахстанские таможенники пока не могут. Пункты не оборудованы электронными весами. При этом, считает представитель национальной Ассоциации экспортеров, от серого импорта бюджет страны ежегодно недополучает колоссальные суммы в виде валютной выручки.    

«Мы сразу теряем КПН, теряем НДС, то есть это 20% и 12 %, соответственно.  То есть 32 % от стоимости пшеницы наш бюджет теряет. Грубо говоря, если пшеница стоит 200 долларов, то получается 32 доллара мимо бюджета проходит.  Это очень колоссальные деньги, если  учитывать, что до 2 миллионов серого зерна заходит к нам, это очень большие суммы в итоге получаются именно в валюте», — поясняет зампред Ассоциации.

Недобросовестные импортеры сбивают цену на пшеницу внутри страны. Из-за этого и им приходится продавать казахстанское зерно дешевле. 

«То есть то, что мы должны были, условно, по 250 долларов продать, нам приходится отправлять по 220-230 долларов из-за того, что из России заходит «серое» зерно. Мы тоже вынуждены были покупать зерно у фермеров за меньшую цену, от этого и они страдают, потому что недополучают этот доход. Выигрывали только птицеводы и те, кто занимается скотоводством. Для них это дешевые корма. Ни для кого не секрет, что на приграничных территориях в Павлодарской, Абайской, Восточно-Казахстанской областей стало больше грузоотправительных тупиков. Появились склады хранения, мельницы, и все они были зациклены на российскую пшеницу. Сейчас уже этого нет, а зерно завозят только железнодорожными путями. Но опять же в октябре разрешат провоз на автотранспорте и тогда неизвестно, что будет», — говорит Алибек Атай.

По его словам, есть несколько причин, почему в правительстве до сих пор никак не могут решить проблему серого импорта. Среди основных: слабо оснащенные пограничные пункты, неоцифрованные до конца сельхозполя, завышение статистики полученного урожая. Как правило, говорит эксперт, акиматы в районах требуют, чтобы в отчетах фермеры указывали спущенные им сверху цифры. А уже несуществующее количество недобросовестные фермеры могли заполнить российским зерном. Буквально недавно на проблему приписок  и негласного соревнования между акиматами министру сельского хозяйства указали и депутаты.  

«Космомониторинг, науку нужно развивать, тогда у нас не было бы приписок. Это самая главная причина. Потому что пока есть поле для приписок по документам. Если фермеры реально будут сдавать столько пшеницы, сколько вырастили, тогда и не будет пустых документов. Не будет возможности приписать какой-то объём. Сейчас мы понимаем, что фермеры 20-30 % приписывают к своему урожаю в своих отчетах. В этом заинтересованы районные и сельские акиматы. Они отчитываются, что все красиво, на самом деле, этой пшеницы нет, но в течение года она появляется благодаря серому импорту», — отмечает Алибек Атай.

При этом уличить фермеров по этой причине в продаже серой пшеницы удается нечасто. Как правило, экспортерам они предоставляют весь пакет сопроводительных документов. Проверить же их подлинность трейдеры не могут. Тем не менее, по словам представителя национальной Ассоциации экспортеров, во всей этой ситуации крайними пытаются сделать именно их.

«Сейчас идет такая тенденция, что сделки двух или трехлетней давности признаются недействительными со стороны департамента госдоходов. Очень много компаний попадают на дополнительный КПН. А все суды по умолчанию, как под копирку, выносят решение, практически не принимая никакие доводы со стороны экспортеров. А экспортеры подкованы полностью, они имеют весь пакет документов, то есть, что они купили, что это все электронно было проведено, что этот товар был оприходован, оплачены налоги все сопутствующие и косвенные. Этот товар был экспортирован за рубеж, он  прошел таможенное декларирование, получил фитокарантинный сертификат, полный пакет документов на руках, но суды говорят, что товара не было, что сделка фиктивная. Абсурд», — недоумевает представитель ассоциации.

В судах, говорит он, все официальные документы из банков или из тех же акиматов не берут в расчет, а сделки чаще всего признают фиктивными. За помощью в национальную Ассоциацию экспортеров уже обратились более 40 компаний.

«Правительство допустило эту ситуацию, а теперь не хочет признавать этого, и вину перекладывает на добросовестных экспортеров. Фирмы-однодневки, которые были, их просто нет, они испарились, экспортировали объем и закрылись. Их  поймать уже невозможно, а нас легко, потому мы что уплачиваем налоги, мы платим зарплату, у нас люди, штат. Эти компании получают многомиллионные КПН, штрафы, соответственно, их оплачивать нечем, неоткуда, потому что реально таких фирм нет с таким запасом. Он должен либо с оборота вытаскивать, либо банкротится. Фирмы не будет, не будет рабочих мест, не будет косвенных налогов, которые он платил, все фирма закроется, обанкротится, государство от этого вряд ли выиграет», — отмечает Алибек Атай.

По его словам, рассчитывать на правосудие в этом случае не приходится. Игнорируют их проблему и в надзорном органе. По закону, экспортеры имеют право на возмещение суммы налога на добавленную стоимость (НДС).  Процедура, к слову, не из простых. Теперь экспортеров зерна обвиняют в незаконном возврате НДС из бюджета. Как сообщили в комитете государственных доходов министерства финансов страны, экспортерам не вернули почти 170 миллиардов тенге. Именно на такую сумму заявки посчитали необоснованными.

«Всего за 2021-2022 год экспортерам зерновой продукции возмещение НДС составила 135,9 миллиардов тенге из предъявленной к возврату суммы в размере 305,6 миллиардов тенге  по 250 экспортерам. Не подтверждено к возврату 169,6 миллиардов тенге по расхождениям СУР, по недопоступлении валютной выручки, из-за неправомерного отнесения в зачет, из-за излишне предъявленной суммы к возврату и по другим причинам», — сообщили в КГД.

Как следует из официального ответа, чтобы решить проблему теневого оборота, Минфин предлагает установить минимальный уровень цен на импортируемое зерно из стран ЕАЭС. Свои предложения они направили в министерство торговли. Кроме того, в КГД готовятся к установке навигационных пломб на заезжающие в страну фуры. Это позволило бы, отмечают в комитете, отслеживать перемещение зерна по территории Казахстана в режиме реального времени. А еще определять фактического получателя товара.

«В свою очередь, относительно вопроса оснащения автомобильных пунктов пропуска электронными весами и камерами видеонаблюдения комитетом ранее запрошенные и необходимые материалы направлены в Министерство индустрии и инфраструктурного РК», — проинформировали в КГД.

В комитете также добавили, что с апреля в Казахстане действует запрет на ввоз пшеницы автотранспортом сроком на шесть месяцев. Депутат мажилиса Айдарбек Ходжаназаров считает, что действующее ограничение нужно продлить.

«Серый импорт, на самом деле, очень сильно давит на цену наших производителей. Примерно, сейчас пшеница стоит в районе 80-82, максимум 85 тысяч, а импортная «серая» около 55 тысяч тенге. Соответственно, цена намного ниже, чем себестоимость. Что осложняет в целом работу наших товаропроизводителей. Они надеются на хороший урожай, и нам, чтобы обеспечить им правильный экспорт, необходимо продолжить ограничение ввоза транспортом российской пшеницы. Почему это важно? Потому что, с одной стороны, мы говорим, должен быть свободный рынок. А с другой стороны, Россия уже «завоевала» рынок Кыргызстана полностью, он не наш, Кыргызстан берет только российскую пшеницу, узбеков за этот год они уже частично завоевали, если мы потеряем наши традиционные рынки — Узбекистан, Афганистан, Кыргызстан, Таджикистан, наша пшеница вообще нужна не будет никому. И вот тогда наши все сельхозники обанкротятся. Это будет трагедия», — предостерегает парламентарий.  

А рисков, судя по всему, не мало. Коллега Айдарбека Ходжаназарова сенатор Али Бектаев в своем недавнем депутатском запросе привел неутешительные данные. Средняя урожайность казахстанской пшеницы значительно отстает от показателей стран-партнеров ЕАЭС.

«В Казахстане в показателях фактического объема производства зерновых и зернобобовых культур ежегодно не наблюдается признаков устойчивого роста. Напротив, в объеме последних 11 лет (в годовом исчислении 2022 года) идет снижение показателя по сравнению с уровнем каждого предыдущего года», — констатирует депутат сената.

В России же за последние годы посевные площади зерновых только увеличиваются. У соседей высокий экспортный потенциал. Принятые Минсельхозом меры по ограничению ввоза российской пшеницы автомобильным транспортом, по мнению сенатора, не принесли положительного импульса рынку, хотя и позволили немного сдержать дальнейшее снижение цен. Пока в ведомстве не ответили, будут ли продлевать запрет предстоящей осенью.  Министр сельского хозяйства Ербол Карашукеев настроен оптимистично и рассчитывает на хороший урожай. Проблему же приписок он обещает решить в течение двух лет. Для этого в правительстве даже создали рабочую группу.

«Сделать перепись и привести все в порядок — дело очень сложное. Это то, что позволит нам принимать правильные решения, поэтому в течение 2-3 лет мы должны провести перепись в сельском хозяйстве, выявить все имеющиеся  неточности и исправить их. Есть поручение премьер-министра, создана специальная рабочая группа», — сообщил Ербол Карашукеев.

В этом году впервые планируется буквально провести космомониторинг полей каждого  фермера. По словам начальника управления мониторинга сельхозпроизводства АО НК «Қазақстан Ғарыш сапары» Гульнары Кабжановой,  вскоре их специалисты представят прогноз будущего урожая.  

«В рамках космомониторинга дается оценка посевных площадей, спутниковая оценка состояния, засоренности, а также прогнозная урожайность за месяц до уборки в период максимального роста и развития растений. Все материалы предоставляли в разрезе районов. С этого года по запросу АСПиР (Агентство по стратегическому планированию и реформам)  будем предоставлять мониторинг сельхозпроизводства  в разрезе каждого сельхозпроизводителя», — пояснила она.

Фермеров страны обязали иметь оцифрованные картографические карты полей. В них указываются данные о площади и границах. И это обязательное условие для того, чтобы  получить субсидии государства.

При этом Гульнара Кабжанова отмечает, что ранее занесенная в базу информация о границах полей фермеров не совпадают с полученными ими данными. Поэтому сейчас они работают над устранением расхождений. Между тем, казахстанские экспортеры говорят, что если они не смогут  оспорить предъявленные иски, то им придется просто объявить себя банкротами. Ситуация очень сложная. Сейчас трейдеры пытаются объединить свои усилия, чтобы не пришлось закрывать годами наработанный бизнес.

Подпишитесь на наш Telegram-канал и узнавайте новости первыми!

Израиль видит новые силы США, в том числе военные, для сдерживания Ирана подготовка к возможным военным действиям, заявил во вторник высокопоставленный израильский чиновник.

Вице-премьер-министр Израиля Моше Яалон на еженедельном заседании кабинета министров в Иерусалиме 23 августа 2009 г. REUTERS/Jim Hollander/Pool

Замечания вице-премьер-министра Моше Яалона свидетельствуют об осторожном оптимизме в отношении перспектив международного урегулирования десятилетнего противостояния с Тегераном, хотя Израиль заявляет, что по-прежнему готов атаковать своего заклятого врага в одиночку в крайнем случае.

Премьер-министр Израиля Биньямин Нетаньяху наметил на середину 2013 года «красную черту» для решения иранского проекта по обогащению урана. Запад заявляет, что эта программа направлена ​​на разработку средств для создания атомных бомб. Тегеран это отрицает, заявляя, что обогащает уран исключительно для мирных гражданских целей.

Во вторник Яалон сообщил армейскому радио, что Израиль знал, что до ноябрьских выборов в США не будет никаких движений по этому вопросу, но ожидал возобновления усилий после голосования.

«И действительно, он был обновлен», — сказал он.

Он сослался на контакты между шестью мировыми державами — США, Россией, Францией, Китаем, Великобританией и Германией — и Ираном о проведении новых ядерных переговоров, продолжающихся санкциях против Ирана, «и приготовлениях, в основном пока американских, к возможности эта военная сила должна быть использована».

Яалон не стал уточнять. Другой израильский чиновник сообщил Рейтер, что министр в основном имел в виду недавнюю военную мобилизацию США в Персидском заливе.

На прошлой неделе власти заявили, что надеются вскоре договориться с Ираном о том, когда и где встретиться. Были предположения, что это может произойти в этом месяце, хотя сейчас более вероятным кажется январь.

Но во вторник высокопоставленный ядерный чиновник Ирана, звучавший вызывающе, заявил, что обогащение урана до 20-процентной чистоты не будет остановлено — повышенный порог, встревоживший иностранных участников переговоров.

Похожие репортажи

Бывший командующий вооруженными силами, принадлежащий к правой партии Нетаньяху «Ликуд», Яалон поставил под сомнение решимость Обамы в отношении Ирана во время первого президентского срока демократов. Напротив, министр обороны Израиля Эхуд Барак, единственный центрист в коалиционном правительстве Нетаньяху, выступал в пользу Обамы.

Яалон — кандидат на пост преемника Барака, объявившего об уходе из политики после выборов в Израиле 22 января.

В понедельник Барак подтвердил решимость Израиля лишить Иран возможности создать бомбу. Израиль, который, по широко распространенному мнению, обладает единственным атомным арсеналом на Ближнем Востоке, видит в Иране, вооруженном ядерным оружием, смертельную угрозу.

Перспектива односторонних авиаударов Израиля и последующего ответного удара со стороны Ирана, крупного экспортера нефти, и его союзников-исламистов-партизан в Ливане и Газе беспокоит мировые державы, отчасти потому, что это может дестабилизировать хрупкую глобальную экономику.

Выступая перед еврейскими лидерами в Нью-Йорке, Барак признал ограниченность израильских сил против отдаленных, рассредоточенных и хорошо защищенных ядерных объектов Ирана.

«Иранцы намеренно пытаются создать уровень резервирования и защиты для своей программы, которую мы называем «зоной иммунитета». Как только они войдут в зону иммунитета, судьба будет не в наших руках», — сказал Барак.

«Государство Израиль было основано именно для того, чтобы наша судьба оставалась в наших руках».

Термин Барака «избыточность» относится к убеждению Израиля в том, что Иран стремится создать запасы необработанного урана и центрифуг для обогащения в масштабах, которые позволили бы ему восстановить независимый ядерный потенциал в случае нападения на его известные объекты.

Ядерная инфраструктура Ирана подвергается саботажу, в том числе кибервойнам. Министерство связи и технологической информации Ирана заявило в воскресенье, что оно выявило «новое целенаправленное вредоносное ПО для уничтожения данных». В заявлении министерства не говорится, какие компьютерные системы могли быть затронуты.

Хотя Израиль публично не взял на себя ответственность за такие инциденты, Яалон сказал, что их может быть больше, параллельно с глобальным экономическим давлением.

«Иногда там случаются сбои — черви, вирусы, взрывы. Поэтому этот график не обязательно хронологический. Это более технологично», — сказал он Армейскому радио.

«Мы, без сомнения, внимательно следим за развитием программы там, чтобы они не попытались перейти красную черту».

Дополнительный отчет Егане Торбати; Написание Дэна Уильямса; Монтаж Марк Генрих

Каспазы разрушают ядерно-цитоплазматический барьер

. 2000 27 ноября; 151 (5): 951-9.

doi: 10.1083/jcb.151.5.951.

Л Фалейро
¹
, Ю. Лазебник

принадлежность

• ¹ Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк, 11724, США.

• PMID:

  11085998

• PMCID:

  PMC2174353

• DOI:

  10.1083/jcb.151.5.951

Бесплатная статья ЧВК

Л. Фалейро и др.

Джей Селл Биол.

2000 .

Бесплатная статья ЧВК

. 2000 27 ноября; 151 (5): 951-9.

doi: 10.1083/jcb.151.5.951.

Авторы

Л Фалейро
¹
, Ю. Лазебник

принадлежность

• ¹ Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк, 11724, США.

• PMID:

  11085998

• PMCID:

  PMC2174353

• DOI:

  10. 1083/jcb.151.5.951

Абстрактный

Во время апоптоза каспазы, семейство протеаз, разбирают клетку, расщепляя набор белков. Каспаза-3 играет главную роль в разборке ядра путем процессинга нескольких ядерных субстратов. Вопрос в том, как каспаза-3, обычно цитоплазматическая, получает доступ к своим ядерным мишеням. Было высказано предположение, что каспаза-3 активно транспортируется в ядро ​​через ядерные поры. Мы обнаружили, что каспаза-9, который активируется раньше, чем каспаза-3, прямо или косвенно инактивирует ядерный транспорт и увеличивает предел диффузии ядерных пор. Это увеличение позволяет каспазе-3 и другим молекулам, которые не могут пройти через ядерные поры в живых клетках, проникать или покидать ядро ​​во время апоптоза путем диффузии. Следовательно, каспаза-9 способствует разборке клеток, разрушая ядерно-цитоплазматический барьер.

Цифры

Рисунок 1

Каспаза-3 и каспаза-3-GFP имеют сходные…

Рисунок 1

Каспаза-3 и каспаза-3-GFP имеют сходную функцию и локализацию в клетках MCF-7. (А) Каспаза-3…

Рисунок 1

Каспаза-3 и каспаза-3-GFP имеют сходную функцию и локализацию в клетках MCF-7. (A) Каспаза-3 и каспаза-3-GFP эктопически экспрессируются в MCF-7 на уровнях, сходных с уровнями каспазы-3 в других клеточных линиях карциномы молочной железы. Были проанализированы общие клеточные лизаты, полученные из MCF-7/C3, MCF-7/C3S (каталитически неактивный мутант C3), MCF-7/C3-GFP и MCF-7/C3S-GFP, а также трех указанных клеточных линий карциномы молочной железы. иммуноблотингом с использованием моноклональных антител к каспазе-3. На каждую дорожку загружали 50 мкг лизата. (B) Клетки MCF-7, которые экспрессируют либо каспазу-3, либо каспазу-3-GFP, подвергаются типичной апоптотической конденсации хроматина. Клетки MCF-7, MCF-7/C3 и MCF-7/C3-GFP обрабатывали 50 мкМ цисплатином в течение 12 ч, фиксировали, окрашивали DAPI для визуализации хроматина и оценивали с помощью флуоресцентной микроскопии на предмет типичной апоптотической конденсации хроматина (указанные с белыми стрелками). 60% клеток, экспрессирующих C3, и 64% клеток, экспрессирующих C3-GFP, имели типичную апоптозную морфологию ядра, которая не наблюдалась в клетках MCF-7. (C) Каспаза-3 и каспаза-3-GFP имеют сходную цитоплазматическую локализацию. Каспазу-3 в клетках MCF-7, MCF-7/C3 и MCF-7/C3-GFP визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием моноклонального антитела к каспазе-3, как описано в разделе «Материалы и методы». Как и ожидалось, каспаза-3 не была обнаружена в клетках MCF-7.

Рисунок 2

Каспаза-3 перемещается в ядро…

Рисунок 2

Каспаза-3 перемещается в ядро ​​во время апоптоза после активации каспазы-9. (A) Каспаза-3 транслоцирует…

фигура 2

Каспаза-3 перемещается в ядро ​​во время апоптоза после каспазы-9активация. (A) Каспаза-3 перемещается в ядро ​​во время апоптоза. Клетки MCF-7/C3-GFP обрабатывали 50 мкМ цисплатином в течение 8 ч, фиксировали и окрашивали йодидом пропидия (PI). Каспаза-3-GFP (GFP, зеленый) и ядра (PI, красный) визуализировали с помощью конфокальной микроскопии. Стрелкой указана клетка, в которой хроматин начинает конденсироваться. Клетки на более поздних стадиях апоптоза было трудно наблюдать, потому что они сморщивались и отделялись. (B-D) Транслокация каспазы-3 в ядро ​​во время апоптоза требует наличия каспазы-9активность. (B) Клетки MCF-7/C3-GFP и MCF-7/C3-GFP, экспрессирующие доминантно-негативный мутант каспазы-9 (MCF-7/C3-GFP/C9DN), обрабатывали 50 мкМ цисплатина в течение 8 часов. Клетки окрашивали DAPI для визуализации хроматина и антителом к ​​цитохрому с для обнаружения высвобождения этого белка из митохондрий. GFP, DAPI и цитохром с визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии. Белые стрелки указывают на клетки с высвобожденным цитохромом с. (C) Скорость транслокации каспазы-3 в ядро ​​аналогична скорости конденсации хроматина и высвобождения цитохрома с из митохондрий. Клетки MCF-7/C3-GFP обрабатывали и окрашивали, как в B, за исключением того, что клетки фиксировали в указанное время. Оценивали частоту транслокации C3-GFP в ядро, высвобождение цитохрома с и изменение структуры хроматина. (D) Доминантно-негативный мутант каспазы-9(C9DN) предотвращает транслокацию C3-GFP в ядро ​​и конденсацию хроматина. Клетки MCF-7/C3-GFP и MCF-7/C3-GFP/C9DN обрабатывали и окрашивали, как в B. Оценивали частоту транслокации C3-GFP в ядро, высвобождение цитохрома с и изменение структуры хроматина. Для каждого измерения во всех опытах подсчитывали 200–250 клеток. Средние значения трех экспериментов представлены в C и D.

Рисунок 5

Ядерные поры в апоптотических клетках…

Рисунок 5

Ядерные поры в апоптотических клетках не обнаруживаются антителами к ядерным порам…

Рисунок 5

Ядерные поры в апоптотических клетках не обнаруживаются антителами к белкам ядерных пор. MCF-7 обрабатывали 50 мкМ цисплатином в течение 10 ч, фиксировали и окрашивали DAPI для визуализации хроматина и антителами к белку ядерной поры np62 (А) или моноклональным антителом 414, которое реагирует с белками множественных ядерных пор (В). Белые стрелки указывают на клетки, утратившие окрашивание ядерных пор и имеющие конденсированный хроматин.

Рисунок 3

Нарушение ядерно-цитоплазматического барьера при…

Рисунок 3

Ядерно-цитоплазматический барьер разрушается при апоптозе. (A) Активация каспазы-9 приводит к высвобождению…

Рисунок 3

При апоптозе нарушается ядерно-цитоплазматический барьер. (А) Активация каспазы-9приводит к высвобождению NLS-GFP во время апоптоза. Клетки MCF-7 и MCF-7/C9DN временно трансфицировали NLS-GFP. Через 18 ч после трансфекции клетки обрабатывали 50 мкМ цисплатином в течение 10 ч, фиксировали и окрашивали поликлональными антителами к цитохрому с и DAPI. Белые стрелки указывают на клетки, высвобождающие цитохром с. Клетки оценивали по высвобождению цитохрома с, высвобождению ядерного GFP и изменению структуры хроматина (B). Обратите внимание, что экспрессия C9DN вызывает уменьшение соотношения между клетками, высвобождающими цитохром с, и NLS-GFP. Для каждого измерения во всех опытах подсчитывали 200–250 клеток. Показан представитель трех экспериментов. (С) Активация каспазы-9приводит к высвобождению Ran из ядра. Клетки MCF-7 и MCF-7/C9DN обрабатывали, как в А, фиксировали и окрашивали моноклональными антителами к Ran, поликлональными антителами к цитохрому с и DAPI для визуализации ядер. Антитела визуализировали с помощью конъюгированных с Alexa488 антимышиных и конъюгированных с Alexa596 антикроличьих вторичных антител. Белые стрелки указывают на клетки с высвобожденным цитохромом с. Клетки оценивали по высвобождению цитохрома с, потере ядерного окрашивания Ran и изменению структуры хроматина (D). Обратите внимание, что выражение C9ДН вызывает снижение соотношения между клетками, выделяющими цитохром с и Ran. Для каждого измерения во всех опытах подсчитывали 200–250 клеток. Показан представитель трех экспериментов.

Рисунок 4

Размер ядерных пор увеличивается во время…

Рисунок 4

Размер ядерных пор увеличивается во время апоптоза. (A) Клетки MCF-7 временно трансфицировали…

Рисунок 4

Размер ядерных пор увеличивается во время апоптоза. (A) Клетки MCF-7 временно трансфицировали димером GFP (GFP2X), пентамером (GFP5X) или слиянием GFP с β-галактозидазой (GFP-β-gal). Через 18 ч после трансфекции клетки обрабатывали 50 мкМ цисплатином в течение 10 ч, фиксировали и окрашивали антителами против цитохрома с и DAPI. Белые стрелки указывают на клетки с высвобожденным цитохромом с. Клетки оценивали по высвобождению цитохрома с и присутствию GFP в ядре (В). Было проведено три эксперимента с GFP2× и GFP5× и два эксперимента с GFP-β-gal. Для каждого эксперимента подсчитывали 200–250 клеток. Показан представитель одного из таких экспериментов.

Рисунок 6

Требуется активность каспазы-9…

Рисунок 6

Активность каспазы-9 необходима для изменения ядерной проницаемости, даже если…

Рисунок 6

Активность каспазы-9 необходима для изменения ядерной проницаемости, даже если апоптоз индуцируется активацией каспазы-8. Каспаза-9активность необходима для высвобождения Ran из ядра во время апоптоза, индуцированного TNF-α. Клетки MCF-7 и MCF-7/C9DN обрабатывали 35 нг/мл TNF-α и 10 мкг/мл циклогексимида в течение 6 ч, фиксировали и окрашивали моноклональными антителами к Ran и поликлональными антителами к цитохрому с. Белые стрелки указывают на клетки, высвобождающие цитохром с. Клетки оценивали по высвобождению цитохрома с, потере ядерного окрашивания Ran и изменению структуры хроматина (В). Отметим, что экспрессия C9DN вызывает уменьшение соотношения между клетками, высвобождающими цитохром с и Ran. Процессинг каспаз-9, -8 и -7 было подтверждено иммуноблоттингом (С). Предшественники каспаз обозначены черными, а процессированные каспазы — белыми стрелками. Обратите внимание, что C9DN предотвращает процессинг каспаз-9 и -7, но не каспазы-8. Было проведено два эксперимента, и для каждого эксперимента было подсчитано >200 клеток.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Корреляция между ядерно-цитоплазматическим транспортом и зависимым от каспазы-3 разрушением ядерных пор во время апоптоза.

  Кильмарк М., Рустум С., Эрикссон С., Бекман М., Иверфельдт К., Халльберг Э.

  Кильмарк М. и соавт.
  Разрешение ячейки опыта. 2004 г., 15 февраля; 293(2):346-56. doi: 10.1016/j.yexcr.2003.10.019.
  Разрешение ячейки опыта. 2004.

  PMID: 14729472

• Регуляция апоптоза путем субклеточного перемещения каспаз.

  Прохорова Е.А., Копеина Г.С., Лаврик И.Н., Животовский Б.

  Прохорова Е.А. и соавт.
  Научный представитель 2018 г. 15 августа; 8 (1): 12199. doi: 10.1038/s41598-018-30652-x.
  Научный представитель 2018.

  PMID: 30111833
  Бесплатная статья ЧВК.

• Каспаза-3 необходима для процессинга прокаспазы-9 и индуцированного цисплатином апоптоза клеток рака молочной железы MCF-7.

  Блан С, Деверо К.Л., Краевски С., Янике Р.У., Портер А.Г., Рид Д.К., Джагги Р., Марти А.

  Блан С. и др.
  Рак рез. 2000 15 августа; 60 (16): 4386-90.
  Рак рез. 2000.

  PMID: 10969782

• Изменения в ядерно-цитоплазматическом транспорте при апоптозе: ведущее место занимают каспазы.

  Копеина Г.С., Прохорова Е.А., Лаврик И.Н., Животовский Б.

  Копеина Г.С. и соавт.
  Селл Пролиф. 2018 окт;51(5):e12467. doi: 10.1111/cpr.12467. Epub 2018 26 июня.
  Селл Пролиф. 2018.

  PMID: 29947118
  Бесплатная статья ЧВК.

  Обзор.

• Caspases: эксперты по разрушению сотовой связи.

  Криг Э.М., Мартин С.Дж.

  Крей Э.М. и соавт.
  Биохим Сок Транс. 2001 ноябрь; 29 (часть 6): 696-702. doi: 10.1042/0300-5127:0290696.
  Биохим Сок Транс. 2001.

  PMID: 11709057

  Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

• Независимая роль каспаз и Bik в усилении репликации вируса гриппа А в эпителиальных клетках дыхательных путей и у мышей.

  Сони С., Уолтон-Филипчак С. , Нхо Р.С., Тесфаигзи Ю., Мебрату Ю.А.

  Сони С. и др.
  Вирол Дж. 2023 24 апреля; 20 (1): 78. doi: 10.1186/s12985-023-02027-w.
  Вирол Дж. 2023.

  PMID: 37095508
  Бесплатная статья ЧВК.

• Синергический эффект ингибитора HDAC хидамида с кладрибином на остановку клеточного цикла и апоптоз путем нацеливания на ось HDAC2/c-Myc/RCC1 при остром миелоидном лейкозе.

  Гу С., Хоу И., Доват К., Доват С., Сонг С., Гэ З.

  Гу С. и др.
  Опыт Гематол Онкол. 2023 27 февраля; 12(1):23. doi: 10.1186/s40164-023-00383-5.
  Опыт Гематол Онкол. 2023.

  PMID: 36849955
  Бесплатная статья ЧВК.

• Почкование ядерной оболочки и его клеточные функции.

  Койенхоф К.С., Колер В., Броскамп Ф., Панагаки Д., Шпезе С.Д., Бюттнер С., Хёог Й.Л.

  Кеенхоф К. С. и соавт.
  Ядро. 2023 Декабрь; 14 (1): 2178184. дои: 10.1080/19491034.2023.2178184.
  Ядро. 2023.

  PMID: 36814098
  Бесплатная статья ЧВК.

• Биоинформатика и функциональный анализ новой последовательности ядерной локализации нуклеопротеина вируса гриппа А.

  Нгуен NLT, Панте Н.

  Нгуен НЛТ и др.
  Клетки. 22 сентября 2022 г .; 11 (19): 2957. doi: 10.3390/cells11192957.
  Клетки. 2022.

  PMID: 36230922
  Бесплатная статья ЧВК.

• Первобытный механизм толерантности к высыханию, основанный на гликолевой кислоте, спасает нейроны млекопитающих от ишемии за счет снижения внутриклеточной кальций-опосредованной эксайтотоксичности.

  Човсепян А., Берхтольд Д., Вайнек К., Мамрак У., Рамирес Альварес И., Денинг Ю., Голубчик Д., Вайтбрехт Л., Дамес С., Эйллери М., Фернандес-Санц С. , Гаевски З., Дитрих М., Яновский М., Фалкай П., Вальчак П., Плеснила Н., Майзель А., Пан-Монтойо Ф.

  Човсепян А. и др.
  Adv Sci (Вейн). 2022 фев; 9(4):e2103265. doi: 10.1002/advs.202103265. Epub 2021 14 декабря.
  Adv Sci (Вейн). 2022.

  PMID: 34904402
  Бесплатная статья ЧВК.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

Рекомендации

1. 1. Аллен Т. Д. Ультраструктурный аспект гибели клеток. В: Potten CS, редактор. Перспективы гибели клеток млекопитающих. Издательство Оксфордского университета; Оксфорд, Великобритания: 1987. стр. 39–65.

2. 1. Ашкенази А., Диксит В.М. Сигнализация и модуляция рецепторов смерти. Наука. 1998; 281:1305–1308.

      —

      пабмед

3. 1. Budihardjo I. , Oliver H., Lutter M., Luo X., Wang X. Биохимические пути активации каспазы во время апоптоза. Анну. Преподобная ячейка. Дев. биол. 1999;15:269–290.

      —

      пабмед

4. 1. Buendia B., Santa-Maria A., Courvalin J.C. Каспазозависимый протеолиз интегральных и периферических белков ядерных мембран и белков комплекса ядерных пор при апоптозе. Дж. Клеточные науки. 1999; 112:1743–1753.

      —

      пабмед

5. 1. Чандлер Дж. М., Коэн Г. М., Макфарлейн М. Различное субклеточное распределение каспазы-3 и каспазы-7 после индуцированного Fas апоптоза в печени мыши.